【摘要】：目的探討人喉癌細(xì)胞Hep2細(xì)胞來源外泌體(Hep2-exo)負(fù)載樹突細(xì)胞(DC)后體外刺激細(xì)胞毒T細(xì)胞對(duì)Hep2細(xì)胞的殺傷作用。方法利用蔗糖密度梯度超速離心法從Hep2細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離Hep2-exo。透射電子顯微鏡鑒定Hep2-exo形態(tài),Western印跡分析Hep2-exo表面CD9分子表達(dá)。分離培養(yǎng)喉癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的DC,流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表型。用MTT法檢測(cè)負(fù)載Hep2-exo的DC刺激T淋巴細(xì)胞增殖情況及細(xì)胞毒T細(xì)胞對(duì)Hep2細(xì)胞的殺傷作用。結(jié)果透射電鏡下見Hep2-exo呈典型的杯狀,大小相對(duì)均一,平均直徑30~100 nm。Hep2-exo表面有CD9CD63分子表達(dá)。單個(gè)核細(xì)胞DC有CD1a分子表達(dá)說明誘導(dǎo)成功,邊緣有絨毛樣突起,呈典型的PC形態(tài)。負(fù)載Hep2-exo的DC刺激T細(xì)胞增殖能力及T細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng)明顯強(qiáng)于未負(fù)載Hep2-exo的DC(P0.05)。結(jié)論負(fù)載Hep2-exo的DC能促進(jìn)T細(xì)胞增殖,可體外誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞應(yīng)答抑制喉癌細(xì)胞生長(zhǎng)。
【圖文】：

p2細(xì)胞分泌的Exo呈圓形或橢圓形，大小相對(duì)均一，其外可見有脂質(zhì)膜包裹，內(nèi)部為低電子密度物質(zhì)，平均直徑30～100nm，同國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道〔1，2〕一致。Hep2細(xì)胞裂解物和Hep2-exo均表達(dá)CD9和CD63分子，Hep2-exo表達(dá)CD9和CD63灰度值比Hep2細(xì)胞裂解物高。見圖1，圖2。2.2DC表型分析來源于PBMC的CD14+經(jīng)過細(xì)胞因子(rh-GM-CSF，，rhIL-4，TNF-α)誘導(dǎo)培養(yǎng)至第7天，顯微鏡見大部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，出現(xiàn)毛刺樣突起，呈現(xiàn)典型的樹枝狀突樣。通過流式細(xì)胞儀分析顯示DCs表面高表達(dá)CD1a分子，則證明DC誘導(dǎo)成功。見圖3。圖1Hep2細(xì)胞來源Exo電鏡圖(×20000)圖2Western印跡結(jié)果分析·1828·中國(guó)老年學(xué)雜志2017年4月第37卷

小相對(duì)均一，其外可見有脂質(zhì)膜包裹，內(nèi)部為低電子密度物質(zhì)，平均直徑30～100nm，同國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道〔1，2〕一致。Hep2細(xì)胞裂解物和Hep2-exo均表達(dá)CD9和CD63分子，Hep2-exo表達(dá)CD9和CD63灰度值比Hep2細(xì)胞裂解物高。見圖1，圖2。2.2DC表型分析來源于PBMC的CD14+經(jīng)過細(xì)胞因子(rh-GM-CSF，rhIL-4，TNF-α)誘導(dǎo)培養(yǎng)至第7天，顯微鏡見大部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，出現(xiàn)毛刺樣突起，呈現(xiàn)典型的樹枝狀突樣。通過流式細(xì)胞儀分析顯示DCs表面高表達(dá)CD1a分子，則證明DC誘導(dǎo)成功。見圖3。圖1Hep2細(xì)胞來源Exo電鏡圖(×20000)圖2Western印跡結(jié)果分析·1828·中國(guó)老年學(xué)雜志2017年4月第37卷
【作者單位】： 永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部;湖南科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：永州市2015年度第二批指導(dǎo)性科技計(jì)劃項(xiàng)目(永科發(fā)[2015]10號(hào))
【分類號(hào)】：R739.65

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本文編號(hào)：2551181