發(fā)布時(shí)間：2019-08-29 10:32

【摘要】：目的：探討髓樣細(xì)胞表達(dá)的激發(fā)受體-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1, TREM-1)在真菌性角膜炎中的表達(dá)及其作用的分子機(jī)制。方法：分別以真菌性角膜炎患者、真菌性角膜炎動(dòng)物模型為對(duì)象研究TREM-1在機(jī)體中的表達(dá)規(guī)律；體外培養(yǎng)人角膜上皮細(xì)胞,研究TREM-1在真菌感染的人角膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)和調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為三部分：(1)選擇2012年9月至2013年10月在青島大學(xué)附屬醫(yī)院眼科就診的真菌性角膜炎初診患者25例(25眼)為患者實(shí)驗(yàn)組,并根據(jù)角膜潰瘍炎癥反應(yīng)程度再分為輕度炎癥組、中度炎癥組和重度炎癥組,收集角膜病灶周邊角膜上皮組織；制作角膜植片后剩余的周邊角膜的健康供體5例(5眼)為患者對(duì)照組,收集植片外圍角膜緣2mm內(nèi)角膜上皮；RT-PCR檢測(cè)各組角膜上皮中TREM-1的表達(dá)及其與炎癥反應(yīng)程度的關(guān)系。健康Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(角膜未予任何處理)、損傷對(duì)照組(刮除角膜上皮后僅覆蓋角膜接觸鏡,不接種真菌)和真菌感染組(刮除角膜上皮后覆蓋角膜接觸鏡,接種真菌),根據(jù)角膜感染程度進(jìn)行評(píng)分；刮取各組角膜上皮行RT-PCR、Western blot檢測(cè)TREM-1的表達(dá)及其與角膜感染程度的關(guān)系；完整摘除角膜組織,免疫熒光染色檢測(cè)TREM-1在角膜中的定位表達(dá)。(2)體外培養(yǎng)人永生化角膜上皮細(xì)胞,分別加入煙曲霉菌菌絲刺激液、煙曲霉菌孢子刺激液,RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)角膜上皮細(xì)胞中TREM-1的表達(dá),篩選作用顯著的刺激液,Western blot檢測(cè)該刺激液對(duì)TREM-1蛋白表達(dá)的影響；RT-PCR檢測(cè)不同濃度LP17 (TREM-1選擇性抑制劑)預(yù)處理后煙曲霉菌刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞TREM-1表達(dá)改變以及TREM-1阻斷對(duì)煙曲霉菌刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞炎癥因子分泌的影響。(3)研究TREM-1與Toll樣受體-4(Toll like receptor-4, TLR-4)之間的協(xié)同作用,分別使用TREM-1抑制劑LP17、TLR-4抑制劑CLT-095和MyD88 (TLR信號(hào)通路下游因子)抑制劑ST2825預(yù)處理體外培養(yǎng)的人永生化角膜上皮細(xì)胞,Western blot檢測(cè)煙曲霉菌孢子刺激液誘導(dǎo)的TREM-1、TLR-4和MyD88蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)分別/聯(lián)合抑制TREM-1、TLR-4對(duì)煙曲霉菌孢子刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞炎癥因子分泌的影響。結(jié)果：(1)與對(duì)照組相比,真菌性角膜炎患者輕度炎癥組、中度炎癥組和重度炎癥組中TREM-1 mRNA的表達(dá)均顯著升高,而且隨炎癥程度加重,TREM-1表達(dá)升高越明顯,各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,真菌感染組8h起角膜上皮TREM-1 mRNA表達(dá)量較空白對(duì)照組不斷升高,48h達(dá)到高峰,各時(shí)間點(diǎn)之間差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)；16h起,真菌感染組角膜上皮中TRME-1 mRNA的表達(dá)量均明顯高于損傷對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)；真菌感染組24h、48h角膜上皮TREM-1蛋白表達(dá)水平隨時(shí)間升高,且均明顯高于空白對(duì)照組(P0.05)；免疫熒光染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),空白對(duì)照組大鼠角膜TREM-1表達(dá)主要位于角膜上皮層,真菌感染組大鼠角膜TREM-1表達(dá)明顯升高,主要位于角膜上皮和角膜基質(zhì)；真菌感染組大鼠角膜炎癥反應(yīng)程度與角膜上皮中TREM-1表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.942,P0.001)。(2)煙曲霉菌孢子刺激液刺激體外培養(yǎng)的角膜上皮細(xì)胞時(shí),TREM-1表達(dá)升高較菌絲刺激液更加明顯,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；Western blot結(jié)果顯示,煙曲霉菌孢子刺激液加入細(xì)胞中4h,TREM-1蛋白表達(dá)升高,8hTREM-1蛋白表達(dá)達(dá)到高峰,各時(shí)間點(diǎn)與空白對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；終濃度為lOng/ml、50ng/ml、100ng/ml的LP17均可抑制煙曲霉菌孢子刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞TREM-1 mRNA表達(dá)升高,抑制效果呈濃度依賴性,各濃度組之間TREM-1表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；100ng/ml LP17能夠顯著抑制煙曲霉菌孢子刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8分泌(P0.05)。(3)LP17能夠顯著抑制煙曲霉菌孢子刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞TREM-1、TLR-4和MyD88蛋白表達(dá),CLI-095預(yù)處理也能夠部分阻斷煙曲霉菌孢子刺激液誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞TREM-1和TLR-4表達(dá)上調(diào),此外ST2825同樣可以有效抑制TREM-1表達(dá)；LP17和CLI-095預(yù)處理均能不同程度的抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8分泌,兩者對(duì)炎癥因子的抑制程度沒(méi)有明顯差別(P0.05),但兩種抑制劑聯(lián)合使用時(shí)各種炎癥因子的表達(dá)與單獨(dú)抑制組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：(1)TREM-1介導(dǎo)的炎癥放大作用與真菌性角膜炎的炎癥反應(yīng)進(jìn)程密切相關(guān)；(2) TREM-1阻斷可以顯著抑制真菌感染后角膜上皮細(xì)胞炎癥因子的釋放,是抑制角膜炎癥反應(yīng)的潛在靶點(diǎn)；(3)TREM-1與TLR-4在介導(dǎo)真菌感染后角膜上皮炎癥反應(yīng)過(guò)程中具有協(xié)同促進(jìn)作用；(4)真菌誘導(dǎo)的角膜上皮細(xì)胞TREM-1表達(dá)上調(diào)具有MyD88通路依賴性。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R772.21

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙安利,周海松;氟康唑治療14例真菌性角膜炎的臨床體會(huì)[J];現(xiàn)代診斷與治療;2002年04期

2 唐麗,劉素琴;實(shí)驗(yàn)室檢查在真菌性角膜炎診治中的作用[J];貴州醫(yī)藥;2003年10期

3 蔣海云,翟燕軍,王鳳秀,袁志敏;真菌性角膜炎誤診1例[J];河北醫(yī)藥;2003年03期

4 陸肇曾;;真菌性角膜炎及其治療現(xiàn)狀[J];中國(guó)眼耳鼻喉科雜志;2003年05期

5 翟仁亮;張紅;翟自燕;;中醫(yī)辨證、西醫(yī)常規(guī)治療真菌性角膜炎[J];中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2005年17期

6 程蕾;張明昌;;真菌性角膜炎診斷常規(guī)及新進(jìn)展[J];臨床眼科雜志;2005年05期

7 王文華;李樹明;任玉新;李春龍;;氟康唑治療真菌性角膜炎的臨床探討[J];國(guó)際眼科雜志;2006年01期

8 陳增奎;;真菌性角膜炎的診治體會(huì)[J];醫(yī)學(xué)文選;2006年02期

9 ;隱形眼鏡與真菌性角膜炎有關(guān)[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào);2006年11期

10 衛(wèi)小莉;許衛(wèi)玲;韓桃麗;;氟康唑治療真菌性角膜炎病例分析[J];中國(guó)中醫(yī)眼科雜志;2007年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 史偉云;謝立信;;真菌性角膜炎[A];2007中華醫(yī)學(xué)會(huì)第二次醫(yī)學(xué)真菌學(xué)術(shù)會(huì)議暨醫(yī)學(xué)真菌實(shí)驗(yàn)室研究技術(shù)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

2 張小麗;;真菌性角膜炎患者實(shí)施健康教育的重要性[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

3 王璐璐;王麗婭;;糖皮質(zhì)激素對(duì)真菌性角膜炎發(fā)病過(guò)程的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

4 姬亞洲;張承立;張東魁;裴森;霍永軍;韓寶軍;王文玲;陳擁軍;;絲狀真菌所致真菌性角膜炎的臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

5 王麗婭;張軍;孫聲桃;張?jiān)虑?;真菌性角膜炎轉(zhuǎn)歸影響因素的相關(guān)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

6 楊樹立;趙廣喜;張麗麗;駱純皓;;外用氟康唑粉治療真菌性角膜炎[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

7 劉敬才;徐凱;;氟康唑滴眼液治療真菌性角膜炎的臨床分析[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)眼科分會(huì)2008繼續(xù)教育研討會(huì)論文集[C];2008年

8 裘文亞;姚玉峰;金玉奇;;影響真菌性角膜炎預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析[A];2006年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

9 錢俊;;真菌性角膜炎的觀察與護(hù)理[A];2007年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

10 鐘文賢;謝立信;;小鼠真菌性角膜炎中主要炎性因子表達(dá)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 安陽(yáng)市眼科醫(yī)院門診副主任 張承立;真菌性角膜炎常識(shí)[N];安陽(yáng)日?qǐng)?bào);2006年

2 本報(bào)記者　 陳艷陽(yáng) 通訊員　 吳日明;常戴隱形眼鏡當(dāng)心真菌性角膜炎[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2006年

3 岳平明;真菌性角膜炎如何治療[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

4 黃海平;警惕真菌性角膜炎[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2001年

5 謝立科;常戴隱形眼鏡當(dāng)心真菌性角膜炎[N];健康報(bào);2006年

6 本報(bào)實(shí)習(xí)記者 張文;隱形眼鏡護(hù)理液使用不當(dāng)可致失明[N];北京科技報(bào);2006年

7 衣曉峰；李建輝;真菌性角膜炎治療有新法[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

8 釗劍;隱形眼鏡護(hù)理液敢用嗎[N];人民日?qǐng)?bào);2006年

9 衣曉峰 李建輝;球結(jié)膜轉(zhuǎn)位移植治療真菌性角膜炎[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

10 健康時(shí)報(bào)記者　　趙紹華;中小學(xué)生不宜戴隱形眼鏡[N];健康時(shí)報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 曲利軍;趨化因子在真菌性角膜炎中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2011年

2 賀丹;真菌性角膜炎的病原學(xué)分析及主要病原菌的快速檢測(cè)[D];吉林大學(xué);2012年

3 應(yīng)露依;真菌性角膜炎預(yù)后的影響因素研究[D];浙江大學(xué);2013年

4 鐘文賢;小鼠真菌性角膜炎模型中主要炎性因子表達(dá)的研究[D];浙江大學(xué);2007年

5 翟華蕾;粒細(xì)胞—巨噬細(xì)胞集落刺激因子對(duì)真菌性角膜炎病理改變的影響及其作用機(jī)制的研究[D];青島大學(xué);2008年

6 裘文亞;兔鐮刀菌和曲霉菌真菌性角膜炎的研究[D];浙江大學(xué);2005年

7 張偉宏;真菌感染小鼠角膜過(guò)程中菌絲和主要炎癥細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化的研究[D];鄭州大學(xué);2010年

8 車成業(yè);IL-1β在真菌性角膜炎中的表達(dá)和調(diào)控機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2014年

9 徐玲娟;Dectin-1在真菌性角膜炎中的作用及其分子機(jī)制的初步研究[D];華中科技大學(xué);2011年

10 胡麗婷;TREM-1在真菌性角膜炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];青島大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 常曉可;邊緣年齡人群真菌性角膜炎流行病學(xué)及病原學(xué)特征分析[D];鄭州大學(xué);2010年

2 劉麗梅;半巢式聚合酶鏈反應(yīng)快速診斷真菌性角膜炎[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

3 喬元嬌;真菌性角膜炎的診斷及治療分析[D];吉林大學(xué);2009年

4 馬慧;真菌性角膜炎致病與預(yù)后關(guān)系的分析[D];山東大學(xué);2010年

5 楊瀟遠(yuǎn);多重PCR體系檢測(cè)真菌性角膜炎的臨床應(yīng)用研究[D];鄭州大學(xué);2005年

6 張靜;真菌性角膜炎的菌種鑒定[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

7 楊子建;多重聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索[D];鄭州大學(xué);2006年

8 李淼;真菌性角膜炎角膜新生血管形成與預(yù)后的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2010年

9 胡穎峰;活化巨噬細(xì)胞對(duì)真菌性角膜炎細(xì)胞免疫狀態(tài)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

10 孫遠(yuǎn);共聚焦顯微鏡在真菌性角膜炎診斷及治療中的應(yīng)用分析[D];山東大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：2530468