【摘要】：目的：全植床深板層角膜移植術(shù)(Cull-bed deep lamellar keratoplasty, FBDLK)是我們獨(dú)創(chuàng)的一種深板層角膜移植技術(shù),該技術(shù)通過(guò)基質(zhì)鉤取聯(lián)合粘彈劑分離法可以成功地暴露全植床的受體角膜后彈力膜,術(shù)中我們采用-20℃冰凍保存的供體角膜作為移植材料。我們已證實(shí)了FBDLK手術(shù)的臨床價(jià)值,但關(guān)于這種水腫無(wú)細(xì)胞的移植材料在FBDLK術(shù)后的透明性變化和細(xì)胞成分重構(gòu)的問(wèn)題則尚待解決。對(duì)此進(jìn)行深入研究可以為這項(xiàng)新技術(shù)的推廣應(yīng)用提供更有力的理論依據(jù)。本研究擬觀察FBDLK術(shù)后冰凍保存供體角膜的透明性變化以及基質(zhì)細(xì)胞重構(gòu)的過(guò)程,并評(píng)價(jià)兩者間的關(guān)系。 方法：研究對(duì)象為2002年2月至2009年10月期間在浙江大學(xué)附屬邵逸夫醫(yī)院眼科成功接受FBDLK手術(shù)的病例133人141眼。術(shù)前原發(fā)病包括圓錐角膜(n=56眼),單皰病毒性角膜炎后角膜白斑(n=41眼),外傷后角膜白斑(n=25眼)和角膜變性(n=19眼)。病人于術(shù)后2天、7天,0.5個(gè)月、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月和24個(gè)月進(jìn)行隨訪,每次隨訪觀察角膜透明性變化并進(jìn)行裂隙燈顯微鏡照片記錄,并于術(shù)后0.5、1、3、6、12和24個(gè)月對(duì)患者進(jìn)行超聲角膜測(cè)厚和共焦顯微鏡檢查�；仡櫡治霾v資料,評(píng)估中央角膜厚度變化,通過(guò)裂隙燈顯微鏡照片觀察分析角膜水腫混濁和角膜前(25%)、中(50%)、后(25%)基質(zhì)Haze (非水腫性的基質(zhì)混濁)以及植片植床交界面混濁度的變化。并通過(guò)共焦顯微鏡資料觀察角膜各基質(zhì)層紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)和基質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量的變化規(guī)律。最后通過(guò)裂隙燈顯微鏡和共焦顯微鏡對(duì)應(yīng)觀察和相關(guān)分析研究Haze與基質(zhì)細(xì)胞重構(gòu)的關(guān)系。 結(jié)果：FBDLK術(shù)后冰凍保存供體角膜的平均上皮化完成時(shí)間為2.9±1.5天。中央角膜厚度在術(shù)后3個(gè)月時(shí)減少至正常水平,術(shù)后1年時(shí)趨于穩(wěn)定,達(dá)到515.6±50.6μm。角膜水腫混濁于術(shù)后1個(gè)月內(nèi)迅速消退。角膜基質(zhì)Haze最早在術(shù)后1個(gè)月時(shí)出現(xiàn),3個(gè)月時(shí)最明顯,12個(gè)月時(shí)基本減退。術(shù)后3-6個(gè)月時(shí),前基質(zhì)Haze級(jí)別顯著高于中、后基質(zhì)(P=0.000, Mann-Witney U檢驗(yàn))。不同術(shù)眼的前基質(zhì)Haze所達(dá)到的嚴(yán)重程度有所區(qū)別,通過(guò)二維邏輯回歸分析證實(shí)年齡是影響明顯前基質(zhì)Haze形成的主要因素(危險(xiǎn)因子,0.93；95%置信區(qū)間,0.87-0.99,P=0.015)。共焦顯微鏡下,部分冰凍保存供體角膜(33.1%)中可觀察到殘留細(xì)胞反光結(jié)構(gòu),均于術(shù)后1個(gè)月內(nèi)消失,以后出現(xiàn)紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)和基質(zhì)細(xì)胞的聚集。紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)的變化過(guò)程和Haze一致,且兩者在術(shù)后3-24個(gè)月時(shí)存在顯著正相關(guān)性(r=0.46-0.51,P=0.000-0.001)。裂隙燈顯微鏡下明顯的Haze形成對(duì)應(yīng)于共焦顯微鏡下角膜基質(zhì)內(nèi)大量紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)的聚集,Haze減退對(duì)應(yīng)于紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)減少和基質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的增加�；|(zhì)細(xì)胞密度從FBDLK術(shù)后3-24個(gè)月逐漸增加,前基質(zhì)的基質(zhì)細(xì)胞密度顯著高于中、后基質(zhì)(P0.001,One-Way ANOVA). FBDLK術(shù)后2年角膜前、中、后基質(zhì)重構(gòu)的基質(zhì)細(xì)胞密度分別達(dá)到正常角膜的28%、19%和9%。低年齡,術(shù)后3個(gè)月時(shí)有明顯前基質(zhì)Haze形成的患者,術(shù)后1年時(shí)前基質(zhì)重構(gòu)的基質(zhì)細(xì)胞密度越高。植片植床交界面混濁在術(shù)后1個(gè)月內(nèi)較明顯,術(shù)后3個(gè)月時(shí)開(kāi)始減退,術(shù)后1年時(shí)基本減退。術(shù)后0.5-12個(gè)月植片植床交界面混濁與紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)間存在顯著正相關(guān)(r=0.23-0.44,P=0.000-0.02)。 結(jié)論：FBDLK術(shù)后1個(gè)月時(shí)冰凍保存供體角膜的水腫混濁消退,3個(gè)月時(shí)恢復(fù)正常角膜厚度。角膜基質(zhì)Haze可能是FBDLK術(shù)后基質(zhì)細(xì)胞重構(gòu)過(guò)程的一個(gè)重要現(xiàn)象,與紊亂無(wú)細(xì)胞反光物質(zhì)的聚集有關(guān),在術(shù)后3個(gè)月時(shí)最重,1年時(shí)消退。前基質(zhì)重構(gòu)的基質(zhì)細(xì)胞顯著高于中、后基質(zhì),基質(zhì)細(xì)胞密度在術(shù)后2年時(shí)仍顯著低于正常角膜水平。
[Abstract]:OBJECTIVE: Full-bed deep lamellar keratoplasty (FBDLK) is an innovative technique for deep lamellar keratoplasty. It can successfully expose the posterior elastic membrane of the recipient cornea by matrix hooking combined with viscoelastic separation. As transplantation materials, we have confirmed the clinical value of FBDLK surgery, but the problem of transparency change and cell component remodeling of this edematous acellular graft after FBDLK remains to be solved. Further study on this issue will provide a more powerful theoretical basis for the popularization and application of this new technique. The changes of corneal transparency and the process of stromal cell remodeling after FBDLK were evaluated.
Methods: From February 2002 to October 2009, 133 patients (141 eyes) underwent FBDLK surgery in the Ophthalmology Department of Shaoyou Hospital, Zhejiang University. Primary preoperative diseases included keratoconus (n = 56 eyes), keratoleukoplakia after herpes simplex keratitis (n = 41 eyes), corneal leukoplakia after trauma (n = 25 eyes) and corneal degeneration (n = 19 eyes). All patients were followed up 2 days, 7 days, 0.5 months, 1 month, 3 months, 6 months, 12 months and 24 months postoperatively. The changes of corneal transparency were observed and slit lamp photographs were recorded. Ultrasound corneal thickness and confocal microscopy were performed at 0.5, 1, 3, 6, 12 and 24 months postoperatively. Thickness changes were observed and analyzed by slit lamp microscopy, including corneal edema and opacity, anterior (25%), middle (50%) and posterior (25%) stroma Haze (non-edematous stroma opacity) and interface opacity of implant bed. Confocal microscopy was used to observe the morphology of corneal stroma with disordered acellular reflector and stromal cells. Finally, the relationship between Haze and the remodeling of stromal cells was studied by slit lamp microscopy and confocal microscopy.
Results: The average epithelialization time of frozen preserved donor cornea after FBDLK was 2.9 (+ 1.5) days. The central corneal thickness decreased to normal level at 3 months after FBDLK, and stabilized at 515.6 (+ 50.6) microns at 1 year after FBDLK. The corneal edema and turbidity subsided rapidly within 1 month after FBDLK. At 3-6 months after surgery, the Haze level in the anterior matrix was significantly higher than that in the middle and posterior matrix (P = 0.000, Mann-Witney U test). The severity of Haze in the anterior matrix was different in different eyes. Two-dimensional logistic regression analysis showed that age was the main factor affecting the formation of Haze in the anterior matrix. Factor, 0.93; 95% confidence interval, 0.87-0.99, P = 0.015). Reflective structure of residual cells was observed in some frozen corneas (33.1%) under confocal microscope, and disappeared within one month after operation. After that, disordered acellular reflector and matrix cell aggregation appeared. There was a significant positive correlation (r = 0.46-0.51, P = 0.000-0.001) between the two groups at 3-24 months postoperatively. Haze formation under slit lamp microscopy corresponded to a large number of disordered acellular reflectors in the corneal stroma under confocal microscopy. The decrease of Haze corresponded to a decrease in disordered acellular reflectors and an increase in the number of stromal cells. Cell density increased gradually from 3 to 24 months after FBDLK. The density of stromal cells in anterior stroma was significantly higher than that in middle and posterior stroma (P 0.001, One-Way ANOVA). The density of stromal cells reconstructed in anterior, middle and posterior stroma reached 28%, 19% and 9% of normal cornea 2 years after FBDLK. The density of stromal cells was higher before 1 year after operation. The turbidity of graft-bed interface was more obvious at 1 month after operation, began to decrease at 3 months after operation, and basically decreased at 1 year after operation. There was a significant positive correlation between the turbidity of graft-bed interface and the disordered acellular reflector at 0.5-12 months after operation (r = 0.23-0.44, P = 0.000-0.02).
Conclusion: The edema and turbidity of frozen preserved donor cornea subsided at 1 month after FBDLK and recovered to normal corneal thickness at 3 months after FBDLK. Corneal stromal Haze may be an important phenomenon in the process of stromal cell remodeling after FBDLK, which is related to the disordered accumulation of acellular reflective substances. It was the most severe at 3 months after FBDLK and subsided at 1 year after FBDLK. Stromal cells were significantly higher than those in the middle and posterior stroma, and the density of stromal cells was still significantly lower than that of normal cornea at 2 years after surgery.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R779.65

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本文編號(hào)：2219705