本文選題：色素上皮細(xì)胞衍生因子 + 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:運(yùn)用透射電鏡、HE染色、免疫組織化學(xué)方法,觀測大鼠視神經(jīng)不全損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)軸突線粒體的變化,并對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),檢測視網(wǎng)膜內(nèi)Bcl-2和Bax蛋白陽性的表達(dá)。初步探討色素上皮細(xì)胞衍生因子(PEDF)對大鼠視神經(jīng)不全損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞是否具有保護(hù)及其作用的機(jī)理,進(jìn)而為臨床治療急性視神經(jīng)損傷提供理論依據(jù)和新思路。方法:1實(shí)驗(yàn)動物模型制備及分組選取健康雌性SD大鼠90只隨機(jī)分為:空白組、模型組和實(shí)驗(yàn)組,每組各30只。組間大鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行期間各組大鼠常規(guī)飼料喂養(yǎng)。模型組和實(shí)驗(yàn)組在禁食12小時(shí)后腹腔注射10%水合氯醛麻醉,用反向鑷鉗夾視神經(jīng)造成視神經(jīng)不全損傷。操作方法是在球后2mm處用夾持力為98g的血管鉗,尖寬1mm,尖端完全夾閉,鉗夾住左眼視神經(jīng)。右眼為自身對照眼,右眼不予處理。待大鼠瞳孔散大后觀察眼底,一般用直接檢眼鏡,視網(wǎng)膜未看到明顯動脈血管白線化改變及出血者納入實(shí)驗(yàn)。2色素上皮細(xì)胞衍生因子干預(yù)模型組制作視神經(jīng)損傷模型成功后即刻向玻璃體腔注射平衡鹽溶液5μl,之后的1周及2周分別向玻璃體腔注射平衡鹽溶液5μl,而實(shí)驗(yàn)組在視神經(jīng)損傷模型制作成功后即刻向玻璃體腔注射色素上皮細(xì)胞衍生因子5μl(濃度0.2μg/μl),同樣在1周及2周時(shí)分別向玻璃體腔注射色素上皮細(xì)胞衍生因子5μl。3切片制備3組大鼠均在第3周時(shí)分別取20只大鼠左側(cè)眼球,制備5μm視網(wǎng)膜切片。每張組織標(biāo)本切片取4個(gè)光學(xué)顯微鏡下的視野,以視盤為中心,以1.5mm為半徑形成的圓形范圍內(nèi),四個(gè)方向?qū)ΨQ各取1個(gè)視野,每個(gè)眼球只抽取和使用1張切片。4he染色觀察通過he染色,光鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化并且對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。5免疫組化染色觀察通過免疫組織化學(xué)半定量的方法對bcl-2和bax的表達(dá)進(jìn)行檢測。6透視電鏡技術(shù)觀察同時(shí)在空白組、模型組和實(shí)驗(yàn)組分別取10只大鼠左眼眼球制作標(biāo)本,將其制成厚約50nm超薄切片,染色后透射電鏡下觀察視網(wǎng)膜組織超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果:1透視電鏡觀察結(jié)果顯示在透視電鏡下觀察空白組神經(jīng)髓鞘完整,軸漿均勻,軸漿內(nèi)可見比較清晰的線粒體和微管、微絲。透射電鏡觀察模型組與實(shí)驗(yàn)組同空白組相比均存在線粒體水腫、數(shù)量減少、胞質(zhì)濃縮軸突腫脹。同模型組相比實(shí)驗(yàn)組胞質(zhì)濃縮軸突腫脹輕,線粒體數(shù)量較模型對照組多,且結(jié)構(gòu)較完整。2he染色結(jié)果顯示he染色觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù),pedf實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)(14.25±1.65)和模型組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)(7.98±1.69)都明顯低于空白組的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)(29.62±2.24),視網(wǎng)膜組織中殘存的rgcs有水腫改變,實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞從細(xì)胞形態(tài)上要好于模型組,且視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量較模型組多。模型組和實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)較空白組分別下降73.3%、53.3%,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3免疫組化染色結(jié)果顯示免疫組織化學(xué)半定量的方法對bcl-2的表達(dá)進(jìn)行檢測�？瞻捉M視網(wǎng)膜內(nèi)bcl-2可見一定表達(dá),模型組、實(shí)驗(yàn)組bcl-2光密度值較空白組均有上升,其中實(shí)驗(yàn)組光密度值的上升更明顯。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組(0.1975±0.0105)的平均光密度值明顯高于空白組(0.1070±0.0121),具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),同時(shí)實(shí)驗(yàn)組(0.1975±0.0105)的平均光密度值也高于模型組(0.1526±0.0045),具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。免疫組織化學(xué)半定量的方法對bax的表達(dá)進(jìn)行檢測,空白組視網(wǎng)膜內(nèi)bax可見一定表達(dá),模型組、實(shí)驗(yàn)組bax光密度值較空白組均有上升,其中實(shí)驗(yàn)組光密度值上升的幅度低于模型組。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組(0.1355±0.0030)的平均光密度值高于空白組(0.0950±0.0090),具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),同時(shí)實(shí)驗(yàn)組(0.1355±0.0030)的平均光密度值低于模型組(0.1496±0.0076),具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1通過反向鑷鉗夾大鼠視神經(jīng)造成大鼠視神經(jīng)不全損傷病變是比較理想的模型,損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞出現(xiàn)水腫、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞空泡樣變性、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目減少。2視神經(jīng)不全損傷可引起視神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的明顯損害,色素上皮細(xì)胞衍生因子可以減輕視神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的損害。3色素上皮細(xì)胞衍生因子可通過上調(diào)視網(wǎng)膜Bcl-2蛋白的表達(dá)、減弱Bax蛋白表達(dá),來減弱或抑制視神經(jīng)損傷后RGCs的損傷,而起到對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective : To observe the changes of retinal ganglion cells ( RGCs ) in rats with optic nerve injury induced by light microscopy , HE staining and immunohistochemical method , and to observe the expression of Bcl - 2 and Bax protein in rats . The results showed that the average optical density of the experimental group ( 0.1355 鹵 0.0030 ) was higher than that in the blank group ( P 0.01 ) . The results showed that the average optical density of the experimental group ( 0.1355 鹵 0.0030 ) was higher than that in the blank group ( P 0.01 ) .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R774

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2030219