本文選題：Pellet三維培養(yǎng)模型 + 角膜基質細胞��； 參考：《眼科》2017年05期

【摘要】：目的研究血清在構建角膜基質細胞體外三維培養(yǎng)模型中對細胞生長情況及膠原纖維生成的影響,為體外研究角膜基質細胞外基質(ECM)纖維化提供新的培養(yǎng)模型。設計實驗研究。研究對象牛角膜基質細胞。方法分離原代牛角膜基質細胞,取第一代細胞作為種子細胞構建Pellet模型,實驗分為對照組(DMEM/F12)和血清組(DMEM/F12+10%胎牛血清FBS)。Pellet模型培養(yǎng)3周后,肉眼觀察細胞生長狀態(tài),同時進行HE染色及Calcein AM/PI染色測定細胞活性,并應用MASSON染色及透射電子顯微鏡(TEM)觀察膠原纖維的形成、走向及排列情況。主要指標細胞生長狀態(tài)、細胞活性、膠原纖維走向及排列情況。結果Pellet模型培養(yǎng)3周后,對照組未觀察到角膜基質細胞抱團生長現(xiàn)象,且細胞易松散,難以進行后續(xù)實驗;血清組Pellet模型中細胞明顯成簇生長,呈粒狀,結合牢固。Calcein AM/PI染色及HE染色可見血清組大多數(shù)細胞存活且密集生長,細胞結構完整。MASSON染色示血清組較多膠原纖維顯色,并于TEM下觀察到膠原纖維密集分布于細胞外且走向紊亂。結論含血清的培養(yǎng)環(huán)境能成功構建牛角膜基質細胞體外Pellet三維培養(yǎng)模型,且能生成含有膠原纖維的ECM。
[Abstract]:Objective to study the effect of serum on the growth of corneal stromal cells in vitro and the formation of collagen fibers in order to provide a new culture model for the study of corneal stromal cell (ECM) fibrosis in vitro. Design experimental research. Participants Bovine corneal stromal cells were studied. Methods the primary bovine corneal stromal cells were isolated and used as seed cells to construct pellet model. The cells were divided into two groups: control group (DMEM- F12) and serum group (DMEM- F12% fetal bovine serum FBS). Pellet model was cultured for 3 weeks. At the same time, HE staining and Calcein AM / Pi staining were used to determine the cell activity. The formation, orientation and arrangement of collagen fibers were observed by Masson staining and transmission electron microscopy (TEM). Main outcome measures: state of cell growth, cell activity, direction and arrangement of collagen fibers. Results after the pellet model was cultured for 3 weeks, the corneal stromal cells were not observed in the control group, and the cells were easy to loose and difficult to carry out subsequent experiments, while in the serum group pellet model, the cells grew in clusters and were granular. Combined with firm. Calcein AM / Pi staining and HE staining, most of the cells in the serum group survived and grew intensively. The cell structure integrity. MASson staining showed that there were more collagen fibers in the serum group, and it was observed that the collagen fibers distributed intensively outside the cells and in the direction of disorder under TEM. Conclusion the three dimensional pellet culture model of bovine corneal stromal cells can be successfully constructed in the culture environment containing serum, and ECM containing collagen fibers can be produced.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院眼科;廣西醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學基金(81360144、81060076) 教育部留學回國人員科研啟動基金(2010-1561)
【分類號】：R77

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本文編號：2063965