【摘要】：目的：通過鑒定臨床角膜血管膜標(biāo)本的上皮細胞表型,檢測新生血管相關(guān)因子的表達情況,探討Avastin等抗VEGF藥物治療角膜新生血管療效差異懸殊的可能原因,篩選角膜新生血管治療相關(guān)的靶點因子,并通過小鼠角膜新生血管模型進行驗證。 方法：本研究共收集26例新生血管性角膜病患者的角膜新生血管膜組織,包括一次血管膜組織19例,其中化學(xué)傷8例、熱燒傷7例、爆竹炸傷3例、眼瘢痕性類天皰瘡1例；二次血管膜組織7例,其中化學(xué)傷5例、熱燒傷1例、Stevens-Johnson綜合癥1例。通過免疫組織化學(xué)方法,檢測血管膜中上皮細胞的表型,并與角膜和結(jié)膜上皮進行比較。應(yīng)用基因表達芯片篩選血管膜中高表達的新生血管調(diào)控因子,并通過實時定量PCR進行驗證。最后,通過建立縫線、堿燒傷、貫通傷及接觸鏡誘導(dǎo)的小鼠角膜新生血管模型,觀察角膜新生血管的動態(tài)生長情況,檢測VEGF等新生血管關(guān)鍵調(diào)控因子的表達變化,對臨床標(biāo)本的結(jié)果進行驗證。 結(jié)果：通過免疫組織化學(xué)染色對一次和二次血管膜組織的上皮細胞進行表型鑒定,發(fā)現(xiàn)血管膜的上皮表現(xiàn)為角蛋白CK3-、CK19+、P63+/-,與正常結(jié)膜上皮的表型類似。在24例臨床血管膜標(biāo)本中(化學(xué)傷13例、熱燒傷8例、爆竹炸傷3例),篩選并驗證出15個新生血管相關(guān)的關(guān)鍵調(diào)控因子,但均未檢測到VEGF的高表達。通過對縫線、堿燒傷、貫通傷及接觸鏡誘導(dǎo)的角膜新生血管小鼠模型的檢測發(fā)現(xiàn),四種模型的小鼠角膜中VEGF的表達呈現(xiàn)相似的變化趨勢,術(shù)后早期(1-14天)VEGF表達均有不同程度的增高,但隨后迅速降低至正常水平。通過對臨床標(biāo)本篩選出的15個新生血管調(diào)控因子的驗證,發(fā)現(xiàn)其中11個因子在小鼠模型中呈現(xiàn)相似的表達趨勢,按功能分為生長因子類(PLXDC1、TGFB2、EREG)、細胞因子及受體類(IL6、IL1β、TNFRSF12a)、蛋白酶類(MMP2、FAP)、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(NOTCH4、HEY2)和SFRP2。 結(jié)論：臨床新生血管性角膜病患者的角膜血管膜組織,其上皮均呈現(xiàn)結(jié)膜表型,但血管膜組織中血管調(diào)控關(guān)鍵因子的表達與結(jié)膜差異巨大,血管膜組織是一種具有結(jié)膜表型的異常炎癥組織,其內(nèi)血管生長的調(diào)控機制不同于結(jié)膜。臨床標(biāo)本和動物實驗結(jié)果表明,VEGF在角膜損傷后的急性期表達增高,但在慢性期無明顯表達,由此提出,使用Avastin等以VEGF為靶點的藥物治療角膜新生血管應(yīng)在合適的時間使用。此外,通過臨床標(biāo)本和動物模型篩選到的11個新生血管相關(guān)調(diào)控因子可作為新的干預(yù)靶點進行進一步研究。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R77

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本文編號：2540784