本文選題：小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞 + 納洛酮��； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：[目的]本研究旨在證明,納洛酮(naloxone)在體外可以抑制細(xì)菌內(nèi)毒素脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,并減少后者分泌的腫瘤壞死因子(TNF-a)和白介素1β (IL-1β)。并且進(jìn)一步闡述,上述作用是通過抑制p38MAPK這一通路實(shí)現(xiàn)的。 [方法]將SD大鼠的視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞分離純化培養(yǎng)。用不同濃度的LPS處理,建立小膠質(zhì)細(xì)胞體外激活模型。不同濃度的naloxone (0.5μM,1.0μM和2.0μM)在LPS激活視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞前,預(yù)處理30分鐘。利用ELISA檢測(cè)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-a和IL-1p的分泌量。利用westernblot方法,檢測(cè)細(xì)胞中MAPK通路家族中三個(gè)亞家族p38MAPK, ERK, JNK,以及他們活化的形式磷酸化p38MAPK (P-p38),磷酸化ERK (P-ERK),磷酸化JNK (P-JNK)這六種物質(zhì)的含量。通過免疫熒光的方法,標(biāo)記OX42(小膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記物)和P-p38。利用p38MAPK特異性的抑制劑,SB203580(不作用于ERK, JNK.通常被用來排除p38MAPK的作用)預(yù)處理視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞12小時(shí),之后再進(jìn)行上述naloxone預(yù)處理,LPS激活這些步驟。利用ELISA再次檢測(cè)上清液中TNF-α和IL-1p的分泌量,來反向驗(yàn)證我們的推論。 [結(jié)果]實(shí)驗(yàn)證明naloxone可以減少LPS誘導(dǎo)的TNF-α和IL-1β釋放,并呈濃度-效應(yīng)關(guān)系。Naloxone可以有效的減少p38MAPK的磷酸化,而對(duì)于ERK, JNK的磷酸化并無作用。對(duì)于SB203580處理后的小膠質(zhì)細(xì)胞,naloxone的預(yù)處理則不能改變LPS誘導(dǎo)的TNF-α和IL-1β釋放增加。 [結(jié)論]Naloxone可以抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活和釋放炎性因子,這一現(xiàn)象可能是通過對(duì)p38MAPK通路實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:[objective] to demonstrate that naloxone (naloxone) can inhibit lipopolysaccharide (LPS) -induced activation of retinal microglia and decrease tumor necrosis factor (TNF-a) and interleukin-1 尾 (IL-1 尾) secreted by naloxone (naloxone) in vitro. Furthermore, the above action is achieved by inhibiting the p38 MAPK pathway. Methods the retinal microglia of SD rats were isolated and cultured. In vitro activation model of microglia was established by different concentration of LPS. Different concentrations of naloxone (0.5 渭 M 1.0 渭 M and 2.0 渭 M) were pretreated with LPS-activated retinal microglia for 30 minutes. The secretion of TNF-a and IL-1p in the supernatant of glial cell culture was detected by Elisa. The contents of three subfamilies p38 MAPK, ERK, JNKand their activated forms of phosphorylated p38 MAPK (P-p38), phosphorylated ERK (P-ERK) and phosphorylated JNK (P-JNK) were detected by westernblot method. OX42 (microglia specific marker) and P-p38 were labeled by immunofluorescence. The specific inhibitor of p38 MAPK was SB203580 (not acting on ERK, JNK). It is usually used to exclude the effects of p38 MAPK) pretreatment of retinal microglia for 12 hours, and then naloxone preconditioning is performed to activate these steps. Elisa was used to detect the secretion of TNF- 偽 and IL-1p in the supernatant to reverse verify our inference. [results] the results showed that naloxone could reduce the release of TNF- 偽 and IL-1 尾 induced by LPS-in a dose-dependent manner. Naloxone could effectively reduce the phosphorylation of p38 MAPK, but had no effect on the phosphorylation of p38 MAPK. Pretreatment of naloxone in microglia treated with SB203580 could not change the increase of LPS-induced TNF- 偽 and IL-1 尾 release. [conclusion] Naloxone can inhibit the activation and release of inflammatory factors by microglia, which may be mediated by p38 MAPK pathway.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：2110850