發(fā)布時間：2018-08-31 11:53

【摘要】：研究背景 角膜具有透明、無血管、有彈性的特點和較強(qiáng)的屈光能力。正常角膜組織分為上皮層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層和內(nèi)皮層；其中上皮層由多層上皮細(xì)胞組成,基質(zhì)層含有角膜細(xì)胞,內(nèi)皮層由單層排列內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成。角膜緣含有豐富的血管網(wǎng),主要供給角膜周邊部的養(yǎng)分；房水、淚液等也是養(yǎng)分的重要來源。 在炎癥、外傷、免疫損害、微生物感染等病理因素作用下,角膜緣周邊血管網(wǎng)逐漸長入透明角膜內(nèi),形成角膜新生血管。角膜新生血管在抵御病理損害中具有重要作用,可以促進(jìn)炎癥吸收、角膜修復(fù)并改善角膜血供；同時由于大量的免疫效應(yīng)細(xì)胞聚集在角膜,改變了角膜固有的免疫學(xué)特征,導(dǎo)致角膜相對免疫赦免機(jī)制的消除；降低角膜的透明性,嚴(yán)重影響視力；為角膜疾病的后續(xù)治療帶來重大挑戰(zhàn)。 深入研究角膜新生血管生長和調(diào)控的機(jī)制具有重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)角膜新生血管的影響因素有很多,炎癥反應(yīng)是角膜新生血管的重要影響因素之一。角膜新生血管與炎癥反應(yīng)相互作用、相互依賴、相互協(xié)同。角膜炎性細(xì)胞浸潤通常出現(xiàn)在新生血管之前,角膜炎性浸潤部位與新生血管部位一致。炎癥反應(yīng)引起多種炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子釋放,從而打破促血管生長因子和抑制血管生長因子之間的平衡,最終導(dǎo)致角膜新生血管。 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究是生命科學(xué)的熱點和前沿,其基本研究思路已浸染生命科學(xué)的各領(lǐng)域。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)將為解釋生命基本現(xiàn)象、細(xì)胞代謝、腫瘤分子機(jī)制、病理反應(yīng)過程以及開發(fā)新型藥物提供新的思路。絲裂原活化蛋白激酶是一組能被不同細(xì)胞外刺激激活的一系列絲氨酸-蘇氨酸激酶,可磷酸化其它細(xì)胞質(zhì)蛋白,并從細(xì)胞漿移位至細(xì)胞核,作用于多種轉(zhuǎn)錄因子,從而激活不同基因表達(dá),產(chǎn)生復(fù)雜的生物學(xué)功能。在哺乳動物,高度保守的絲裂原活化蛋白激酶是信號從細(xì)胞外到細(xì)胞核傳遞的重要信使,參與了胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、細(xì)胞死亡、對環(huán)境的應(yīng)激適應(yīng)、炎癥反應(yīng)等多種細(xì)胞生理及病理反應(yīng)。 目前共發(fā)現(xiàn)了四種絲裂原活化蛋白激酶亞族,分別是細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶、p38和ERK5。細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶主要作用于細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)化和增殖；c-Jun氨基末端激酶參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化,并且與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)：ERK5信號通路參與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和早期基因表達(dá)的調(diào)控；而p38信號通路則在炎癥反應(yīng)中具有重要作用。 p38信號通路的激活是細(xì)胞內(nèi)磷酸化級聯(lián)反應(yīng)的最后步驟,磷酸化p38是p38的活化形式。p38激活后立即進(jìn)入細(xì)胞核,激活多種蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄因子,產(chǎn)生復(fù)雜的生物學(xué)效應(yīng)。p38在炎癥反應(yīng)過程中的多效性、高效性,使得p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路成為炎癥相關(guān)疾病研究的新的作用靶點而備受關(guān)注。p38成為絲裂原活化蛋白激酶家族中調(diào)控炎癥反應(yīng)的最重要成員。 炎癥反應(yīng)與角膜新生血管密切相關(guān),而p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在調(diào)控炎癥反應(yīng)中具有重要作用,因此p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能在角膜新生血管調(diào)控中具有重要作用。研究也發(fā)現(xiàn)p38抑制劑在炎癥相關(guān)疾病動物模型中表現(xiàn)出較好的抗炎作用,p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑SB220025能顯著降低肉芽腫組織內(nèi)血管密度。角膜新生血管研究一直是眼科研究的熱點和難點。p38信號通路具有復(fù)雜的生物學(xué)效應(yīng),參與炎癥反應(yīng)過程,調(diào)控多種細(xì)胞因子的表達(dá),從該通路研究角膜新生血管的機(jī)制,必將成為研究的新方向和新靶點。 實驗中,我們通過檢測血管化進(jìn)程中大鼠角膜磷酸化p38表達(dá),來探討p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和角膜新生血管的相關(guān)性；通過研究p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性拮抗劑SB203580對大鼠角膜的毒性作用,來研究其用于阻斷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的可能性；進(jìn)一步研究SB203580對大鼠角膜新生血管的抑制作用,探討p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與調(diào)控角膜新生血管的可能機(jī)制；最后通過可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2試圖阻斷血管內(nèi)皮生長因子的作用,進(jìn)一步檢測磷酸化p38的表達(dá),并分析p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和血管內(nèi)皮生長因子的關(guān)系。 第一部分磷酸化p38在大鼠角膜血管化進(jìn)程中的表達(dá) 目的 檢測p38和磷酸化p38在大鼠角膜血管化進(jìn)程中的表達(dá),探討大鼠角膜新生血管生長是否和p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活相關(guān),并進(jìn)一步分析p38和磷酸化p38在大鼠角膜血管化進(jìn)程中時間和空間分布特征,擬最終證實p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活可能與大鼠角膜新生血管相關(guān),p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的早期激活可能是大鼠角膜新生血管的始動因素之一,為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。 方法 1.角膜縫線法建立SD大鼠角膜新生血管模型建立大鼠右眼新生血管模型,在大鼠角膜緣內(nèi)1mm等間距縫合3針,深及基質(zhì)層。選取未縫線的正常角膜作為陰性對照組,并將縫線后大鼠隨機(jī)分為縫線后第1日組,第3日組以及第7日組,每組8只。 2.顯微鏡下觀察角膜縫線后每日在手術(shù)顯微鏡下觀察,均放大16倍,注意角膜透明度、上皮完整性、縫線數(shù)量以及是否存在角膜感染。 3.計算角膜新生血管面積計算角膜縫線后第1日、第3日以及第7日,分別在顯微鏡下測量角膜新生血管長度,并依據(jù)Robert公式計算角膜新生血管面積。 4. Western Blot檢測縫線后角膜血管化進(jìn)程中p38和磷酸化p38的表達(dá)縫線當(dāng)日以及縫線后第1、3、7日,分別從各組隨機(jī)選取5只大鼠,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western Blot方法檢測各組角膜p38以及磷酸化p38的表達(dá),并檢測目的蛋白IOD與內(nèi)參GAPDH的IOD,二者比值作為目的蛋白的相對表達(dá)量。 5.免疫熒光檢測p38和磷酸化p38在角膜上的表達(dá)按照分組分別在特定時間摘取角膜,采用免疫熒光的方法檢測p38和磷酸化p38在角膜的表達(dá)以及定位。 6.統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0軟件分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。當(dāng)方差齊性時,采用one-way ANOVA分析；方差不齊時采用Welch法校正。組間比較,當(dāng)方差齊性時,采用LSD分析；當(dāng)方差不齊性時,采用Dunnett T3進(jìn)行分析。所有統(tǒng)計推斷均采用雙側(cè)檢驗,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果 1.顯微鏡下觀察縫線后7d,角膜緣血管網(wǎng)充血,縫線處角膜水腫增厚,并隨時間延長逐漸加重,縫線后3d,睫狀充血明顯,角膜縫線處角膜緣明顯局限性充血,可見新生血管緩慢長入,每處約2-5支,縫線處角膜未見明顯混濁,全角膜透明；縫線后7d,見大量新生血管長入透明角膜,新生血管呈密集網(wǎng)狀,無法計數(shù),部分新生血管長到縫線處,縫線處角膜輕度混濁并增厚。 2.角膜新生血管面積縫線后第1日,未發(fā)現(xiàn)新生血管；縫線后3、7d,角膜新生血管面積分別為4.1-1.22、7.26±0.72mm2；而正常角膜無新生血管。 3.Western Blot結(jié)果 各組角膜p38的相對表達(dá)量為：正常角膜組0.5681±0.1074,縫線后第1日組為0.5512±0.0795,第3日組為0.5517±0.0908,第7日組為0.5641±0.1168；不同實驗組間p38的表達(dá)量無顯著性差異(F=0.037,P=0.990)。 各組角膜磷酸化p38的相對表達(dá)量為：正常角膜組0.2969±0.0475,縫線后第1日組0.6219±0.0609,第3日組0.2812±0.0602,第7日組為0.3149±0.0496；不同組之間磷酸化p38相對表達(dá)量有顯著性差異(F=43.895,P=0.000)；以縫線后第1日最高,縫線后第3、7日次之；而正常角膜與縫線后第3、7日無顯著性差異。 4.免疫熒光結(jié)果各組p38表達(dá)基本一致,主要分布在炎性浸潤細(xì)胞,新生血管內(nèi)皮細(xì)胞以及部分上皮細(xì)胞,主要定位于細(xì)胞漿；而磷酸化p38表達(dá)在炎性細(xì)胞、新生血管內(nèi)皮細(xì)胞,主要定位于細(xì)胞核,在縫線后第1日高表達(dá)。 結(jié)論 1.在大鼠角膜血管化進(jìn)程中,p38表達(dá)基本恒定；而磷酸化p38在縫線后第1日,即出現(xiàn)高峰表達(dá),而后迅速衰減,至縫線后第3、7日已基本恢復(fù)至正常。 2.大鼠角膜縫線后,早期即有p38信號通路的強(qiáng)激活,而后逐漸出現(xiàn)可觀察到的角膜新生血管。 3.縫線后大鼠角膜新生血管化可能與p38信號傳導(dǎo)通路激活相關(guān)。 4.p38信號傳導(dǎo)通路的早期激活可能是縫線后角膜新生血管生長的始動因素之一。 第二部分結(jié)膜下注射50μmol/L p38信號傳導(dǎo)通路抑制劑SB203580對大鼠角膜的毒性作用 目的 研究結(jié)膜下注射SB203580對大鼠角膜的毒性作用,探索結(jié)膜下注射SB203580的合適濃度,探討結(jié)膜下注射SB203580用于阻斷p38信號傳導(dǎo)通路的可能性,為后續(xù)實驗奠定基礎(chǔ)。 方法 1.配置50μmol/L SB203580溶液取0.05mL預(yù)冷的二甲基亞砜加入1mgSB203580中,振蕩,然后加入預(yù)冷的生理鹽水53.00mL,充分振蕩混勻。按每支1mL分裝于無菌凍存管中,-20℃凍存?zhèn)溆谩?2.實驗分組SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,裂隙燈顯微鏡檢查排除大鼠結(jié)膜、角膜疾病后,隨機(jī)分為50μmol/L SB203580組和生理鹽水組,每組10只。 3.結(jié)膜下注射均選右眼進(jìn)行實驗,在角膜緣外0.5～1.0mm,沿順時針方向,在12,2,4,6,8,10,12點位注射,依次每日選取1個注射點,每日1次行結(jié)膜下注射,共7d。按照實驗分組分別注射50μmol/L SB203580和生理鹽水0.04mL。 4.實驗觀察以及角膜炎癥指數(shù)評分在裂隙燈顯微鏡下觀察注射點結(jié)膜充血情況、角膜透明情況以及上皮是否完整等。結(jié)膜下注射7d后,在裂隙燈下觀察中央角膜水腫程度、周邊角膜水腫程度以及睫狀充血程度行角膜炎癥指數(shù)評分。 5.組織學(xué)及透射電鏡觀察結(jié)膜下注射7d后,摘取角膜,沿中心線剖切一分為二。一半用40g/L多聚甲醛固定,常規(guī)制作石蠟切片,蘇木精-伊紅染色觀察組織學(xué)改變；另一半迅速用預(yù)冷的25g/L戊二醛固定,常規(guī)丙酮梯度脫水、滲透、包埋,超薄切片,醋酸鈾及檸檬酸鉛雙重染色,透射電鏡觀察。 6.統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0軟件分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用T檢驗,所有統(tǒng)計推斷均采用雙側(cè)檢驗,檢驗水準(zhǔn)a=0.05。 結(jié)果 1.動物觀察裂隙燈顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SB203580注射部位結(jié)膜呈可逆性貧血狀改變,注射次日即消失；在注射過程中,連續(xù)觀察見角膜始終透明,上皮層無水腫、無剝脫。 2.在連續(xù)結(jié)膜下注射SB203580或生理鹽水7d后,兩組大鼠角膜炎癥指數(shù)分別為：0.14±0.07,0.21±0.10,兩組間炎癥指數(shù)無顯著性差異(t=1.716,P=0.103)；其中兩組睫狀充血程度評分分別為：0.70±0.48和1.30±0.67,生理鹽水組睫狀充血程度評分顯著高于SB203580組(t=2.286,P=0.035)。 3.組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)所有大鼠角膜上皮層完整,基質(zhì)層排列規(guī)則,內(nèi)皮層連續(xù)、無斷裂。進(jìn)一步透射電鏡觀察,細(xì)胞結(jié)構(gòu)及細(xì)胞器未見明顯異常。 結(jié)論 1.連續(xù)7d結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580對大鼠角膜無明顯毒性作用,未發(fā)現(xiàn)角膜組織結(jié)構(gòu)以及超微結(jié)構(gòu)的典型損害。 2.連續(xù)結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580組大鼠睫狀充血程度評分顯著低于連續(xù)結(jié)膜下注射生理鹽水組,推測可能與SB203580的抗炎癥反應(yīng)有關(guān)。 第三部分結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580抑制大鼠角膜新生血管的實驗研究 目的 研究結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580對大鼠角膜新生血管的抑制作用,檢測其對大鼠角膜磷酸化p38和血管內(nèi)皮生長因子A表達(dá)的影響,并分析大鼠角膜的組織結(jié)構(gòu)特征,初步探討結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580抑制大鼠角膜新生血管的可能機(jī)制。 方法 1.角膜縫線法建立SD大鼠角膜新生血管模型采用縫線法建立SD大鼠右眼角膜新生血管模型,將縫線后的大鼠隨機(jī)分為兩組：50μmol/L SB203580結(jié)膜下注射組和生理鹽水結(jié)膜下注射組,每組8只。 2.結(jié)膜下注射依據(jù)分組從術(shù)后第1日開始用藥,分別結(jié)膜下注射不同藥物,每日1次,共7d。 3.臨床觀察角膜縫線后每日在手術(shù)顯微鏡下觀察,均放大16倍,注意角膜透明度、上皮完整性、縫線數(shù)量以及是否存在角膜感染。 4.計算角膜新生血管面積計算角膜縫線后第7日,分別在顯微鏡下測量角膜新生血管長度,并依據(jù)Robert公式計算角膜新生血管面積。 5.Western Blot檢測磷酸化p38和血管內(nèi)皮生長因子A的表達(dá)縫線后第7日,分別從各組隨機(jī)選取5只大鼠,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western Blot方法檢測各組角膜磷酸化p38和血管內(nèi)皮生長因子A的表達(dá)。 6.免疫組織化學(xué)法染色檢測CD31的表達(dá)和常規(guī)病理學(xué)檢查縫線后第7日,摘取角膜,常規(guī)多聚甲醛固定,連續(xù)切片,常規(guī)蘇木精-伊紅染色觀察組織學(xué)改變,并行免疫組織化學(xué)染色檢測CD31的表達(dá)。 7.統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0軟件分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用t檢驗,所有統(tǒng)計推斷均采用雙側(cè)檢驗,檢驗水準(zhǔn)a=0.05。 結(jié)果 1.顯微鏡下觀察生理鹽水組大鼠角膜縫線后1d,角膜緣血管網(wǎng)充血；縫線后3d,睫狀充血明顯,縫線處新生血管緩慢長入,角膜透明；縫線后7d,見大量新生血管長入透明角膜,新生血管呈密集網(wǎng)狀。而50μmol/L SB203580組大鼠角膜縫線后1d,角膜緣血管網(wǎng)充血不明顯；縫線后3d,纖細(xì)血管開始長入透明血管；縫線后7d,見細(xì)小血管逐漸長入,均未到達(dá)角膜縫線處。 2.縫線后7d兩組角膜新生血管面積比較50μmol/L SB203580結(jié)膜下注射組和生理鹽水結(jié)膜下注射組的角膜新生血管面積分別為4.78±1.25和6.86±1.25mm2; SB203580組角膜新生血管面積低于生理鹽水組(t=-3.319,P=0.005)。結(jié)膜下50μmol/L SB203580抑制大鼠角膜新生血管生長。 3. Western Blot結(jié)果縫線后7d,50μmol/L SB203580結(jié)膜下注射組和生理鹽水結(jié)膜下注射組大鼠角膜磷酸化p38的相對表達(dá)量分別為0.2603±0.0396和0.3937±0.1039,磷酸化p38在SB203580組的表達(dá)顯著低于生理鹽水組(t=-2.682,P=0.028)；血管內(nèi)皮生長因子A在兩組的相對表達(dá)量分別為0.6904±0.1032和0.7411±0.1007,兩組血管內(nèi)皮生長因子A的表達(dá)量無顯著性差異(t=-0.786,P=0.454)。結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580能抑制磷酸化p38表達(dá)；而對血管內(nèi)皮生長因子A的表達(dá)無明顯影響。 4.病理學(xué)及免疫組織化學(xué)染色結(jié)果術(shù)后7d,50μmol/L SB203580組角膜各層排列整齊,新生血管管腔細(xì)小、密度低,炎性細(xì)胞浸潤少, CD31染色結(jié)果：強(qiáng)表達(dá)于新生血管管腔內(nèi)皮細(xì)胞,排列尚規(guī)整,角膜內(nèi)皮細(xì)胞弱表達(dá)；而生理鹽水組角膜大量血管樣結(jié)構(gòu),管腔較大、較多,炎性細(xì)胞浸潤多且分布無規(guī)則,進(jìn)一步CD31染色：大量陽性細(xì)胞分布于新生血管,排列雜亂,部分炎性浸潤細(xì)胞亦有較強(qiáng)表達(dá)。 結(jié)論 1.結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580顯著抑制大鼠角膜新生血管生長。 2.結(jié)膜下注射50μmol/L SB203580抑制磷酸化p38的表達(dá),即抑制p38的激活；而對大鼠角膜VEGFA的表達(dá)無顯著影響。 3.SB203580抑制炎癥反應(yīng),抑制炎性細(xì)胞在角膜的浸潤。 4.進(jìn)一步證實p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和大鼠角膜新生血管調(diào)控相關(guān)。 5.靶向p38阻斷可能是角膜新生血管治療的新策略。 第四部分可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2對血管化大鼠角膜磷酸化p38表達(dá)的影響 目的 采用可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2阻斷血管內(nèi)皮生長因子與其受體的結(jié)合,研究其是否能抑制大鼠角膜新生血管生長,并進(jìn)一步探討其是否參與p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活,最終分析p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與調(diào)控角膜新生血管是否與血管內(nèi)皮生長因子途徑相關(guān)。 方法 1.建立大鼠角膜新生血管模型采用縫線法建立SD大鼠右眼角膜新生血管模型,將縫線后的大鼠隨機(jī)分為兩組：可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2結(jié)膜下注射組和生理鹽水結(jié)膜下注射組,每組8只。 2.結(jié)膜下注射依據(jù)分組從術(shù)后第1日開始用藥,分別結(jié)膜下注射不同藥物,每日1次,共7d。 3.臨床觀察每日在顯微鏡下觀察角膜縫線后角膜透明度、上皮完整性、縫線數(shù)量以及是否存在角膜感染,并重點觀察角膜新生血管情況。 4.計算后縫線后7d兩組角膜新生血管面積顯微鏡下測量角膜新生血管的長度并計算角膜新生血管面積。 5.Western Blot檢測兩組大鼠角膜p38和磷酸化p38的表達(dá)縫線后7d,各組分別隨機(jī)選取5只,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western Blot方法檢測各組角膜p38和磷酸化p38的表達(dá)。 6.病理學(xué)及免疫熒光檢查各組隨機(jī)選取3只角膜,常規(guī)多聚甲醛固定,行病理學(xué)檢查；修復(fù)抗原后行免疫熒光檢測p38和磷酸化p38的分布。 7.統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0軟件分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用T檢驗,所有統(tǒng)計推斷均采用雙側(cè)檢驗,檢驗水準(zhǔn)a=0.05。 結(jié)果 1.動物觀察生理鹽水對照組,在觀察過程中,睫狀充血明顯,新生血管管腔較粗且生長較快,縫線后7日,大量密集網(wǎng)狀新生血管跨越角膜縫線處。而可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2組在觀察 2.角膜新生血管面積結(jié)果可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2結(jié)膜下注射組和生理鹽水注射組大鼠角膜新生血管面積分別為3.87±0.73和6.94±0.92mm2,可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2結(jié)膜下注射組顯著低于生理鹽水結(jié)膜下注射組(t=-7.343,P=0.000)。 3.Western Blot結(jié)果可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2結(jié)膜下注射組和生理鹽水組大鼠角膜p38的相對表達(dá)量分別為0.6179±0.1334和0.6038±0.1484,兩組p38表達(dá)無顯著性差異(t=0.158,P=0.878)；兩組磷酸化p38的相對表達(dá)量分別為0.2667±0.0642和0.4771±0.1171,可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2結(jié)膜下注射組顯著低于生理鹽水注射組(t=-3.523,P=0.008)。結(jié)膜下注射可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抑制p38激活。 4.病理學(xué)和免疫熒光檢查結(jié)果術(shù)后7d,可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2結(jié)膜下注射組角膜各層排列整齊,新生血管管腔細(xì)小、密度低；而生理鹽水組角膜見大量血管樣結(jié)構(gòu),管腔較大、較多,炎性細(xì)胞浸潤雜亂。兩組p38免疫熒光檢測分布基本一致,多位于細(xì)胞漿；而磷酸化p38強(qiáng)表達(dá)在生理鹽水組,定位均在細(xì)胞核內(nèi)。 結(jié)論 1.結(jié)膜下注射可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抑制大鼠角膜新生血管生長。 2.結(jié)膜下注射可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抑制大鼠角膜血管化進(jìn)程中p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活,下調(diào)磷酸化p38的表達(dá)。 3.p38與血管內(nèi)皮生長因子所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程既互相聯(lián)系、偶有協(xié)同,又相對獨立、各自作用；在紛繁復(fù)雜的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)中,二者可能不是簡單的線性排列關(guān)系。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R772.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張海峰;鐘彥彥;陸曉和;;p38絲裂原活化蛋白激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與角膜新生血管[J];國際眼科雜志;2011年09期

2 Tyler ZARUBIN;Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J];Cell Research;2005年01期

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本文編號：2214902