【摘要】：[背景和目的] 慢性鼻竇炎(Chronic rhinosinusitis, CRS)是上呼吸道一種常見的,多發(fā)的炎癥性疾病,其發(fā)病機制不明。依據(jù)是否伴有鼻息肉將CRS分為兩大類：不伴鼻息肉的慢性鼻竇炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps, CRSsNP)和伴鼻息肉的慢性鼻竇炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)。嗜酸性粒細胞炎癥是白種CRSwNP患者的炎癥特點,但在中國患者中,超過一半的CRSwNP表現(xiàn)為非嗜酸性粒細胞性炎癥。因此,CRSwNP又可分為嗜酸性CRSwNP (Eosinophilic CRSwNP, Eos CRSwNP)和非嗜酸性CRSwNP (noneosinophilic CRSwNP, non-Eos CRSwNP)。不同類型的CRS具有不同的組織重塑形式,并且與CRS的炎癥模式密切相關。研究表明,不同的免疫調節(jié)機制參與CRSsNP、non-Eos CRSwNP和Eos CRSwNP的發(fā)病。多項研究發(fā)現(xiàn)前列腺素E2(E-prostanoid, EP)受體在白種人阿司匹林不耐受三聯(lián)征(Samter's triad)的發(fā)病機制中發(fā)揮作用。然而迄今為止,尚未發(fā)現(xiàn)關于中國CRS患者的EP受體表達的研究報道。本實驗比較EP1、EP2、EP3和EP4受體在阿司匹林耐受的不同類型CRS患者(CRSsNP、non-Eos CRSNP和Eos CRSwNP)中的表達,并探討EP受體在CRS發(fā)病機制中的作用。 [方法] 鼻腔組織標本來自12例CRSsNP患者、16例non-Eos CRSwNP、12例EosCRSwNP患者和12例對照組。普通光學顯微鏡下對HE染色組織切片進行觀察,計算黏膜上皮下浸潤的炎癥細胞數(shù)和腺體數(shù),對間質水腫程度進行評分。用免疫組織化學染色S-ABC法檢測四種EP受體的組織表達。分別用Real-time PCR和Western blot技術檢測不同組別中EP受體的nRNA和蛋白的表達。連續(xù)切片免疫組化染色檢測EP和嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(Eosinophil cationic protein, ECP).分析EP受體與嗜酸性粒細胞之間的關系。 [結果] 不同類型的CRS組織病理學特征各異。免疫組織化學染色顯示EP受體主要表達于鼻黏膜上皮、腺體和上皮下炎癥細胞。EP受體mRNA在組內的表達差異顯示,對照組中EP4、EP2受體較EP3和EP1受體高表達,CRSsNP和non-Eos CRSwNP中EP4受體的表達明顯增加,EP受體在這三組中的表達順序為EP4EP2EP3EP1;而Eos CRSwNP組EP2受體表達顯著下調,EP1受體上調。EP受體組間比較顯示,與對照組、CRSsNP和non-Eos CRSwNP相比較,EosCRSwNP中EP1受體mRNA和蛋白表達均上調,而四組間EP2、EP3和EP4受體的表達無明顯差異。對Eos CRSwNP行連續(xù)切片免疫組化染色示,EP1受體主要表達于上皮下炎癥細胞,其中EP1陽性的嗜酸性粒細胞占EP1陽性總細胞數(shù)的50%。 [結論] 國人CRS患者EP1、EP2、EP3和EP4受體的表達存在差異,并且不同于白種人。Eos CRSwNP中EP1表達較non-Eos CRSwNP、CRSsNP和對照組顯著增加。Eos CRSwNP中EP1的表達上調可能與大量的嗜酸性粒細胞等浸潤有關。四種EP受體在不同類型CRS發(fā)病中的功能有待進一步研究。 [背景和目的] 鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)的發(fā)病機制不明,越來越多的研究認為CRSwNP是受多種因素共同作用的結果。既往的研究發(fā)現(xiàn)息肉組織中EP受體參與CRSwNP的發(fā)病,而EP受體的表達受多種生理和病理性刺激的調控。吸煙是呼吸道炎癥的一個主要的危險因素,在CRSwNP發(fā)病中是否起作用尚存爭議,但大多數(shù)研究認為吸煙引起或加重CRSwNP的炎癥反應,其機制仍不明確。有研究表明香煙煙霧可以通過改變氣道和外周血炎癥細胞的EP受體的表達,進而促進炎癥反應,但香煙煙霧對CRSwNP中EP受體表達的影響并不清楚。本實驗將CRSwNP患者分為主動吸煙(Smoking CRSwNP, S-NP)組和不吸煙(Non-Smoking CRSwNP, N-NP)組,通過比較研究EP1、EP2、EP3和EP4受體在兩組疾病組織中的表達的差異,探討吸煙與EP受體的關系,從而進一步闡明吸煙與CRSwNP發(fā)生之間的關系。 [方法] 息肉標本來自21例S-NP和28例N-NP患者。分別對兩組息肉組織切片行HE染色、Alcian blue杯狀細胞染色、Masson膠原纖維染色和中性粒細胞髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)免疫組化染色。光學顯微鏡下觀察S-NP組和N-NP組息肉標本組織病理學特點,計算鱗狀上皮化生陽性率、上皮杯狀細胞數(shù),固有層中浸潤的炎癥細胞(嗜酸性粒細胞、MPO+中性粒細胞、單個核細胞)和腺體數(shù),對間質水腫程度和基底膜厚度進行評分,纖維化水平以膠原纖維百分比表示。用免疫組織化學染色檢測四種EP受體的組織表達。分別用Real-time PCR和Western blot技術檢測息肉組織中EP受體的mRNA和蛋白的表達。 [結果] N-NP組和S-NP組均可見上皮增生、杯狀細胞增生、基底膜增厚、間質水腫、大量炎癥細胞浸潤(PMNs、單個核細胞等)。與N-NP組相比,S-NP組鱗狀上皮化生率、杯狀細胞計數(shù)、總炎癥細胞計數(shù)顯著增加。S-NP組間質膠原纖維百分率比例較N-NP組更高(P=0.07)。兩組嗜酸性粒細胞計數(shù)、單個核細胞計數(shù)、基底膜厚度評分、黏膜下腺體數(shù)和間質水腫評分,無統(tǒng)計學差異。免疫組織化學染色示兩組間EP受體亞型的表達定位相同。EP受體mRNA在組內的表達差異顯示,N-NP組EP2受體的表達顯著低于EP1、EP3和EP4受體(EP4EP3EP1P2); S-NP組中EP2的相對低表達差異更明顯(EP3EP1EP4P2).同一EP受體不同組間比較,S-NP組較N-NP組EP2、EP4受體mRNA和蛋白表達顯著下調,而EP1和EP3受體表達無顯著差異。 [結論] S-NP組織炎性病變比N-NP組更加明顯,香煙煙霧并未改變EP受體的組織定位。S-NP和N-NP組織中EP2的相對低表達可能與息肉形成有關。主動吸煙可能通過下調鼻黏膜組織中EP2、EP4受體的表達,參與CRSwNP的發(fā)生和發(fā)展。 [背景和目的] 眾多炎癥介質與CRSwNP的發(fā)病機制關系密切。研究證實TNF-α、IL-6等細胞因子在鼻腔息肉組織或鼻分泌物中表達增加,在鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。我們前期工作中發(fā)現(xiàn)S-NP組織中EP2和EP4受體較N-NP組顯著降低,S-NP的組織重塑如鱗狀上皮化生、杯狀細胞增生、間質纖維化程度比N-NP組更重,并且S-NP中炎癥細胞浸潤更加明顯。提示吸煙因素可能通過改變呼吸道黏膜中EP受體的表達,介導靶細胞的活化促進炎癥因子的廣泛合成,進而參與CRSwNP慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展。吸煙對CRSwNP患者鼻腔組織局部和血清中細胞因子的影響鮮有報道。本部分實驗進一步對比S-NP組和N-NP組息肉組織和血清TNF-α、IL-6的含量,并研究促炎因子的產生與吸煙指數(shù)(SI)是否有相關性。 [方法] 息肉和靜脈血清標本來自21例主動吸煙(Smoking CRSwNP, S-NP)組,和28例不吸煙(Non-Smoking CRSw NP, N-NP)組。吸煙指數(shù)(smoking index,SI)計算方式為每天吸煙的包數(shù)x吸煙年限。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)分別檢測不同組別息肉組織和血清中IL-6和TNF-α的水平,并與SI作相關性分析。 [結果] S-NP組鼻息肉組織TNF-α含量比N-NP組顯著增高,IL-6水平雖無統(tǒng)計學差異(P=0.06),但S-NP組表達水平更高。N-NP組和S-NP組血清TNF-α、IL-6濃度無顯著差異。Spearman相關分析組織TNF-α和IL-6含量與SI均無相關性。 [結論] S-NP息肉組織中促炎因子IL-6和TNF-α含量高于N-NP組,與S-NP的更重的炎性改變有關,與吸煙的強度可能無關。香煙煙霧是否通過降低EP2、EP4受體的表達,促進組織結構細胞或炎癥細胞合成和釋放IL-6和TNF-α等促炎因子,從而導致CRSwNP的發(fā)生發(fā)展,有待進一步研究。 [背景和目的] 人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)在多種炎癥性疾病中發(fā)揮著重要作用,單個核細胞浸潤是慢性炎癥性疾病的病理特征之一。CRSwNP組織中單核細胞、淋巴細胞的聚集增加,與趨化因表達顯著增高有關。研究表明單核/巨噬細胞中EP1、EP2、EP3和EP4受體均有表達,而且受病理生理機制調控。我們前期研究發(fā)現(xiàn)EP受體廣泛表達于息肉組織中浸潤的炎癥細胞,吸煙鼻息肉組織中EP2、EP4受體的表達降低,可能與CRSw NP的炎癥反應有關。吸煙是否影響CRSwNP患者PBMC中EP受體的表達進而影響單個核細胞的功能,目前尚無相關的報道。本實驗中,我們比較S-NP組和N-NP組PBMC的EP受體表達的差異,并進行PBMC體外香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)刺激實驗,明確香煙煙霧是否誘導PBMC的EP受體表達變化,并促進PBMC釋放促炎因子。 [方法] 1.靜脈血標本來自21例主動吸煙(Smoking CRSwNP, S-NP)組,和28例不吸煙(Non-Smoking CRSw NP, N-NP)組。用Ficoll密度梯度離心法提取PBMC。分別用Real-time PCR和Western blot技術檢測并比較兩組PBMC中EP受體的mRNA和蛋白的表達。 2.細胞體外刺激實驗血液標本采自6例N-NP患者,用Ficoll密度梯度離心法提取PBMC。用不同濃度CSE(0%、0.1%、1%、10%)刺激體外培養(yǎng)的PBMC24小時,分別用Real-time PCR和Western blot技術檢測不同濃度組PBMC中EP受體mRNA和蛋白的表達。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)分別檢測不同濃度CSE組上清中TNF-α、IL-6含量。 [結果] 1.PBMC的EP受體mRNA在S-NP組內的表達顯示,EP4受體表達顯著高于EP1、EP2和EP3受體,EP2受體表達顯著高于EP1和EP3,而EP1和EP3mRNA的表達無統(tǒng)計學差異(EP4P2EP1EP3)。N-NP組內的EP受體表達與S-NP組相似。S-NP組和N-NP組組間比較EP受體(mRNA和蛋白)的表達均無統(tǒng)計學差異。 2.PMBC體外刺激實驗Real-time PCR結果 不同濃度的CSE(0.1%、1%、10%)刺激PBMC細胞24小時后,EP1、EP2、EP3和EP4受體mRNA的表達變化如下。 2.1EP1受體mRNA的表達與對照組相比均顯著增加(P0.05)。 2.2EP2受體mRNA的表達與對照組相比均降低,統(tǒng)計學分析顯示10%CSE組與對照組相比有顯著差異(P0.05)。 2.3EP3受體mRNA的表達與對照組相比均增加,統(tǒng)計學分析顯示CSE(1%、10%)組與對照組相比有顯著差異(P0.05)。 2.4EP4受體mRNA的表達與對照組相比均顯著降低,統(tǒng)計學分析顯示1%CSE(P0.05)和10%CSE組(P0.01)與對照組相比有顯著差異。 3.細胞體外刺激實驗Western blot結果 3.1EP1受體蛋白條帶的灰度值隨CSE濃度增加逐漸增強,10%CSE組與對照組相比顯著增強(P0.05)。 3.2EP2受體蛋白條帶的灰度值顯示10%CSE組與對照組相比顯著減弱,0.1%CSE.1%CSE與對照組相比無明顯差異(P0.05)。 3.3EP3受體蛋白條帶的灰度值10%CSE組與對照組相比顯著增強,有顯著差異(P0.05)。 3.4EP4受體蛋白條帶的灰度值1%CSE、10%CSE組與對照組相比顯著減弱(P0.05)。 4.PMBC體外刺激實驗ELISA檢測結果 與對照組相比,不同濃度CSE(0.1%、1%、10%)刺激PBMC24h后TNF-α、IL-6含量呈劑量依耐性升高。1%CSE和10%CSE刺激組上清中TNF-α、IL-6含量與對照組相比有統(tǒng)計學差異。 [結論] S-NP和N-NP組間PBMC的EP受體表達無明顯差異,S-NP的EP受體表達下調可能限于組織局部。CSE通過上調N-NP患者PBMC中EP1和EP3受體的表達,下調EP2和EP4受體,促進PBMC的活化并生成TNF-α和IL-6。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R765.25

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本文編號：2458026