【摘要】：第一部分喉鱗癌microRNA表達(dá)譜變化及候選靶基因分析 背景：microRNA(微小RNA,簡(jiǎn)稱miRNA)是一種非編碼RNA,在惡性腫瘤的基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。本部分研究miRNA在喉鱗癌組織中表達(dá)譜變化,為L(zhǎng)SCC研究提供了新的方向。 方法：通過(guò)激光顯微切割技術(shù)(LCM)分離6例喉癌組織腫瘤細(xì)胞,采用miRNA芯片篩查喉癌組織與癌旁正常組織中miRNA表達(dá)譜變化,在48對(duì)喉癌組織及癌旁正常組織中,采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)驗(yàn)證miRNA芯片結(jié)果,通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)這些差異表達(dá)miRNAs的靶基因,在24對(duì)喉癌組織中檢測(cè)候選基因的表達(dá)水平。 結(jié)果：通過(guò)miRNA芯片檢測(cè),篩查得到29個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證后,有6個(gè)被證實(shí)包括表達(dá)上調(diào)的miR-21、miR-93、miR-205和miR-708,表達(dá)下調(diào)的miR-125b和miR-145。使用軟件預(yù)測(cè)共有25個(gè)候選靶基因,經(jīng)檢測(cè)后有10個(gè)候選基因在LSCC中表達(dá)水平有差異。 結(jié)論：這些差異表達(dá)的miRNA在喉癌的發(fā)生和演進(jìn)過(guò)程中可能發(fā)揮了重要作用,并且為miRNA的功能研究提供了方向。 第二部分miR-125b通過(guò)EIF2C2抑制喉癌Hep-2細(xì)胞增殖 背景：失控的自主性增殖是惡性腫瘤細(xì)胞具有的主要特征之一,細(xì)胞周期控制紊亂導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控異常。本部分在體外和體內(nèi)水平研究上調(diào)miR-125b對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制。 方法：采用慢病毒載體構(gòu)建miR-125b表達(dá)載體,感染Hep-2細(xì)胞后建立能夠穩(wěn)定高表達(dá)miR-125b的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株Hep-2-miR-125b和對(duì)照細(xì)胞株Hep-2-vector,WST-1實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡變化。并將Hep-2-miR-125b和Hep-2-vector細(xì)胞接種NOD/SCID小鼠,觀察小鼠移植瘤生長(zhǎng)情況。采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)初步驗(yàn)證EIF2C2(eukaryotic translation initiation factor2C-2,真核轉(zhuǎn)錄起始因子2C-2)是miR-125b的靶基因,在兩株細(xì)胞中檢測(cè)候選基因EIF2C2mRNA表達(dá)和蛋白水平變化。 結(jié)果：Hep-2-miR-125b能夠穩(wěn)定、高水平表達(dá)miR-125b,miR-125b過(guò)表達(dá)后能夠抑制Hep-2細(xì)胞的增殖能力,抑制NOD/SCID小鼠體內(nèi)成瘤能力,使Hep-2細(xì)胞停滯于G0-G1期,凋亡沒(méi)有變化。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)顯示miR-125b能夠抑制EIF2C2載體40%的熒光素酶活性,驗(yàn)證EIF2C2是miR-125b的靶基因,并在mRNA水平和蛋白水平上進(jìn)一步證實(shí)miR-125b可以抑制EIF2C2的表達(dá)。 結(jié)論：上調(diào)miR-125b通過(guò)靶向EIF2C2抑制喉癌Hep-2細(xì)胞增殖,本研究為以miR-125b作為靶點(diǎn)治療喉癌提供了一定的理論依據(jù)。
[Abstract]:Part I changes of microRNA expression profile and candidate target gene analysis in laryngeal squamous cell carcinoma background: microRNA (minimal RNA, (miRNA) is a non-coding RNA, that plays a role in the posttranscriptional regulation of gene expression in malignant tumors. In this part, we study the changes of miRNA expression profile in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC), and provide a new direction for the study of LSCC. Methods: six cases of laryngeal carcinoma tumor cells were isolated by laser microdissection technique (LCM). The miRNA expression patterns were screened by miRNA microarray in 48 pairs of laryngeal cancer tissues and adjacent normal tissues. Real-time quantitative PCR was used to verify the results of miRNA microarray. The target genes of these differentially expressed miRNAs were predicted by bioinformatics software. The expression level of candidate genes was detected in 24 pairs of laryngeal carcinoma tissues. Results: by miRNA chip analysis, 29 differentially expressed miRNAs, were screened after real-time quantitative PCR verification, and 6 of them were confirmed to include up-regulated miR-21,miR-93,miR-205 and down-regulated miR-125b and miR-145.. A total of 25 candidate target genes were predicted by software, and 10 candidate genes were detected with different expression levels in LSCC. Conclusion: these differentially expressed miRNA may play an important role in the development and progression of laryngeal carcinoma and provide a direction for the study of the function of miRNA. The second part: miR-125b inhibits the proliferation of laryngeal carcinoma Hep-2 cells through EIF2C2: uncontrolled autonomous proliferation is one of the main characteristics of malignant tumor cells. The disorder of cell cycle control leads to abnormal regulation of tumor cell proliferation. The effect and mechanism of upregulation of miR-125b on the proliferation of laryngeal carcinoma Hep-2 cells were studied in vitro and in vivo. Methods: miR-125b expression vector was constructed by using lentivirus vector. After infection with Hep-2 cells, stable and highly expressed miR-125b cell line Hep-2-miR-125b and control cell line Hep-2-vector, were established. WST-1 assay was used to detect cell proliferation and flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. Hep-2-miR-125b and Hep-2-vector cells were inoculated into NOD/SCID mice to observe the growth of transplanted tumor. Double luciferase reporter gene detection system was used to preliminarily verify that EIF2C2 (eukaryotic translation initiation factor2C-2, eukaryotic transcription initiation factor (2C-2) is the target gene of miR-125b. The expression of candidate gene EIF2C2mRNA and the change of protein level were detected in two cell lines. Results: Hep-2-miR-125b could be stable, and high level expression of miR-125b,miR-125b could inhibit the proliferation of Hep-2 cells, inhibit the tumorigenic ability of NOD/SCID mice, and make Hep-2 cells stop at G0-G1 phase. Apoptosis did not change. Double luciferase reporter gene detection system showed that miR-125b could inhibit 40% luciferase activity of EIF2C2 vector, which confirmed that EIF2C2 was the target gene of miR-125b. It was further confirmed that miR-125b could inhibit the expression of EIF2C2 at mRNA level and protein level. Conclusion: upregulation of miR-125b inhibits the proliferation of laryngeal carcinoma Hep-2 cells through targeted EIF2C2. This study provides a theoretical basis for the treatment of laryngeal carcinoma with miR-125b as the target.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R739.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王芳;余佳;張俊武;;小RNA(MicroRNA)研究方法[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2006年10期

2 張曉偉;李悅;李為民;楊寶峰;;microRNA與心血管疾病[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2008年02期

3 張強(qiáng);李明遠(yuǎn);;癌癥新策略—let-7 microRNA家族[J];西部醫(yī)學(xué);2009年07期

4 龔柳陽(yáng);吳小脈;馮加喜;;肺癌相關(guān)microRNA的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2009年09期

5 許建;武治印;于典科;;血清microRNA在腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用[J];科學(xué)通報(bào);2010年01期

6 張瑩;鄭素軍;段鐘平;;microRNA-21在肝臟中的作用[J];世界華人消化雜志;2010年25期

7 王羽歐;桑偉偉;張紅勝;;microRNA在人類免疫缺陷病毒感染中的作用[J];生物技術(shù)通訊;2011年01期

8 ;Mechanisms of microRNA 200a in Hepatic Insulin Resistance by Interleukin-6[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2011年03期

9 王福飛;李勇;;microRNA在腫瘤診治中的進(jìn)展[J];江西醫(yī)藥;2011年06期

10 王坦;王玉;楊廷桐;;microRNA在肺癌發(fā)生發(fā)展中的研究進(jìn)展[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 賈新正;盧肖男;聶慶華;張細(xì)權(quán);;雞部分microRNA的同源預(yù)測(cè)與克隆驗(yàn)證[A];中國(guó)動(dòng)物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國(guó)動(dòng)物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

2 李炯;段德民;鄭克孝;;新型非標(biāo)記高通量microRNA芯片技術(shù)[A];第一屆全國(guó)生物物理化學(xué)會(huì)議暨生物物理化學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

3 徐晨;鮑堅(jiān)強(qiáng);李定;郭強(qiáng)蘇;;microRNA-449在小鼠精子發(fā)生過(guò)程中的作用研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

4 李道傳;王慶;楊萍;唐石伏;李志芳;肖勇梅;魏青;張波;陳雯;;microRNA在細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的表達(dá)差異[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)生化與分子毒理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議、中國(guó)毒理學(xué)會(huì)遺傳毒理專業(yè)委員會(huì)第五屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議、廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

5 ;Induced cardiac myocytes apoptosis in vitro by micro RNA-122 overexpression[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 羅維;林宇翔;繩紀(jì)坡;于芳;胡寶成;;靶向細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白的microRNA的篩選及鑒定[A];第二屆模式生物與人類健康研討會(huì)會(huì)議論文集[C];2012年

7 ;microRNA-19a,a Novel Prognosis Predictor of Hepatocellular Carcinoma Following Liver Transplantation,Suppresses Cancer Metastasis by Down-Regulating SOX4[A];2012中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年

8 任雪峰;Dan GAILE;宮志宏;葛怡琛;黃陳平;閆洪濤;鄔紅梅;;砷對(duì)大鼠肝microRNA表達(dá)的影響[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)毒理學(xué)大會(huì)論文摘要[C];2013年

9 劉詠梅;王階;;心血管疾病相關(guān)microRNA的研究進(jìn)展[A];第十次中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)心血管病學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五次江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)心血管病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2010年

10 鞏麗穎;孫開來(lái);;兩種microRNA在先心病心肌組織中的表達(dá)[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 陳英云 喬蕤琳;哈醫(yī)大成功研發(fā)國(guó)內(nèi)首例microRNA轉(zhuǎn)基因及敲減小鼠模型[N];黑龍江經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

2 記者 陳青;2厘米以下肝癌檢出率88%[N];文匯報(bào);2011年

3 特約記者 肖鑫　記者 唐先武;我科學(xué)家提出肝癌預(yù)防判斷與治療新的潛在靶標(biāo)[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

4 記者 顧泳;一毫升血診斷早期小肝癌[N];解放日?qǐng)?bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊軍;軟骨分化過(guò)程中的microRNA的功能研究[D];上海交通大學(xué);2011年

2 朱丹霞;microRNA在慢性淋巴細(xì)胞白血病凋亡抑制通路中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

3 高雪;血漿microRNA作為肝癌及慢性乙肝肝損傷分子標(biāo)記物的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

4 鮑習(xí)琛;MicroRNA-302-367簇促進(jìn)體細(xì)胞重編程和microRNA-145抑制肺癌細(xì)胞增殖的研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

5 蔣婷婷;microRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的異常表達(dá)及其功能研究[D];浙江大學(xué);2012年

6 阮靈偉;深海熱液區(qū)管狀蠕蟲的分子特征及對(duì)蝦microRNA的初探[D];廈門大學(xué);2009年

7 徐鳳丹;microRNA基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)力學(xué)與功能研究[D];上海大學(xué);2010年

8 楊云嬌;microRNA作為原發(fā)性膽汁性肝硬化新的疾病標(biāo)志物及其功能的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 顏興起;MicroRNA功能的生物信息學(xué)分析及相關(guān)平臺(tái)的建立[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

10 付極;microRNA-451對(duì)胰腺癌細(xì)胞化療敏感性的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳旭;玉米microRNA的計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)與克隆及在干旱下的差異表達(dá)分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 史菊;基于qRT-PCR檢測(cè)ESCC組織/血清microRNA的方法建立及其應(yīng)用的研究[D];蘇州大學(xué);2012年

3 朱小舟;microRNA在胚胎血發(fā)生中的功能及調(diào)控研究[D];華東師范大學(xué);2011年

4 龐鑫;microRNA分離制備方法的研究[D];蘭州大學(xué);2012年

5 范心廷;鑒別三種肺癌亞型的microRNA數(shù)學(xué)模型在支氣管刷檢樣本中的驗(yàn)證[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

6 何沉峰;一種基于能量和結(jié)構(gòu)的microRNA成熟體預(yù)測(cè)方法[D];南京大學(xué);2011年

7 周冬根;犬類microRNA的計(jì)算機(jī)鑒定及分析[D];南昌大學(xué);2007年

8 李世風(fēng);馬鈴薯microRNA及其靶基因的預(yù)測(cè)與功能分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 劉曉玲;基于等溫放大反應(yīng)檢測(cè)microRNA[D];河北大學(xué);2013年

10 邊黎穎;水稻microRNA過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)化植株的獲得及表型與功能分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：2329402