【摘要】：目的1.檢測地塞米松(DXM)、干擾素α-2b(IFN-α2b)、絲裂霉素(MMC)、5氟尿嘧啶(5-FU)、環(huán)孢素A(CSA)、他克莫司(FK-506)這六種臨床常用藥物對體外培養(yǎng)人復發(fā)翼狀胬肉成纖維細胞(RHPFs)的半數(shù)抑制濃度(IC50)。2.觀察半數(shù)抑制濃度條件下地塞米松(DXM)、干擾素α-2b(IFN-α2b)、絲裂霉素(MMC)、5氟尿嘧啶(5-FU)、環(huán)孢素A(CSA)、他克莫司(FK-506)對體外培養(yǎng)的人復發(fā)翼狀胬肉成纖維細胞的抑制作用。方法1.實驗第一部分:于2015年5月至2016年7月收集在天津醫(yī)科大學眼科醫(yī)院行復發(fā)性翼狀胬肉切除術的患者術中切除組織標本7例7眼,采用組織塊培養(yǎng)法分離和常規(guī)培養(yǎng)成纖維細胞,采用免疫組織化學法對培養(yǎng)細胞進行鑒定;2.實驗第二部分:加藥48h后CCK-8比色法檢測六種藥物對RHPFs的生長抑制率,未添加藥物的培養(yǎng)細胞作為對照組。分別計算其半數(shù)抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50);3.實驗第三部分:流式細胞儀檢測RHPFs在六種藥物IC50作用48h后細胞凋亡和細胞周期的變化;免疫組化SP法檢測RHPFs在六種藥物IC50作用48h后增生細胞核抗原(PCNA)的表達變化。結果1.培養(yǎng)的細胞為長梭形,旋渦狀排列,細胞中波形蛋白表達陽性,角蛋白無表達。2.CCK-8檢測結果計算出DXM、IFNα-2b、MMC、5-FU、CSA、FK-506對RHPFs的IC50分別為3.5×103mg/L、6.1×102mg/L、3.2×10-1mg/L、2.2×101mg/L、6.3×101mg/L、6.0×101mg/L。3.(1)流式細胞儀結果顯示RHPFs在六種藥物IC50劑量下分別作用48h后,IFNα-2b組、Cs A組、MMC組、FK506組、DXM組和5-FU組凋亡細胞比例分別為(35.00±3.21)%、(30.37±1.67)%、(26.11±0.75)%、(22.01±0.07)%、(20.95±1.68)%和(19.85±0.52)%,與對照組的(11.38±2.18)%比較細胞凋亡比例均明顯升高,誘導細胞凋亡能力由強到弱的藥物依次為IFN、CSA、MMC、FK-506、DXM、5-FU,其中FK-506、DXM、5-FU之間的差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),剩余各組間均有統(tǒng)計學差異(p0.05);(2)對照組G0/G1期、S期和G2/M期細胞比例分比為(85.64±2.62)%、(5.29±1.56)%和(2.73±2.66)%,各藥物組G0/G1期細胞比例明顯下降,S期和G2/M期細胞明顯升高,總體比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.05),說明細胞周期阻滯在S期和G2/M期,對細胞整個周期阻滯效果由強到弱依次為MMC、CSA、5-FU、DXM、IFN、FK-506,其中CSA和5-FU、5-FU和DXM、IFN和FK-506之間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),剩余各組之間差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05);(3)免疫組化SP法結果顯示對照組、FK506組、DXM組、5-FU組、IFN-α2b組、Cs A組和MMC組細胞中PCNA的陽性表達率分別為(95.00±2.00)%、(82.67±5.04)%、(80.00±2.78)%、(64.00±6.55)%、(38.00±3.00)%,(32.00±4.36)%和(29.67±3.02)%,總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=25.995,P0.01),各藥物組細胞中PCNA陽性表達率均明顯低于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.05)。PCNA陽性表達率下降程度由強到弱依次為MMC、CSA、IFN、5-FU、DXM、FK-506,其中CSA、IFN、MMC組間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),DXM、FK-506兩組間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),剩余各組間均有統(tǒng)計學差異(p0.05)。結論DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CSA、FK-506對復發(fā)翼狀胬肉成纖維細胞的增殖均存在抑制作用,并且促進其凋亡,其中MMC和CSA促進細胞凋亡和抑制其增殖的作用最為顯著。
【圖文】：

首櫓狒櫓窒潞螅嘈?5 天組織塊周圍有零星的細胞爬出（圖1A），以組織塊為中心向四周圍生長，細胞的形態(tài)多為長梭形、三角形，也可見部分細胞為多邊形、鋪路石形。13 天后組織塊間細胞長滿，彼此相互接觸抑制生長，此時可以進行細胞的傳代。細胞傳到第 2 代時長梭形、三角形的成纖維細胞中仍夾雜部分呈多邊形、鋪路石樣形狀的細胞，傳到第 3 代時成纖維細胞基本完全純化（圖 1B），未見明顯其他形狀的細胞，，此時細胞幾乎均為長梭形，細胞長滿時排列緊密，呈旋渦狀。體外培養(yǎng)的翼狀胬肉成纖維細胞經(jīng)免疫組化SP 法染色，波形蛋白表達陽性，位于成纖維細胞胞漿內，呈與成纖維細胞長軸一致的棕黃色網(wǎng)狀或束狀結構（圖 1C），胞核內波形蛋白表達為陰性，呈藍紫色；角蛋白在成纖維細胞的胞漿及胞核內均表達陰性，胞漿呈淺紫藍色，胞核呈深藍紫色。A B

G圖 2 各種藥物在 IC50 劑量下作用后 48 h 細胞凋亡的流式細胞圖 LL 象細胞，LR 象限：早、中期凋亡細胞，UR 象限：晚期凋亡細胞，UL 象限：細胞。A：對照組，B：CSA 組，C：IFN-a2b，D：MMC 組，E：FK-506 組DXM 組，G：5-FU 組。與對照組相比，每組早期和中晚期凋亡細胞率均增誘導細胞凋亡能力由強到弱依次為 IFN、CSA、MMC、FK-506、DXM、其中 FK-506、DXM、5-FU 組間兩兩比較凋亡率無統(tǒng)計學差異(P>0．05)，對照組、CSA、IFN、MMC 組兩兩比較凋亡率均有統(tǒng)計學差異（P<0.05)。組、CSA、IFN、MMC 組兩兩比較凋亡率均有統(tǒng)計學差異（P<0.05)另一方面，流式細胞儀檢測，藥物作用人復發(fā)翼狀胬肉成纖維細胞 細胞周期發(fā)生明顯變化，與未加藥的對照組相比，藥物組 G0/G1期細胞比例不同程度減少，S 期和 G2/M 期細胞比例均有不同程度增加，說明細胞周期在 S 期和 G2/M 期。SPSS 軟件分析結果顯示對于整個細胞周期，阻滯能力到弱依次為 MMC、CSA、5-FU、DXM、IFNα-2b、FK-506，其中 CSA 和5-FU 和 DXM、IFN 和 FK-506 之間對于成纖維細胞的細胞周期的阻滯效果
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R777.33

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 賀瑋;孫長青;于建國;齊世欣;;妥布霉素地塞米松、聚乙烯醇滴眼液聯(lián)合預防翼狀胬肉術后復發(fā)的療效觀察[J];安徽醫(yī)藥;2016年02期

2 馬可;呂仲平;廖晉英;王順清;鄧應平;;0.05%環(huán)孢素A滴眼液治療干眼的有效性和安全性臨床評價[J];中華實驗眼科雜志;2015年07期

3 白海霞;李彬;張浩;頊曉琳;申令;暢穎;;全反式維甲酸聯(lián)合長春新堿對視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞增生的抑制作用[J];中華實驗眼科雜志;2015年05期

4 胡寶珍;孫時英;;翼狀胬肉的發(fā)病機制和臨床治療的研究進展[J];醫(yī)學綜述;2014年06期

5 潘建兵;馮一帆;;環(huán)孢素A在防止翼狀胬肉術后復發(fā)中作用的meta分析[J];中華實驗眼科雜志;2013年11期

6 徐海龍;李勇;;5-FU聯(lián)合自體角膜緣干細胞移植治療復發(fā)性翼狀胬肉[J];國際眼科雜志;2013年02期

7 李勇;岳章顯;劉釗臣;徐海龍;;翼狀胬肉術后應用環(huán)孢素A和MMC的臨床對比研究[J];國際眼科雜志;2013年01期

8 曹亮;宋愈;吳瑩;孫志敏;黃黎黎;喻建鋒;;纖維蛋白膠在兔眼翼狀胬肉自體結膜瓣轉移手術中的應用[J];中華實驗眼科雜志;2012年04期

9 郭小東;孟晶;;曲安奈德治療復發(fā)性翼狀胬肉24例療效觀察[J];中國實用眼科雜志;2011年11期

10 張小文;李勇;袁慧敏;;5-氟尿嘧啶治療早期復發(fā)性翼狀胬肉的臨床研究[J];國際眼科雜志;2011年02期

本文編號：2532887