【摘要】：目的探討rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中對白細(xì)胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll樣受體4(toll-like receptor 4,TLR4)表達(dá)的調(diào)控作用。方法構(gòu)建IL-10、TLR4基因的3’端非編碼區(qū)域(3’UTR)熒光素酶質(zhì)粒載體以及結(jié)合位點(diǎn)突變質(zhì)粒載體,將rnomiR-30b-5p模擬物(mimic)與構(gòu)建好的報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,通過報(bào)告基因相對熒光值的表達(dá)改變檢測rno-miR-30b-5p對IL-10、TLR4表達(dá)的調(diào)控作用;制備實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通過注射視網(wǎng)膜光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白乳糜液,在造模后12 d分離EAU大鼠的脾臟和淋巴結(jié),實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表達(dá)情況;ELISA檢測IL-10和TLR4蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果雙熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)結(jié)果表明,經(jīng)rno-miR-30b-5p mimic干預(yù)后IL-10、TLR4野生型的報(bào)告熒光有明顯的下調(diào)作用,對其預(yù)測靶位點(diǎn)進(jìn)行突變后,突變型載體中的報(bào)告熒光也存在明顯的下調(diào)作用,與陰性對照相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾臟和淋巴結(jié)中的表達(dá)均較對照組明顯降低(均為P0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)明顯升高(均為P0.01);ELISA檢測發(fā)現(xiàn)IL-10、TLR4蛋白表達(dá)升高,與對照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。結(jié)論rno-miR-30b-5p對帶有IL-10、TLR4基因片段3’UTR基因表達(dá)的調(diào)控作用可能不是通過預(yù)測到的位點(diǎn)起作用而是通過其他的調(diào)控結(jié)合位點(diǎn)發(fā)揮作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾臟和淋巴結(jié)的下調(diào)表達(dá)導(dǎo)致IL-10和TLR4的表達(dá)水平升高,進(jìn)而調(diào)控葡萄膜炎的發(fā)展。本研究為進(jìn)一步探索microRNA在葡萄膜炎發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中的調(diào)控作用、治療葡萄膜炎奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of rno-miR-30b-5p on the expression of interleukin 10 (interleukin-10,IL-10) and Toll like receptor 4 (toll-like receptor 4) in uveitis. Methods the 3 '-terminal non-coding region (3'UTR) luciferase plasmid vector of IL-10,TLR4 gene and the plasmid vector with binding site mutation were constructed. The rnomiR-30b-5p mimic (mimic) was co-transfected into 293T cells with the constructed reporter gene vector. The regulation of rno-miR-30b-5p on the expression of IL-10,TLR4 was detected by the change of relative fluorescence value of the reporter gene. The experimental autoimmune uveitis (experimental autoimmune uveitis,EAU) model was established. The spleen and lymph nodes of EAU rats were isolated 12 days after injection of vitamin A binding protein chyme between retinal photoreceptors. The expression of rno-miR-30b-5p and IL-10,TLR4 genes was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The expression of IL-10 and TLR4 protein was detected by ELISA. Results the results of double luciferase reporter gene expression showed that IL-10,TLR4 wild-type reporter fluorescence was significantly down-regulated after rno-miR-30b-5p mimic intervention, and the predicted target sites were mutated. There was also a significant down-regulation of the reported fluorescence in the mutant vector, compared with the negative control, the difference was statistically significant (all P0.01). The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the expression of rno-miR-30b-5p in spleen and lymph nodes of EAU rats was significantly lower than that in control group (P0.01), while the expression of IL-10 mRNA,TLR4 mRNA was significantly increased (P0.01). ELISA detection showed that the expression of IL-10,TLR4 protein increased, compared with the control group, the difference was statistically significant (P0.05). Conclusion the regulatory effect of rno-miR-30b-5p on the expression of 3'UTR gene with IL-10,TLR4 gene fragment may play a role not by the predicted sites but by other regulatory binding sites. The down-regulation of rno-miR-30b-5p expression in spleen and lymph nodes of EAU rats leads to the increase of IL-10 and TLR4 expression, which regulates the development of uveitis. This study laid a foundation for further exploring the regulatory role of microRNA in the development of uveitis and for the treatment of uveitis.
【作者單位】： 山東中醫(yī)藥大學(xué);山東中醫(yī)藥大學(xué)眼科研究所;
【基金】：高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(編號:20133731110004) 山東中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃(編號:2015-145) 山東省自然科學(xué)基金(編號:ZR2016HP27)~~
【分類號】：R773.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王婧;盧弘;;Toll樣受體-4及其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與急性前葡萄膜炎[J];眼科新進(jìn)展;2011年10期

2 ;MicroRNA signatures in liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2009年14期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王少程;白細(xì)胞介素-10對大鼠內(nèi)毒素誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性葡萄膜炎的治療作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊培增;我國葡萄膜炎的診治水平亟待提高[J];中華眼科雜志;2002年04期

2 楊培增;葡萄膜炎治療的最新進(jìn)展[J];中國實(shí)用眼科雜志;2002年02期

3 李曉陽,史會敏;葡萄膜炎75例臨床治療體會[J];河南醫(yī)藥信息;2002年02期

4 楊培增,張震,王紅,周紅顏,黃祥坤,李兵;葡萄膜炎的臨床類型及病因探討[J];中華眼底病雜志;2002年04期

5 胡毅倩,華飛;葡萄膜炎治療后并發(fā)糠秕孢子菌性毛囊炎1例[J];中國實(shí)用眼科雜志;2003年09期

6 楊培增,邢琳;我國近五年葡萄膜炎臨床與基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J];中華眼科雜志;2005年08期

7 楊培增;葡萄膜炎研究若干進(jìn)展及其評價(jià)[J];中華眼底病雜志;2005年06期

8 楊培增;以辨證的觀點(diǎn)認(rèn)識和治療葡萄膜炎[J];中華眼底病雜志;2005年06期

9 楊培增;;葡萄膜炎的研究進(jìn)展[J];中華眼科雜志;2005年12期

10 沈降,孫慧敏,田恩江;抗腫瘤壞死因子-α治療葡萄膜炎的研究現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;2005年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 阮克奮;;葡萄膜炎中西醫(yī)治療再探討——復(fù)發(fā)性葡萄膜炎的治療[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會眼科專業(yè)委員會第八次學(xué)術(shù)年會暨省級繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2005年

2 華峰;;葡萄膜炎患者血糖測定及意義[A];2007年浙江省眼科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 侯習(xí)武;魏麗萍;王宇冉;劉向前;孫利娜;;葡萄膜炎治療的臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

4 鐘良玉;盧輝;;中西醫(yī)結(jié)合治療葡萄膜炎的臨床觀察[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會第二屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨2012年學(xué)術(shù)年會文集[C];2012年

5 劉靜霞;;葡萄膜炎的中西醫(yī)防治研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第五次眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2006年

6 鐘新娜;曹岐新;吳元奇;;中西醫(yī)結(jié)合治療葡萄膜炎臨床研究[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會眼科分會2008繼續(xù)教育研討會論文集[C];2008年

7 林柳燕;郝小波;孔秀蓮;張亞飛;龔輝珍;;藥物導(dǎo)入治療葡萄膜炎的療效觀察[A];第六屆全國中醫(yī)中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2007年

8 史晉霞;李茹;賈園;栗占國;;原發(fā)性免疫性葡萄膜炎五例臨床分析[A];第十二屆全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

9 楊培增;;糖皮質(zhì)激素治療葡萄膜炎的基本原則[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

10 楊培增;;葡萄膜炎的診斷流程和治療概要[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 時(shí)仲省;專家提醒：激素治療葡萄膜炎不能過量[N];中國醫(yī)藥報(bào);2012年

2 鄭州大學(xué)第四附屬醫(yī)院眼一科教授 侯習(xí)武 整理 時(shí)仲省;治葡萄膜炎激素別超量[N];健康報(bào);2013年

3 本報(bào)記者 魏鑫;別怕 激素葡萄膜炎能治愈[N];保健時(shí)報(bào);2005年

4 記者 涂端玉 通訊員 陳景榮　;葡萄膜炎，，莫等閑視之[N];廣州日報(bào);2005年

5 方彤;全程觀察治療葡萄膜炎[N];健康報(bào);2005年

6 陳剛 侯習(xí)武 時(shí)仲省 馮光耀;悄悄致盲的葡萄膜炎[N];健康報(bào);2005年

7 印高樂;眼葡萄膜炎治療有新法[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 張荔子;揭秘葡萄膜炎[N];健康報(bào);2006年

9 張鴻茜;悄悄致盲的葡萄膜炎[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

10 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科教授 楊培增　本報(bào)記者 魏平 整理;葡萄膜炎：診斷細(xì)化流程 治療激素當(dāng)先[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊波;梅毒葡萄膜炎臨床特征及預(yù)后相關(guān)因素分析[D];吉林大學(xué);2016年

2 李華;TNFSF15、PTPN2和CD122基因多態(tài)性與葡萄膜炎遺傳易感性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

3 鄭洋;廣東省橫瀝鎮(zhèn)葡萄膜炎流行病學(xué)調(diào)查[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

4 楊紅霞;LXR和MIF在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中的作用及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

5 高煦;P2X7-PI3K/mTOR/p70S6K通路與葡萄膜炎遺傳易感性關(guān)系的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 鄧鉑林;從NOD樣受體家族（NLRS）探討兩種不同性質(zhì)葡萄膜炎發(fā)病機(jī)制的異質(zhì)性[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

7 張靈君;補(bǔ)體系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中對T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

8 趙娉婷;間充質(zhì)干細(xì)胞在復(fù)發(fā)性實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎晚期治療效果的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

9 顏廷芹;基于代謝組學(xué)技術(shù)中醫(yī)葡萄膜炎辨證分型的物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 毛羽;結(jié)核性后葡萄膜炎臨床特征及診斷的研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李昕;葡萄膜炎的臨床和血清免疫學(xué)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

2 卓楠;葡萄膜炎動物模型的改進(jìn)方法[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 寇博煦;超廣角眼底熒光血管造影在葡萄膜炎診治中的臨床應(yīng)用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 嚴(yán)偉明;分子氫對內(nèi)毒素誘導(dǎo)性大鼠葡萄膜炎的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳琳;TLR7激動劑CL097對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中Th17細(xì)胞的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

6 白琳;白塞病葡萄膜炎的藥物治療與進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉析;腎小管間質(zhì)性腎炎和葡萄膜炎綜合征的研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 鄭昌偉;三氮脒滴眼液減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的葡萄膜炎[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

9 曾靜;祛風(fēng)活血湯對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10影響的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 周昱;復(fù)方目炎寧對復(fù)發(fā)性葡萄膜炎患者急性時(shí)相蛋白的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

本文編號：2417511