【摘要】：視網(wǎng)膜色素變性(retinitis pigmentosa,RP)是其中常見的一種遺傳性視網(wǎng)膜疾病,全球發(fā)病率為1/3000-1/5000,主要特征是一組以進(jìn)行性光感受Photoreceptors,PRs)細(xì)胞及視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(Retinal Pigment Epithelium,RPE)功能喪失為共同表現(xiàn)的遺傳性視網(wǎng)膜變性疾病。目前已知與視網(wǎng)膜色素變性相關(guān)的致病基因及位點(diǎn)共有63個(gè),其中22個(gè)是與常染色體顯性遺傳相關(guān)。目前僅有50%-60%的RP找到了明確的致病基因,仍有大于40%的RP患者的致病基因尚未找到。傳統(tǒng)的連鎖分析定位克隆的方法具有局限性。隨著二代測(cè)序技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展,外顯子組測(cè)序技術(shù)(whole exome sequencing),全基因組(Whole-genome sequencing,WGS)和靶基因芯片捕獲技術(shù)被認(rèn)為是RP的相關(guān)致病基因篩查的福音。如何選擇高效,合理的分子診斷技術(shù)并盡量控制成本是目前對(duì)于遺傳性疾病基因診斷亟待解決的共同問題。本研究在二代測(cè)序聯(lián)合目標(biāo)靶基因捕獲技術(shù),全外顯子組測(cè)序以及連鎖分析等方法分別在RP的遺傳家系中找到新的致病突變PRPF4和SPP2。其中PRPF4和我們前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的SNRNP200是前體m RNA剪切子,在m RNA合成過程中發(fā)揮著重要的生理功能。SPP2作為cystatins超家族的成員,但其具體功能目前尚不清楚。在本研究中,我們通過構(gòu)建細(xì)胞和斑馬魚模式動(dòng)物,分別觀察了這些突變對(duì)于細(xì)胞正常生理功能,以及組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變。并深入探討了其組織特異性可能的機(jī)制。在PRPF4中,我們發(fā)現(xiàn)兩個(gè)突變c.-114_-97del和hPrp4~(Pro315Leu)。其中c.-114_-97del可以妨礙兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),我們用熒光素酶報(bào)告基因的方法觀察到PRPF4的啟動(dòng)活性明顯降低。從患者身上提取的皮膚成纖維細(xì)胞可以觀察到h Prp4~(Pro315Leu)可以明顯的上調(diào)多種剪切復(fù)合體中剪切因子水平(包括prpf4),改變剪切復(fù)合體SC35聚集狀態(tài)。以上的結(jié)果說明剪切復(fù)合體其他剪切因子的升高可能是一種代償效應(yīng)。在動(dòng)物模型中,我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)h Prp4~(Pro315Leu)后可以導(dǎo)致斑馬魚致死致畸率的升高,并且可以引起視網(wǎng)膜原發(fā)性的損害。當(dāng)h Prp4~(Pro315Leu)與MO(沉默prpf4基因)共同作用時(shí),其致死致畸率明顯升高。以上結(jié)果顯示PRPF4是RP新的致病突變并且分別是通過單倍體不足或者顯性負(fù)性抑制作用。SNRNP200實(shí)驗(yàn)中,我們觀察到SNRNP200在斑馬魚中是廣泛表達(dá)的。并在斑馬魚模型中沉默掉SNRNP200后,發(fā)現(xiàn)其剪切功能紊亂(cbln1),并且可以升高剪切復(fù)合體中其他剪切子的水平,對(duì)于某些視網(wǎng)膜特異表達(dá)的基因明顯下調(diào)。并且當(dāng)沉默掉SNRNP200后,其大體出現(xiàn)致死致畸率的增加,并且視桿細(xì)胞早期受累,這與RP臨床病程是一致的。SPP2實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)了SPP2的p.Gly97Arg突變(位于SPP24兩個(gè)高度保守二硫鍵環(huán)的第一個(gè)上面)。過表達(dá)p.Gly97Arg和p.Gly29Asp(本實(shí)驗(yàn)擬定的陽(yáng)性參照)后會(huì)導(dǎo)致SPP2在細(xì)胞中潴留并最終引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生。在斑馬魚模式動(dòng)物中,我們觀察到過表達(dá)SPP2 mutation后會(huì)特異性的影響視桿細(xì)胞的活性。對(duì)于這些RP突變的篩查和研究能夠更好的理解RP疾病發(fā)生的病理病生過程,從而為臨床治療提供幫助。
[Abstract]:Retina pigmentosa (RP) is one of the most common hereditary retinal diseases, with a global incidence of 1/ 3000-1/ 5000. The main features are a group of photoreceptors (PRs) and retinal pigment epithelial cells (RPE). the function of the RPE) is lost to a common manifestation of a hereditary retinal degenerative disease. There are 63 pathogenic genes and sites associated with retinitis pigmentosa, 22 of which are associated with autosomal dominant inheritance. At present, only 50% to 60% of the RP has identified a clear pathogenic gene, and still more than 40% of the pathogenic genes of the RP patients have not yet been found. The traditional method of chain analysis and location cloning has the limitation. With the further development of the second generation sequencing technology, the exon group sequencing technology, the whole-genome sequencing, the WGS and the target gene chip capture technology are considered to be the gospel of the relevant pathogenic gene screening of the RP. How to select efficient and reasonable molecular diagnosis technology and to control the cost as much as possible is a common problem to be solved urgently for genetic disease gene diagnosis. In this study, new pathogenic mutations, PRPF4 and SPP2, were found in the genetic family of RP by the methods of second generation sequencing combined target gene capture, full-exon sequencing and linkage analysis, respectively. PRPF4 and the SNRNP200, which we have found in the earlier stage, are the front body m RNA shear, and play an important physiological function in the synthesis of m-RNA. SPP2 is a member of the caystins superfamily, but its specific function is not yet clear. in this study, we respectively observe that normal physiological function of the cell and the change of the structure of the tissue by construct the cell and the zebrafish model animal. The possible mechanism of its tissue specificity was discussed in detail. In PRPF4, we found two mutations c. -114 _-97del and hPrp4 ~ (Pro315Leu). c. -114 _-97del may interfere with the two transcription factor binding sites, and we have observed a significant decrease in the activation activity of the PRPF4 using the luciferase reporter gene. The skin fibroblasts extracted from the patient can observe that h Prp4 ~ (Pro315Leu) can increase the shear factor level (including prpf4) in a variety of shear complex, and change the aggregation state of the shear complex SC35. The above results indicate that the increase in other shear factors of the shear complex may be a compensatory effect. In animal model, we have found that after the expression of h Prp4 ~ (Pro315Leu) can lead to a rise in the teratogenic rate of zebrafish, and can cause primary damage of the retina. When h Prp4 ~ (Pro315Leu) and MO (silent prpf4 gene) co-act, the lethal teratogenic rate of h Prp4 ~ (Pro315Leu) increased significantly. The above results show that PRPF4 is a new pathogenic mutation of RP and is induced by either a haploid or a dominant negative. In the SNRNP200 experiment, we observed that SNRNP200 is widely expressed in zebrafish. After the SNRNP200 was silent in the zebrafish model, it was found that its shear function was disturbed (cbln1), and the level of other shear sublevels in the shear complex could be increased, and the genes for certain retinal-specific expression were significantly down-regulated. and when the SNRNP200 is silent, it generally has an increase in the teratogenic rate, and the stem cell is involved in the early stage, which is consistent with the clinical course of the RP. In the SPP2 experiment, we found the p. Gly97Arg mutation of SPP2 (above the first of the two highly conserved disulfide bonds of the SPP24). Overexpression of p. Gly97Arg and p. Gly29Asp (a positive reference prepared in this experiment) results in the retention of SPP2 in the cells and ultimately the occurrence of endoplasmic reticulum stress. In a zebrafish-mode animal, we observed that the activity of the rod-like cells will be specific after the expression of SPP2 muation. The screening and study of these RP mutations can provide a better understanding of the pathogenesis of the pathology of the RP disease, thereby providing assistance for clinical treatment.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R774.1

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5 根據(jù)眼科專家石潯接聽熱線整理;視網(wǎng)膜色素變性有沒好的治療辦法[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

6 本報(bào)特約通訊員 劉堅(jiān);視網(wǎng)膜色素變性的針灸治療[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2004年

7 本報(bào)記者 張子平;視網(wǎng)膜色素變性應(yīng)終身服藥[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2001年

8 蔣月榮;免費(fèi)為患者檢測(cè)致病基因突變[N];科技日?qǐng)?bào);2005年

9 日聞;綠藻基因成功治療失明鼠[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

10 劉燕玲;手術(shù)逆轉(zhuǎn)眼底病[N];健康報(bào);2007年

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本文編號(hào)：2402967