本文選題：軟骨組織工程 + 軟骨源性形態(tài)發(fā)生蛋白��； 參考：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文

【摘要】：目的 探討CDMP1基因轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymalstem,BMSCs）負(fù)載于聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA）上修復(fù)喉軟骨缺損的能力，初步評估其修復(fù)效果，為耳鼻咽喉頭頸外科及臨床相關(guān)科室遇到的軟骨缺損修復(fù)和功能重建提供新的途徑和方法。 方法 無菌條件下，取1月齡新西蘭兔的股骨骨髓,采用全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法相結(jié)合的優(yōu)化方案分離、純化BMSCs，并體外傳代培養(yǎng)。取第3代的BMSCs分為以下3組,A組（轉(zhuǎn)染組）：感染Ad-CMV-hCDMP1-IRES-eGFP；B組（未轉(zhuǎn)染組）：感染Ad-CMV-eGFP；C組（對照組）：未感染病毒。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）和免疫印跡法(western blot)檢測hCDMP1mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，，并檢測細(xì)胞增殖能力(Thiazolyblue, MTT法)、Ⅱ型膠原蛋白(Collagen Ⅱ,ColⅡ)以及糖胺聚糖(Glycosaminogl-ycans,GAG)的表達(dá)。全麻下制作甲狀軟骨缺損模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為3組，Ⅰ組:植入A組細(xì)胞/支架復(fù)合物，Ⅱ組:植入C組細(xì)胞/支架復(fù)合物，Ⅲ組:植入單純支架，每組8只。分別于術(shù)后4周和8周無痛處死動(dòng)物，進(jìn)行大體觀察及組織學(xué)檢測。 結(jié)果 傳代培養(yǎng)的BMSCs具有活躍的增殖能力，腺病毒攜帶hCDMP1基因轉(zhuǎn)染BMSCs未引起B(yǎng)MSCs的過度增殖或抑制；與B、C組比較,A組的Ⅱ型膠原蛋白和糖胺聚糖表達(dá)水平均顯著提高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)Ⅰ組的軟骨缺損處有軟骨細(xì)胞生長，缺損處表面光滑，可見新生細(xì)胞分泌軟骨細(xì)胞基質(zhì)糖胺聚糖和Ⅱ型膠原蛋白增加，而Ⅱ組和Ⅲ組的軟骨缺損處只有纖維組織修復(fù)，表面凹陷粗糙。 結(jié)論 1.全骨髓培養(yǎng)法和密度梯度離心法二者結(jié)合的優(yōu)化方案是一種簡單實(shí)用的分離培養(yǎng)BMSCs的方法，可獲得純度較高的兔BMSCs。 2.以腺病毒為載體基因轉(zhuǎn)染的方法能將外源hCDMP1基因成功轉(zhuǎn)入BMSCs，并使hCDMP1基因獲得穩(wěn)定表達(dá)。 3.轉(zhuǎn)染hCDMP1基因的BMSCs分泌Ⅱ型膠原蛋白、糖胺聚糖等軟骨特異性基質(zhì)的能力增強(qiáng)，有促進(jìn)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的能力。 4.轉(zhuǎn)染hCDMP1基因的BMSCs與PLGA三維生物支架復(fù)合可成功修復(fù)喉軟骨缺損。
[Abstract]:Objective to investigate the ability of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transfected with CDMP1 gene to repair laryngeal cartilage defects on poly (lactic acid-glycolic acid) copolymers (Poly (lactic actic-co-glycolic acidacidacidacidacidacidae), and to evaluate the repair effect of CDMP1 gene transfected bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). To provide a new approach and method for repair and functional reconstruction of cartilage defects in otolaryngopharyngeal head and neck surgery and clinical departments. Methods the femur bone marrow of New Zealand rabbits of one month old was isolated under aseptic condition. The whole bone marrow culture method and density gradient centrifugation were used to purify BMSCs and cultured in vitro. The third passage BMSCs were divided into the following three groups: group A (transfection group: infected with Ad-CMV-hCDMP1-IRES-eGFPB group) (untransfected group: infected with Ad-CMV-eGFPC group (control group: uninfected virus). Reverse transcription-Polymerase chain reaction (reverse Transcription-Polymerase chain reaction RT-PCRR) and Western blot (Western blot) were used to detect the expression of hCDMP1 mRNA and protein, and the expression of Thiazolyy, MTT, Collagen 鈪

本文編號(hào)：2023988