【摘要】：目的研究BDNF對正常氧狀態(tài)下的鼠視網(wǎng)膜Miiller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST和谷氨酰胺合成酶GS表達(dá)及功能的調(diào)控作用。 方法取出生3-7天的新生昆明小鼠視網(wǎng)膜組織進(jìn)行正常氧狀態(tài)下Muller細(xì)胞培養(yǎng),取傳代后第三代Muller細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗。實驗分為BDNF干預(yù)組：鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞分別加入50、75、100、125和150ng/ml的BDNF培養(yǎng)24h；正常對照組：培養(yǎng)的Muller細(xì)胞中不加BDNF。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測Muller細(xì)胞GLAST及GSmRNA的表達(dá)；采用Western blot(?)陽免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測Muller細(xì)胞GLAST及GS蛋白質(zhì)的表達(dá)；采用L-[3,4-H3]-谷氨酸檢測100ng/ml的BDNF干預(yù)組與正常對照組Muller細(xì)胞對谷氨酸的攝取功能的差異。 結(jié)果不同濃度的BDNF均能上調(diào)GLAST及GS的表達(dá)(P0.05),并且隨著BDNF濃度的增大,GLAST及GS的表達(dá)量增加,當(dāng)BDNF濃度為100ng/ml時,GLAST及GS表達(dá)最強(qiáng)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示GLAST蛋白主要定位于Muller細(xì)胞胞漿及胞膜上,GS蛋白主要定位于Muller細(xì)胞胞漿中。不同濃度的BDNF作用于Muller細(xì)胞后,GLAST及GS蛋白表達(dá)增強(qiáng)。100ng/ml的BDNF能夠明顯增加Muller細(xì)胞對谷氨酸的攝取(P0.05)。 結(jié)論在正常氧狀態(tài)下,BDNF能夠上調(diào)Muller細(xì)胞中GLAST和GS的表達(dá),并且增加Muller細(xì)胞對細(xì)胞外谷氨酸的攝取。 目的研究缺氧對鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST和谷氨酰胺合成酶GS表達(dá)及功能的影響。 方法采用出生3-7天的小鼠視網(wǎng)膜組織進(jìn)行Muller細(xì)胞培養(yǎng),采用125μmol/L的氯化鈷(CoCl2)溶液分別進(jìn)行缺氧干預(yù)6h、12h、24h、48h和72h；不加CoCl2溶液培養(yǎng)的Muller細(xì)胞為正常對照組。采用RT-PCR方法檢測Muller細(xì)胞GLAST及GS mRNA的表達(dá)；采用Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測Muller細(xì)胞GLAST及GS蛋白質(zhì)的表達(dá)；采用L-[3,4-H3]-谷氨酸檢測CoCl2溶液缺氧干預(yù)組與正常對照組Muller細(xì)胞對谷氨酸的攝取功能的差異；采用Annexin Ⅴ-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果缺氧早期GLAST表達(dá)較正常對照組明顯增強(qiáng)(P0.001),CoCl2溶液干預(yù)12h后達(dá)到最強(qiáng)(P0.05),之后逐漸降低,CoCl2溶液干預(yù)72h后GLAST表達(dá)與正常對照組相比無明顯差異(P0.05)。缺氧也使GS的表達(dá)較正常對照組增加(P0.001),CoCl2溶液干預(yù)48h后GS表達(dá)最強(qiáng)(P0.001),之后開始下降。缺氧促進(jìn)Muller細(xì)胞對谷氨酸的攝取,CoCl2溶液干預(yù)48h后L-[3,4-H3]-谷氨酸的攝取量最大(P0.005),之后開始下降。而CoCl2溶液干預(yù)后,Muller細(xì)胞死亡數(shù)較正常對照組無明顯差異(P0.05)。 結(jié)論在一定時間范圍內(nèi)缺氧能夠上調(diào)Miiller細(xì)胞GLAST及GS的表達(dá),增加谷氨酸的攝取。但持續(xù)缺氧最終會引起Muller細(xì)胞功能失代償,從而導(dǎo)致谷氨酸的代謝能力降低。 目的研究BDNF對缺氧狀態(tài)下鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST和谷氨酰胺合成酶GS表達(dá)及功能的調(diào)控作用。 方法采用出生3-7天的小鼠視網(wǎng)膜組織進(jìn)行Muller細(xì)胞培養(yǎng),采用125μmol/L的CoCl2溶液干預(yù)72h,同時采用100ng/ml的BDNF分別干預(yù)24h、48h、72h和96h；采用125μmol/L的CoCl2溶液干預(yù)72h的Muller細(xì)胞為缺氧對照組；不加CoCl2溶液及BDNF的Muller細(xì)胞為正常對照組。采用RT-PCR方法檢測Muller細(xì)胞GLAST及GS mRNA的表達(dá)；采用Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測Muller細(xì)胞GLAST蛋白質(zhì)的表達(dá)；采用L-[3,4-H3]-谷氨酸檢測CoCl2溶液缺氧干預(yù)組與正常對照組Muller細(xì)胞對谷氨酸的攝取功能的差異；采用Annexin Ⅴ-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果與缺氧對照組及正常對照組相比,CoCl2缺氧干預(yù)后加入BDNF干預(yù)各組(24h、48h、72h),GLAST及GS的表達(dá)上調(diào)(P0.05),其中以CoCl2缺氧干預(yù)72h,BDNF干預(yù)48h組GLAST及GS表達(dá)最強(qiáng)(P0.05)。然而,CoCl2缺氧干預(yù)72h,BDNF干預(yù)96h組,GLAST及GS的表達(dá)與缺氧對照組及正常對照組無明顯差異(P0.05)。CoCl2缺氧干預(yù)后加入BDNF干預(yù)各組(24h、48h、72h)與缺氧對照組及正常對照組相比,Muller細(xì)胞對谷氨酸的攝取量增加(P0.05),以CoCl2缺氧干預(yù)72h,BDNF干預(yù)48h組谷氨酸的攝取量最大(P0.05)。加入CoCl2溶液及BDNF干預(yù)后,Muller細(xì)胞死亡數(shù)較正常對照組無明顯差異(P0.05)。 結(jié)論BDNF能夠上調(diào)缺氧狀態(tài)下視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞GLAST及GS的表達(dá),并增加Muller細(xì)胞對細(xì)胞外谷氨酸的攝取。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R774.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2350593