【摘要】：目的探討高壓力培養(yǎng)下角膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)機(jī)制。方法原代兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)免疫組織化學(xué)鑒定后,在50mm Hg(1 k Pa=7.5 mm Hg)壓力條件下,培養(yǎng)1 h、2 h、24 h,另設(shè)正常壓力(15 mm Hg)作為正常壓力組,培養(yǎng)24 h。第一代兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞融合達(dá)70%~80%后,細(xì)胞在加壓前1 h分別使用濃度均為10~(-6)mol·L~(-1)抗Caspase-8和抗Caspase-9預(yù)處理,然后置于壓力裝置中,壓力設(shè)定為50 mm Hg,培養(yǎng)24 h后檢測(cè)蛋白Bcl-2和P53表達(dá),并且以無(wú)抑制劑處理的50 mm Hg壓力培養(yǎng)的細(xì)胞為對(duì)照組。各組培養(yǎng)的細(xì)胞均經(jīng)Western blot檢測(cè)Bcl-2和P53的表達(dá)。免疫熒光染色檢測(cè)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞胞漿細(xì)胞色素C的含量。結(jié)果 50 mm Hg壓力組角膜內(nèi)皮細(xì)胞,加壓1 h、2 h、24 h P53的表達(dá)量分別為0.651±0.007、0.805±0.006、0.839±0.011,較正常壓力組(0.033±0.004)升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01);50 mm Hg壓力組隨著加壓時(shí)間的延長(zhǎng),角膜內(nèi)皮細(xì)胞中P53蛋白表達(dá)量逐漸增加,各時(shí)間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01)。50 mm Hg壓力組中加壓1 h、2 h、24 h Bcl-2的表達(dá)量分別為0.590±0.009、0.724±0.005、0.314±0.016,較正常壓力組(0.081±0.013)反應(yīng)性升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01);50 mm Hg壓力組各時(shí)間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)正常壓力組培養(yǎng)24 h后,細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞漿中無(wú)細(xì)胞色素C釋放;50 mm Hg壓力組培養(yǎng)1 h可見(jiàn)部分細(xì)胞胞漿呈紅色,提示細(xì)胞色素C釋放進(jìn)入到胞漿內(nèi),隨著加壓時(shí)間延長(zhǎng)熒光強(qiáng)度增加,加壓24 h見(jiàn)胞漿內(nèi)出現(xiàn)廣泛紅色強(qiáng)熒光�？笴aspase-9和抗Caspase-8預(yù)處理組的角膜內(nèi)皮細(xì)胞P53表達(dá)量分別為0.535±0.007、0.703±0.010,較對(duì)照組(0.727±0.021)下調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01);抗Caspase-9和抗Caspase-8預(yù)處理組中Bcl-2的表達(dá)量呈抑制性下降,分別為0.312±0.003、0.442±0.011,較對(duì)照組(0.501±0.011)下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01)�？笴aspase-9預(yù)處理組的角膜內(nèi)皮細(xì)胞P53和Bcl-2表達(dá)量較抗Caspase-8預(yù)處理組下降,差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01),表明抗Caspase-9對(duì)高壓下角膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的抑制作用更顯著。結(jié)論Caspase-9抑制劑可有效阻斷高壓力對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的促凋亡作用,高壓力對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的損傷主要是觸發(fā)了線(xiàn)粒體細(xì)胞色素C的釋放,激活了Caspase-9參與的內(nèi)源性酶聯(lián)反應(yīng)性凋亡途徑。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of corneal endothelial cell apoptosis in high pressure culture. Methods the primary rabbit corneal endothelial cells were identified by immunohistochemistry and cultured under 50mm Hg (1 k Pa=7.5 mm Hg) pressure) for 1 h, 2 h, 24 h. The normal pressure (15 mm Hg) was used as the normal pressure group and cultured for 24 h. After the fusion of the first generation rabbit corneal endothelial cells reached 70% / 80%, the cells were pretreated with 10 ~ (- 6) mol 路L ~ (- 1) anti-Caspase-8 and anti-Caspase-9 at the concentration of 10 ~ (- 6) mol 路L ~ (- 1) and then placed in a pressure device. The pressure was set at 50 mm Hg, for 24 h to detect the expression of protein Bcl-2 and p53, and the control group was treated with 50 mm Hg pressured cells without inhibitor. The expression of Bcl-2 and p53 were detected by Western blot. The content of cytoplasmic cytochrome C (cytochrome C) in rabbit corneal endothelial cells was detected by immunofluorescence staining. Results the expression of p53 in 50 mm Hg pressure group was 0.651 鹵0.007, 0.805 鹵0.006,0.839 鹵0.011, respectively, which was higher than that in normal pressure group (0.033 鹵0.004). The difference was statistically significant (all P0.01). The expression of p53 protein in corneal endothelial cells increased gradually with the prolongation of the pressure time in 50 mm Hg pressure group (all P0.01). In 50 mm Hg pressure group, the expression of p53 protein increased at 1 h, 2 h, and in the 50 mm Hg pressure group, the expression of p53 protein increased gradually with the prolongation of the pressure time (all P0.01). The expression of Bcl-2 in 24 h group was 0.590 鹵0.009,0.724 鹵0.005,0.314 鹵0.016, which was significantly higher than that in normal pressure group (0.081 鹵0.013) (P0.01). There was significant difference in each time of 50 mm Hg pressure group (P 0.01). It was found that after 24 hours of culture in the normal pressure group, the nucleus was blue and no cytochrome C release was found in the cytoplasm. In the 50 mm Hg pressure group, the cytoplasm of some cells was red at 1 h, suggesting that cytochrome C release into the cytoplasm, the fluorescence intensity increased with the prolongation of the pressure time, and a wide range of red strong fluorescence appeared in the cytoplasm at 24 h under pressure. The expression of p53 in corneal endothelial cells of anti-Caspase-9 and anti-Caspase-8 pretreatment groups was 0.535 鹵0.007 and 0.703 鹵0.010, respectively, which was significantly lower than that of control group (0.727 鹵0.021) (P 0.01). The expression of Bcl-2 decreased in anti-Caspase-9 and anti-Caspase-8 pretreatment groups (0.312 鹵0.003 and 0.442 鹵0.011, respectively), which was significantly lower than that in control group (0.501 鹵0.011) (P 0.01). The expression of p53 and Bcl-2 in corneal endothelial cells of anti-Caspase-9 pretreatment group was lower than that of anti-Caspase-8 pretreatment group, and the difference was statistically significant (P 0.01). The results showed that anti-Caspase-9 could inhibit the apoptosis of corneal endothelial cells under high pressure. Conclusion Caspase-9 inhibitor can effectively block the apoptosis of corneal endothelial cells induced by high pressure. The injury of high pressure on corneal endothelial cells mainly triggers the release of mitochondrial cytochrome C. Activation of endogenous enzyme-linked reactive apoptosis pathway involved in Caspase-9.
【作者單位】： 南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院、江西新視界眼科醫(yī)院;中山眼科中心;南昌愛(ài)爾眼科醫(yī)院;南昌大學(xué)附屬眼科醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(編號(hào):30801263)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R77

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李鳳云,譚星平,楊昌全,周明敏,劉雙珍;正常人角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度及形態(tài)化規(guī)律探討[J];中國(guó)實(shí)用眼科雜志;2001年02期

2 張翠英;劉華;;角膜內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及促進(jìn)其修復(fù)的因素[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年11期

3 王雅娜;顏偉年;葉宇峰;董映;;外減壓法娩核對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年19期

4 潘作新,石珍榮,孫為榮;有關(guān)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的觀察[J];青島醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

5 王東初;角膜內(nèi)皮細(xì)胞[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);1984年05期

6 王麗婭;角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性的檢測(cè)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);1997年03期

7 張忠偉;宋彩萍;;超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞損傷及修復(fù)的臨床分析[J];中國(guó)處方藥;2014年06期

8 趙紹貞,孫慧敏,袁佳琴;準(zhǔn)分子激光屈光性角膜切削術(shù)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J];眼科研究;2000年02期

9 楊亞波,姚克,杜新華,夏文琴;準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞的變化[J];中華眼科雜志;2002年01期

10 王旭,謝立信,史偉云;外源基因轉(zhuǎn)入角膜內(nèi)皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華眼科雜志;2002年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 董仰曾;;原發(fā)性閉角型青光眼對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

2 丁蕾;申家泉;唐俠;;急性閉角型青光眼角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能的相關(guān)影響因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

3 史芳榮;劉洛如;杜獻(xiàn)芳;張東魁;;準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

4 陳斯;;不同年齡段年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者角膜內(nèi)皮細(xì)胞情況研究[A];2011年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

5 俞頌平;施天嚴(yán);范大軍;陳戰(zhàn)巧;李穎;;白內(nèi)障超聲乳化術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

6 俞頌平;施天嚴(yán);范大軍;王少云;;白內(nèi)障超聲乳化術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞的研究[A];2007年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

7 徐海銘;洪朝陽(yáng);;虹膜固定型PR-IOL植入術(shù)矯正高度近視對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞影響的臨床觀察[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)眼科專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第九次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省級(jí)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

8 林嬡;徐錦堂;陳建蘇;吳靜;;非促分裂型haFGF對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

9 張少維;邢怡橋;艾明;楊安懷;葉美紅;梅海峰;;硅油取出聯(lián)合超聲乳化人工晶體植入術(shù)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

10 蘇龍;張紅;王鐵成;漆晨;;共聚焦顯微鏡觀察增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變患者玻璃體切割術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞的的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 李東侃;人β-神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)其分裂再生的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2004年

2 羅文娟;人血小板源性生長(zhǎng)因子基因B轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)貓角膜內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)[D];青島大學(xué);2005年

3 宋靜;小分子化合物J2作用于大鼠角膜細(xì)胞的體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 熊思盈;不同術(shù)式對(duì)高度近視合并白內(nèi)障患者角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2016年

2 李嫻;急性高眼壓對(duì)大鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能及泵功能的影響[D];南華大學(xué);2016年

3 王璇;核黃素/紫外線(xiàn)A角膜交聯(lián)術(shù)對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];山東大學(xué);2017年

4 胡曉琴;兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞壓力仿生培養(yǎng)及調(diào)控機(jī)制的研究[D];南昌大學(xué);2008年

5 梁玲玲;角膜內(nèi)皮細(xì)胞壓力調(diào)控及高壓力損傷機(jī)制的研究[D];南昌大學(xué);2010年

6 袁媛;激光對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];華中科技大學(xué);2007年

7 丁蕾;急性閉角型青光眼患者角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能的相關(guān)影響因素分析[D];山東大學(xué);2007年

8 賈艷紅;深低溫冷凍保存角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2007年

9 高彥;人胎兒角膜內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)和性質(zhì)鑒定[D];青島大學(xué);2009年

10 呂明原;急性閉角型青光眼超聲乳化術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及相關(guān)影響因素的研究[D];青島大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：2471327