【摘要】：角膜無血管是角膜透明和正常視力的重要保證。雖然角膜新生血管對(duì)角膜損傷修復(fù)起到一定作用,但是長期慢性的角膜血管新生會(huì)形成角膜翳,破壞角膜正常微環(huán)境,使眼前節(jié)免疫赦免減弱或消失,影響視力健康。尋求有效治療角膜新生血管的藥物具有重大意義,胸腺素β4具有多重生物學(xué)功能,能預(yù)防細(xì)胞凋亡,減少炎癥發(fā)生,有利于血管生成,促進(jìn)角膜痊愈,但其對(duì)角膜新生血管的作用卻一直沒有定論,還尚有爭議。因此,我們設(shè)計(jì)體外與體內(nèi)的樣本隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)探究胸腺素β4對(duì)角膜新生血管形成的影響,為胸腺素β4對(duì)角膜新生血管作用的研究提供理論依據(jù)。 體外原代培養(yǎng)兔的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,當(dāng)?shù)谌媚氺o脈內(nèi)皮細(xì)胞生長至連續(xù)的單層狀態(tài),按一定密度傳代至96孔板,分別按0ng/mL,10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL濃度加入胸腺素β4繼續(xù)培養(yǎng),于24h后分別加入cck-8試劑孵育1h,用酶標(biāo)儀檢測吸光度值,用于測定細(xì)胞增殖度。 體內(nèi)通過角膜囊袋法建立兔角膜新生血管模型,采用角膜內(nèi)植入瓊脂糖包裹堿性成纖維生長因子緩釋明膠海綿小粒誘導(dǎo)兔角膜新生血管的形成。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按胸腺素β4的濃度分為0.1μg/μL、1μg/μL、10μg/gL三個(gè)藥物治療組和PBS對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組每天兩次角膜表面應(yīng)用Tβ4滴眼治療,對(duì)照組每天兩次角膜表面滴加PBS,并觀察新生血管生長情況,計(jì)算抑制率和消退率。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中樣本濃度為100ng/mL和1000ng/mL的胸腺素β4對(duì)兔臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞有顯著性增殖效果；體內(nèi)模型實(shí)驗(yàn)中藥物濃度為1μg／μL的胸腺素β4的抑制率最高,效果最好,10μg/μL的胸腺素β4早期抑制率較1μg/μL的胸腺素p4低,后期則較高。與PBS對(duì)照組相比,三個(gè)濃度的胸腺素β4藥物治療組都對(duì)角膜新生血管的形成有顯著的抑制作用,但0.1μg/μL的胸腺素β4治療組只是抑制了角膜血管生長,而1μg/μL的胸腺素β4治療組和10μg/μL的胸腺素β4治療組既抑制了角膜新生血管的生長,又顯著地促進(jìn)了角膜新生血管的退化。 可見,胸腺素β4在體外細(xì)胞環(huán)境中具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的效果,但在動(dòng)物機(jī)體的大環(huán)境中,胸腺素β4對(duì)角膜新生血管具有抑制作用。
[Abstract]:Cornea without blood vessel is an important guarantee of corneal transparency and normal vision. Although corneal neovascularization plays an important role in the repair of corneal injury, chronic corneal neovascularization will form corneal pannus, destroy the normal microenvironment of cornea, weaken or disappear immune immunity of anterior segment, and affect the health of visual acuity. It is of great significance to seek effective drugs for the treatment of corneal neovascularization. Thymosin 尾 4 has many biological functions, which can prevent cell apoptosis, reduce inflammation, facilitate angiogenesis and promote corneal healing. However, its role in corneal neovascularization has been inconclusive and controversial. Therefore, we designed random controlled experiments in vitro and in vivo to explore the effect of thymosin 尾 4 on corneal neovascularization, and to provide a theoretical basis for the study of the effect of thymosin 尾 4 on corneal neovascularization. Primary cultured rabbit umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro. When the third generation of rabbit umbilical vein endothelial cells grew to a continuous monolayer state and were subcultured to 96 well plates according to a certain density, Thymosin 尾 4 was added to Thymosin 尾 4 at the concentration of 0 ng / mL 10 ng / m L ~ (-1) L ~ (-1) ~ 100 ng 路m ~ (-1) 路L ~ (-1) ~ (-1) ~ 100 ng / mL, respectively. After 24 hours incubation with cck-8 reagent for 1 hour, the absorbance value was detected by enzyme marker, and the cell proliferation was measured. Rabbit corneal neovascularization model was established in vivo by the method of corneal capsule bag. Rabbit corneal neovascularization was induced by implantation of agarose encapsulated basic fibroblast growth factor (BFGF) sustained release gelatin sponge (BFGF) into rabbit corneal neovascularization model. The experimental animals were divided into three groups according to the concentration of thymosin 尾 _ 4 (0.1 渭 g / 渭 L ~ (-1) 渭 g / 渭 L ~ (10) 渭 g/gL). The experimental group was treated with T 尾 _ 4 eye drops twice a day, the control group was treated with PBS, twice a day and the growth of neovascularization was observed. The inhibition rate and extinction rate were calculated. The results showed that Thymosin 尾 4 with concentration of 100ng/mL and 1000ng/mL had significant effect on proliferation of rabbit umbilical vein endothelial cells in vitro, and thymosin 尾 4 with concentration of 1 渭 g / 渭 L had the highest inhibitory rate in vivo. The early inhibitory rate of 10 渭 g / 渭 L thymosin 尾 4 was lower than that of 1 渭 g / 渭 L thymosin p4, and the later stage was higher. Compared with PBS control group, three concentration of thymosin 尾 4 drug treatment group all had significant inhibition on corneal neovascularization, but 0.1 渭 g / 渭 L thymosin 尾 4 treatment group only inhibited corneal angiogenesis. However, 1 渭 g / 渭 L thymosin 尾 4 treatment group and 10 渭 g / 渭 L thymosin 尾 4 treatment group not only inhibited corneal neovascularization growth, but also significantly promoted corneal neovascularization degeneration. It can be seen that thymosin 尾 4 can promote the proliferation of vascular endothelial cells in vitro, but thymosin 尾 4 can inhibit corneal neovascularization in the environment of animal body.
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R772.2;S865.19

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2207033