【摘要】：目的:1.使用不同的小分子化合物組合,誘導(dǎo)人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞分化,觀察誘導(dǎo)化分化過程中各組不同階段細胞形態(tài)學(xué)變化。2.從細胞水平、蛋白水平、基因水平檢測人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞分化過程中Ki67、Sox2、Otx2、Rhodopsin的表達水平,比較不同小分子化合物作用下各組Ki67、Sox2、Otx2、Rhodopsin的表達規(guī)律及各組的分化程度和效率,探索更優(yōu)化的誘導(dǎo)分化策略。方法:1.使用貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)人胚胎干細胞,在培養(yǎng)過程中使用不同的小分子化合物組合ABSRT、ABSRTA作用于人胚胎干細胞,觀察誘導(dǎo)分化過程中各時期細胞形態(tài),在誘導(dǎo)分化的第0天、第10天、第20天、第30天收取標本,利用免疫熒光染色檢測誘導(dǎo)分化過程中各個時期細胞Ki67、Sox2、Otx2、Rhodopsin的表達規(guī)律。2.在誘導(dǎo)分化的第0天、第10天、第20天、第30天收取標本,采用Western Blot、qRT-PCR檢測誘導(dǎo)分化過程中各時期細胞Ki67、Sox2、Otx2、Rhodopsin的表達水平,從蛋白水平、基因水平分析各組Ki67、Sox2、Otx2、Rhodopsin表達特點,比較各組的誘導(dǎo)分化效率。結(jié)果:1.顯微鏡下觀察貼壁后的人胚胎干細胞形態(tài),可見細胞逐漸由圓形拉長為長梭形,胞體透亮且折光性強,核大、核仁明顯、核分裂像多見,細胞增殖分裂旺盛,細胞克隆集落相互融合成網(wǎng)狀,在細胞復(fù)蘇后60個小時細胞融合度可達約80%。2.人胚胎干細胞小克隆集落在鋪有1%Matrigel的六孔板上生長后,第一天即可觀察到細胞小克隆集落貼壁生長,中間密度大,細胞逐漸爬出由圓形拉伸為長梭形,在用2%Matrigel覆蓋細胞兩天后可觀察到細胞克隆集落形成柱狀神經(jīng)上皮,誘導(dǎo)分化第十天可觀察到玫瑰花結(jié)狀結(jié)構(gòu)形成,隨誘導(dǎo)時間延長,細胞的軸突逐漸增多并伸長,細胞逐漸成熟,其形態(tài)與神經(jīng)細胞接近。3.小分子化合物ABSRT組、ABSRTA組均可誘導(dǎo)人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞分化;ABSRT組、ABSRTA組均表現(xiàn)為隨誘導(dǎo)時間延長Ki67表達水平逐漸下調(diào),不同階段下調(diào)程度不同,兩組Sox2均陽性表達,且表達水平均上調(diào),不同階段上調(diào)程度不同,D30之前ABSRTA組上調(diào)程度高于ABSRT組,D30時ABSRT組上調(diào)程度高于ABSRTA組;兩組Otx2、Rhodopsin均陽性表達,且表達水平均上調(diào),不同階段上調(diào)程度不同,ABSRTA組上調(diào)程度高于ABSRT組,不同小分子化合物組合誘導(dǎo)人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞分化的誘導(dǎo)效率不同,ABSRTA組誘導(dǎo)效率高于ABSRT組,ABSRTA組比ABSRT組誘導(dǎo)效率提高24.94%。結(jié)論:1.不同的小分子化合物ABSRT組、ABSRTA組均可定向誘導(dǎo)人胚胎干細胞分化為視網(wǎng)膜感光細胞。2.小分子化合物ABSRT組、ABSRTA組在誘導(dǎo)人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞分化過程中,隨定向誘導(dǎo)時間的延長,干細胞標記基因Ki67表達水平均逐漸下調(diào),視網(wǎng)膜感光細胞發(fā)育過程中的重要調(diào)控基因Sox2、Otx2均陽性表達,且表達上調(diào),不同階段上調(diào)程度不同,視網(wǎng)膜感光細胞特異性標記基因Rhodopsin均陽性表達,且表達上調(diào),不同階段上調(diào)程度不同,不同小分子化合物組合誘導(dǎo)人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞分化的誘導(dǎo)效率不同,ABSRTA組誘導(dǎo)效率高于ABSRT組,ABSRTA組比ABSRT組誘導(dǎo)效率提高24.94%。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of Ki - 67 , Sox2 , Otx2 and Rhodopsin in various stages of differentiation of human embryonic stem cells by using different small molecule combinations . The results showed that : 1 . The expression level of ABSRTA was higher than that of ABSRTA group , and the expression level was up - regulated . The expression level of ABSRTA group was higher than that of ABSTgroup . The induction efficiency of ABSRTA group was 24.94 % .
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R774.1

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;我科學(xué)家育出人胚胎干細胞[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年11期

2 耿嘉tD;;人胚胎干細胞核心轉(zhuǎn)錄調(diào)控途徑[J];國外醫(yī)學(xué)(計劃生育/生殖健康分冊);2006年04期

3 ;人胚胎干細胞轉(zhuǎn)化為肝細胞[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2008年08期

4 ;最大人胚胎干細胞遺傳變異研究結(jié)果發(fā)布[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2012年01期

5 石程;王承艷;沈浣;;人胚胎干細胞建系研究中的倫理管理[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2012年01期

6 謝蜀生;應(yīng)當重視人胚胎干細胞的研究[J];科技導(dǎo)報;2000年05期

7 胡顯文,陳昭烈,黃培堂;人胚胎干細胞的研究[J];生物技術(shù)通訊;2000年02期

8 徐令,黃紹良,李樹濃,吳旋;人胚胎成纖維細胞對人胚胎干細胞生長的作用[J];中國病理生理雜志;2001年01期

9 李濤,麥慶云,周燦權(quán),莊廣倫;人胚胎干細胞原代克隆生長及其傳代的研究[J];解剖學(xué)報;2003年06期

10 孫博文;人胚胎干細胞建系和鑒定[J];生命科學(xué);2003年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 韋東;;人胚胎干細胞相關(guān)發(fā)明可專利性研究[A];發(fā)展知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)業(yè)，，支撐創(chuàng)新型國家建設(shè)-2012年中華全國專利代理人協(xié)會年會第三屆知識產(chǎn)權(quán)論壇論文選編(第一部分)[C];2011年

2 吳應(yīng)積;FenhuaLuo;Aileen Lu;John W.McDanold;;間隙連接蛋白在人胚胎干細胞中的表達[A];第九次全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2003年

3 張麗瑞;李旭;陳葳;;人胚胎干細胞建系的方法學(xué)研究進展[A];全國首屆動物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

4 羅向東;;人胚胎干細胞的分離培養(yǎng)及應(yīng)用前景[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

5 趙海軍;趙惠萍;林戈;周藥;劉天成;盧光t;;不同造血微環(huán)境對誘導(dǎo)人胚胎干細胞向造血干細胞分化的影響[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

6 龔玉萍;Tamihiro Kamata;Andrew D.Leavitt;;體外人胚胎干細胞造血/血管內(nèi)皮系統(tǒng)發(fā)育的研究[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

7 魯振宇;張云山;王毅娜;羅海寧;杜ng瑞;;應(yīng)用人胚胎肺組織成纖維細胞飼養(yǎng)層培養(yǎng)人胚胎干細胞的研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

8 劉超;Su Guo;;人胚胎干細胞神經(jīng)外胚層分化研究[A];中國解剖學(xué)會2013年年會論文文摘匯編[C];2013年

9 陳彤;王征宇;DavidTScadden;陳彤;謝毅;;人胚胎干細胞向造血祖細胞誘導(dǎo)分化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 裴海云;王韞芳;楊印祥;習(xí)佳飛;裴雪濤;;誘導(dǎo)人胚胎干細胞分化為肝細胞樣細胞[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前6條

1 記者 白毅;全球最大規(guī)模人胚胎干細胞遺傳變異研究成果發(fā)布[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 記者 胡德榮;125株人胚胎干細胞株系將全球共享[N];健康報;2012年

3 記者 徐瑞哲;為“細胞治療”進入臨床鋪路[N];解放日報;2012年

4 本版編輯邋海飛魚 Emily;人胚胎干細胞生成紅細胞輸血不用愁[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2008年

5 鄭義;誘導(dǎo)分化開辟腫瘤治療新途徑[N];中國醫(yī)藥報;2008年

6 哈爾濱血液病腫瘤研究所教授 馬軍邋衣曉峰 整理;誘導(dǎo)分化 治療惡性腫瘤[N];健康報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 任翔;硫氧還蛋白對糖尿病視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞損傷的保護作用及相關(guān)機制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2017年

2 李瑩;DHDDS基因?qū)σ暰W(wǎng)膜感光細胞的作用和機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

3 許慧芳;人胚胎干細胞的優(yōu)化培養(yǎng)以及向神經(jīng)干細胞的分化研究[D];華中科技大學(xué);2009年

4 俞妍慧;組織因子在人胚胎干細胞誘導(dǎo)分化過程中表達及調(diào)控的研究[D];中南大學(xué);2013年

5 周兟;維持人胚胎干細胞不分化的鼠飼養(yǎng)層細胞標準化操作的建立與殘留的絲裂霉素C對人胚胎干細胞基因組穩(wěn)定性影響的研究[D];中南大學(xué);2009年

6 許薇薇;人成體干細胞誘導(dǎo)分化成視網(wǎng)膜感光細胞樣細胞的實驗研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

7 秦麗敏;小分子化合物誘導(dǎo)人胚胎干細胞分化為角膜上皮樣細胞的研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2017年

8 焦淑潔;血管內(nèi)皮生長因子在人胚胎干細胞神經(jīng)分化過程中的作用及相關(guān)機制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

9 尹明;基于基因打靶技術(shù)的人胚胎干細胞向功能性肝細胞分化的研究[D];吉林大學(xué);2014年

10 解正高;促紅細胞生成素對脫離視網(wǎng)膜感光細胞的保護作用及機制[D];上海交通大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳紅;人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜感光細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2017年

2 韋東;人胚胎干細胞相關(guān)發(fā)明可專利性研究[D];華東政法大學(xué);2011年

3 王丹;三氯乙烯抑制人胚胎干細胞向心肌分化的機制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

4 吳一湘;酪氨酸促進人胚胎干細胞向視網(wǎng)膜色素上皮高效分化的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

5 馬永賓;人胚胎干細胞源間充質(zhì)干細胞分泌的微囊泡對大鼠坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)研究[D];江蘇大學(xué);2016年

6 李奇;人胚胎干細胞凍存體系的優(yōu)化及其向視網(wǎng)膜上皮細胞的分化研究[D];吉林大學(xué);2016年

7 鄭良棟;人胚胎干細胞抗腫瘤作用的體外初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

8 呂林潔;人胚胎干細胞分化為可自我更新的神經(jīng)干細胞[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

9 曾玉曉;二維和三維誘導(dǎo)的人胚胎干細胞來源RPE細胞的生物學(xué)特性比較研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

10 童珊珊;APJ基因在人胚胎干細胞定向心肌細胞分化過程中表達特征的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號：2135602