【摘要】：目的 1.檢測(cè)淚腺腺樣囊性癌(ACC)組織中膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF), GDNF家族受體α1(GFRα-1)、酪氨酸激酶受體(Ret)和神經(jīng)細(xì)胞粘附因子(NCAM)以及凋亡抑制蛋白(Survivin)的表達(dá),并觀察其與淚腺ACC組織嗜神經(jīng)侵襲(PNI)等生物學(xué)行為之間的關(guān)系,以及彼此之間的相關(guān)性。 2.研究GDNF對(duì)體外培養(yǎng)人腺樣囊性癌細(xì)胞(ACC-2)增殖和遷移的影響,為進(jìn)一步明確GDNF在淚腺腺樣囊性癌PNI機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 3.分別探討人腺樣囊性癌細(xì)胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白質(zhì)和]mRNA表達(dá)的相關(guān)性,進(jìn)一步了解它們?cè)跍I腺ACC PNI微環(huán)境中的相互作用與關(guān)系,為臨床尋找控制早期PNI的有效靶點(diǎn)提供參考依據(jù)。 方法 1.免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)51例淚腺ACC患者手術(shù)標(biāo)本和5例正常淚腺組織中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表達(dá)狀況。 2.通過MTT法、繪制細(xì)胞生長曲線,以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度(時(shí)間)的GDNF對(duì)人腺樣囊性癌細(xì)胞(ACC-2)增殖和凋亡的影響；Transwell小室法研究不同濃度(時(shí)間)的GDNF對(duì)人腺樣囊性癌細(xì)胞(ACC-2)遷移能力的影響。 3.分別通過(?)Vestern Blotting蛋白印跡法和RT-PCR法檢測(cè)一定濃度的GDNF對(duì)人腺樣囊性癌細(xì)胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM以及Survivin蛋白質(zhì)和]nRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果 1.淚腺ACC組織中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表達(dá)率依次為62.7%(32/51)、62.7%(32/51)、54.9%(28/51)、60.8%(31/51)、60.8%(31/51),顯著高于淚腺正常組織；實(shí)體型ACC、復(fù)發(fā)組ACC的嗜神經(jīng)侵襲率顯著高于腺樣-管狀型ACC、原發(fā)組ACC的嗜神經(jīng)侵襲率,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),有/無疼痛組ACC間嗜神經(jīng)侵襲率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.實(shí)體型ACC組織中NCAM、Survivin的表達(dá)率顯著高于其在腺樣-管狀型ACC組織中的表達(dá)率,復(fù)發(fā)組ACC組織中GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表達(dá)率顯著高于其在原發(fā)組ACC組織中的表達(dá)率,有嗜神經(jīng)侵襲組ACC中GDNF GFRα-1、Ret、NCAM的表達(dá)率顯著高于其在無嗜神經(jīng)侵襲組ACC中的表達(dá)率,上述差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.淚腺ACC組織中GDNF的陽性表達(dá)與GFRα-1、Ret、NCAM的陽性表達(dá)均具有明顯相關(guān)性,GDNF的陽性表達(dá)與Survivin的陽性表達(dá)無明顯相關(guān)性。 4.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)48h,GDNF濃度在20～120ng/ml之間,可促進(jìn)ACC-2細(xì)胞系的增殖,與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中,80ng/ml的GDNF促進(jìn)ACC-2增殖作用最明顯。在第72h,80ng/ml GDNF促進(jìn)ACC-2細(xì)胞系的增殖作用最顯著(P0.05)。上述結(jié)果與80ng/ml GDNF作用下的ACC-2細(xì)胞生長曲線的趨勢(shì)一致。 5.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)48h后,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè),80ng/ml GDNF干預(yù)組ACC-2細(xì)胞中的G1期ACC-2細(xì)胞比例較對(duì)照組減少,S期ACC-2細(xì)胞比例較對(duì)照組增加。 6.標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)40h, GDNF在60～160ng/ml濃度下促進(jìn)ACC-2細(xì)胞遷移(P0.05),其中,160ng/ml的GDNF促進(jìn)ACC-2遷移作用最強(qiáng)。從第24h起,100ng/ml GDNF在各時(shí)間點(diǎn)(24h,30h,40h)均可明顯促進(jìn)ACC-2細(xì)胞系遷移,與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 7.80ng/ml GDNF能夠一致性上調(diào)ACC-2細(xì)胞的GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白質(zhì)和(?)m RNA的表達(dá),下調(diào)了ACC-2細(xì)胞中GDNF m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。 結(jié)論 1.淚腺ACC具有嗜神經(jīng)侵襲性生物學(xué)行為,嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象可作為淚腺ACC預(yù)后不良的臨床觀察指標(biāo)之一。 2. GDNF、GFRα-1、Ret在淚腺ACC嗜神經(jīng)侵襲中發(fā)揮重要作用,三者可以作為判斷有無嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象的生物學(xué)指標(biāo),而后兩者有望成為預(yù)測(cè)及評(píng)估預(yù)后的因素之一。 3. GDNF可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的人ACC-2細(xì)胞的增殖和遷移能力,并且分別具有劑量和時(shí)間依賴性,但是GDNF對(duì)ACC-2細(xì)胞的凋亡水平無明顯的調(diào)控作用。 4. GDNF通過GFRα-1-Ret信號(hào)傳導(dǎo)途徑,或者通過NCAM這一非依賴Ret的信號(hào)途徑,沿著以周圍神經(jīng)為中心的GDNF的濃度梯度,以及憑借NCAM的異/同嗜性粘附作用,使得淚腺ACC組織與周圍神經(jīng)相互吸引,形成了有利于腫瘤嗜神經(jīng)侵襲的微環(huán)境,增強(qiáng)了淚腺ACC腫瘤細(xì)胞的神經(jīng)侵襲能力。 5. NCAM的高表達(dá)與淚腺ACC的病理類型相關(guān),同時(shí)成為判斷淚腺ACC嗜神經(jīng)侵襲行為與預(yù)后的指標(biāo),通過檢測(cè)NCAM在淚腺ACC腫瘤細(xì)胞周圍的表達(dá),特別是在腫瘤周圍神經(jīng)中的表達(dá),了解淚腺ACC嗜神經(jīng)侵襲的情況,可能發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的殘留或早期的神經(jīng)侵犯,以期指導(dǎo)臨床治療。 6. Survivin的表達(dá)與淚腺ACC的病理類型、預(yù)后密切相關(guān),卻與淚腺ACC的嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象無明顯的相關(guān)性；Survivin與GDNF可能具有促進(jìn)ACC-2細(xì)胞增殖的協(xié)同作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R739.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 祝為橋,紀(jì)祥瑞,周福亭,李寧毅;涎腺腺樣囊性癌組織中神經(jīng)生長因子及其受體的表達(dá)[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

2 唐峰,王虹,趙為之,李薇,李瓊,莊麗;53例涎腺腺樣囊性癌MMP-2和MMP-9表達(dá)與神經(jīng)浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2001年02期

3 孫沫逸,王磊,楊連甲,侯銳,孫文斌,盧超;NGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及與嗜神經(jīng)侵襲和疼痛的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年11期

4 孫長伏,李瑞武,鐘鳴,王兆元,王玉新;涎腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)性的相關(guān)臨床病理學(xué)研究[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年05期

5 羅小龍,孫沫逸,呂春堂,周中華;髓磷脂堿性蛋白在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)[J];口腔頜面外科雜志;2005年03期

6 孫沫逸,王磊,陸斌,楊耀武,李建虎,程曉兵;酪氨酸激酶C與涎腺腺樣囊性癌嗜顱神經(jīng)侵襲的關(guān)系[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2004年04期

7 王磊,孫沫逸,楊耀武,程曉兵,李建虎;酪氨酸激酶A在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及與嗜神經(jīng)侵襲的關(guān)系[J];中國美容醫(yī)學(xué);2004年02期

8 羅小龍,孫沫逸,楊連甲,李春智,孫文斌;雪旺細(xì)胞標(biāo)志物S100蛋白在涎腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲中的意義[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

9 王磊,孫沫逸,楊耀武,程曉兵,侯銳,盧超;神經(jīng)營養(yǎng)因子-3在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及其意義[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2004年03期

10 毛立民!100081現(xiàn)在哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院口腔外科,150001,于世鳳!100081,孫開華!100081,劉紅巖,趙萬州,韓銳;金屬蛋白酶抑制劑BB-94抑制腺樣囊性癌侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

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本文編號(hào)：2411802