本文選題：耳聾 + 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞(iPSCs)��； 參考：《中華耳科學(xué)雜志》2017年04期

【摘要】：目的利用誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞定向分化的內(nèi)耳毛細(xì)胞和支持細(xì)胞探究這兩種體外誘導(dǎo)分化細(xì)胞之間的相互作用。方法首先,利用細(xì)胞單層貼壁兩步誘導(dǎo)法將三株i PS細(xì)胞(野生株、MYO7A缺陷株、MYO7A校正株)向內(nèi)耳祖細(xì)胞及內(nèi)耳毛細(xì)胞誘導(dǎo)分化,探究i PSCs定向分化內(nèi)耳毛細(xì)胞的過(guò)程中是否有支持細(xì)胞的產(chǎn)生;其次,通過(guò)細(xì)胞免疫化學(xué)的方法探究體外分化的內(nèi)耳毛細(xì)胞和支持細(xì)胞間的相互作用;最后,將表達(dá)綠色熒光蛋白(EGFP)的上皮樣內(nèi)耳祖細(xì)胞以圓窗膜穿刺的方法移植到白化榮昌豬的內(nèi)耳中觀察分析移植細(xì)胞在體內(nèi)的遷移、分化以及在體內(nèi)形成的聯(lián)系。結(jié)果三株i PS細(xì)胞誘導(dǎo)分化為內(nèi)耳毛細(xì)胞的過(guò)程中均有一部分細(xì)胞分化為支持細(xì)胞;對(duì)分化細(xì)胞進(jìn)行E-cadherin、N-cadherin和ZO-1的免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,E-cadherin、N-cadherin和ZO-1在支持細(xì)胞-支持細(xì)胞連接和支持細(xì)胞-毛細(xì)胞連接間都有表達(dá);移植4周后,耳蝸免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,三株不同來(lái)源的移植細(xì)胞均有少量細(xì)胞成功遷移到了毛細(xì)胞受損部位—柯底氏器,并表達(dá)毛細(xì)胞標(biāo)志性蛋白MYO7A。移植細(xì)胞之間以及移植細(xì)胞與宿主細(xì)胞之間有E-cadherin、N-cadherin和ZO-1的表達(dá)。結(jié)論 i PSCs誘導(dǎo)分化的內(nèi)耳毛細(xì)胞和支持細(xì)胞在體內(nèi)、外均能形成鈣粘連接和緊密連接。這些研究結(jié)果對(duì)毛細(xì)胞取代法治療耳聾策略的完善與發(fā)展有一定的科學(xué)意義。
[Abstract]:Aim to explore the interaction between differentiated inner ear hair cells and Sertoli cells induced by pluripotent stem cells in vitro. Methods first, three iPS cells (wild strain MYO7A defective strain) were induced to differentiate into inner ear progenitor cells and inner ear hair cells by two steps of cell monolayer adherence. To explore whether there are Sertoli cells in the process of I PSCs directional differentiation of inner ear hair cells. Secondly, to explore the interaction between differentiated inner ear hair cells and Sertoli cells by means of cellular immunocytochemistry. The epithelioid inner ear progenitor cells expressing green fluorescent protein (EGFP) were transplanted into the inner ear of Rongchang albino pig by circular window membrane puncture. The migration, differentiation and association of the transplanted cells in vivo were observed and analyzed. Results some of the three iPS cells differentiated into Sertoli cells during the process of differentiation into inner ear hair cells. Immunofluorescence analysis of E-cadherin and ZO-1 showed that E-cadherin and ZO-1 expressed between Sertoli cell junctions and Sertoli cells junctions. A few of the three transplanted cells from different sources migrated successfully to the damaged part of the hair cell, the Cordy organ, and expressed the marker protein MYO7A of the hair cell. E-cadherin N-cadherin and ZO-1 were expressed between transplanted cells and host cells. Conclusion I PSCs induced differentiation of hair cells and Sertoli cells in vivo and in vitro can form cadherin connection and tight junction. These results are of scientific significance for the improvement and development of the strategy of hair cell replacement for deafness.
【作者單位】： 浙江大學(xué)紫金港校區(qū)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞與發(fā)育研究所;解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科解放軍耳鼻喉研究所;
【基金】：國(guó)家重大基礎(chǔ)研究(973)項(xiàng)目,編號(hào):2014CB541705~~
【分類號(hào)】：R764.43

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本文編號(hào)：1999760