【摘要】：目的構(gòu)建穩(wěn)定真核翻譯起始因子1(eIF1)過表達(dá)的鼻咽癌細(xì)胞株,研究其對鼻咽癌細(xì)胞增殖和遷徙活性的影響。方法采用pEGFP-C1真核表達(dá)系統(tǒng),構(gòu)建eIF1過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE1細(xì)胞,進(jìn)而獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株CNE1-eIF1及其對照細(xì)胞,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)驗(yàn)證該細(xì)胞中eIF1的過表達(dá)情況。采用細(xì)胞增殖與遷徙實(shí)驗(yàn)分別檢測CNE1-eIF1細(xì)胞增殖和遷徙活性。結(jié)果酶切電泳鑒定及測序檢測顯示pEGFP-C1-eIF1真核表達(dá)載體構(gòu)建成功。穩(wěn)定eIF1過表達(dá)的鼻咽癌CNE1細(xì)胞CNE1-eIF1的eIF1基因和蛋白的表達(dá)水平與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染相比分別增加2.85倍和2.58倍(P0.05),而其增殖和遷徙活性組分別下調(diào)55%和36%(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建eIF1過表達(dá)鼻咽癌細(xì)胞株,eIF1過表達(dá)可顯著下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞的增殖和遷徙活性,提示其具有潛在的抑癌作用。
[Abstract]:Objective to construct a stable eukaryotic translation initiation factor 1 (eIF1) overexpression nasopharyngeal carcinoma cell line and to study its effects on the proliferation and migration activity of nasopharyngeal carcinoma cells. Methods pEGFP-C1 eukaryotic expression system was used to construct eIF1 overexpression vector to transfect nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE1 cells, and then stable transfection cell line CNE1-eIF1 and its control cells were obtained. The overexpression of eIF1 was detected by real-time fluorescence quantitative PCR (qPCR) and Western blot (Western blot). Cell proliferation and migration activity of CNE1-eIF1 cells were detected by cell proliferation and migration assay. Results Eukaryotic expression vector of pEGFP-C1-eIF1 was successfully constructed by restriction endonuclease electrophoresis and sequencing. The expression level of eIF1 gene and protein in CNE1-eIF1 of CNE1 cells with stable eIF1 overexpression increased by 2.85 and 2.58 times (P0.05), respectively, while the proliferation and migration activity of CNE1 cells were down-regulated by 55% and 36% (P0.05) respectively. Conclusion the overexpression of eIF1 overexpression of nasopharyngeal carcinoma cell line can significantly down-regulate the proliferation and migration activity of nasopharyngeal carcinoma cell line, suggesting that it has a potential anti-cancer effect.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;廣東醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院;
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2015A030310046) 廣東省中醫(yī)藥局科研基金資助項(xiàng)目(20151261) 廣東醫(yī)科大學(xué)國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(201510571003)
【分類號】：R739.63

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本文編號：2177978