本文選題：睡眠呼吸暫停 + 間歇低氧��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的 阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(Obstructive sleep apnea syndrome, OSAS)是以睡眠狀態(tài)下反復(fù)出現(xiàn)的呼吸暫停和血氧飽和度下降為特征,即慢性間歇低氧(Chronic intermittent hypoxia, CIH), CIH是OSAS造成機體損害的主要病理生理學(xué)基礎(chǔ)。OSAS是一種氧化應(yīng)激性疾病,同時也是一種炎癥性疾病。目前研究認為,OSAS模式的CIH會導(dǎo)致肝臟細胞呈現(xiàn)氧化應(yīng)激狀態(tài)進而激活NF-κB及其介導(dǎo)的炎性通路引起一系列炎癥介質(zhì)的變化,最終導(dǎo)致肝臟損害,引起非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD),甚至非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis, NASH)。為此,本研究模擬OSAS建立CIH大鼠模型,觀察不同頻率CIH下大鼠肝臟損傷情況和可能機制及抗氧化劑Tempol的干預(yù)作用,以便為臨床上預(yù)防和治療OSAS器官合并癥提供探索和理論依據(jù)。 內(nèi)容 1.不同頻率間歇低氧下大鼠肝臟氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的研究 2.抗氧化劑Tempol對CIH下大鼠肝臟損傷的干預(yù)作用 方法 通過向計算機控制的低氧艙中,循環(huán)充入不同時間的純氮氣和正常氧濃度的壓縮空氣,分別造成不同頻率的間歇低氧(10次/h、20次/h、30次/h、40次/h)及持續(xù)常氧環(huán)境。將72只雄性成年Wistar大鼠隨機分為間歇低氧組(IH1、IH2、IH3、IH4,頻率依次為10、20、30、40次/h)；Tempol干預(yù)組：30T1組(30次/h間歇低氧暴露開始第1天即給予Tempol干預(yù),Tempol劑量為：100mg×kg-1×d+生理鹽水稀釋后腹腔注射,稀釋比例為Tempol:生理鹽水=1：10,即1ml10%Tempol/Kg體重),30T2組(30次/h間歇低氧暴露第29天開始給予Tempol干預(yù),Tempol劑量同30T1組),生理鹽水對照組：30N1組(30次/h間歇低氧暴露開始第1天即給予等體積生理鹽水做對照,即1ml0.9%NS/Kg體重),30N2組(30次/h間歇低氧暴露第29天開始給予等體積生理鹽水做對照),以及常氧對照組(NC組),共9組,每組8只大鼠,間歇低氧暴露環(huán)境最低氧濃度均為5%,常氧對照組始終維持21%的氧濃度。Tempol和生理鹽水均于大鼠每天進入低氧艙前半小時腹腔注射,每天1次。暴露6周結(jié)束后,各組大鼠均麻醉后股動脈放血處死取出肝臟。肝臟石蠟切片HE染色觀察肝細胞形態(tài)變化,化學(xué)法測定肝臟勻漿中SOD、T-AOC的活性,ELISA法測定MDA、GSH-PX、NF-κB、 ICAM-1的水平。 結(jié)果 第一部分 1.肝臟組織病理：NC組未見明顯肝臟損害,不同頻率IH組均有部分肝組織細胞胞漿稀疏,核深染,隨著低氧頻率的升高肝臟出現(xiàn)細胞水腫,甚至少量炎性細胞浸潤。表明慢性間歇低氧可以導(dǎo)致大鼠肝臟損害的發(fā)生 2.不同頻率間歇低氧組和常氧對照組大鼠肝臟MDA、SOD、GSH-PX、T-AOC水平比較：不同頻率IH組MDA水平均高于NC組(P均0.05),SOD、 GSH-PX、T-AOC活性均低于NC組(P均0.05)；除IH3組與IH4組比較以上指標均無顯著差異外(P分別為0.552,0.700,0.737,0.947),其余IH組兩兩比較以上指標差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),且隨著低氧頻率的升高,MDA水平逐漸升高,SOD、GSH-PX、T-AOC活性逐漸下降。 3.不同頻率間歇低氧組和常氧對照組大鼠肝臟NF-κB、ICAM-1水平比較：除IH1組與NC組比較NF-κB、ICAM-1水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義外(P分別為0.143,0.633),其余IH組NF-κB、ICAM-1水平均高于NC組(P均0.05)；除IH3組與IH4組比較NF-κB水平及IH1組和IH2組、IH3組和IH4組比較ICAM-1水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義外(P分別為0.103,0.06,0.524),其余IH組兩兩比較NF-κB ICAM-1水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),且隨著低氧頻率的升高,NF-κB、ICAM-1水平也逐漸升高。 4.雙變量相關(guān)分析法顯示：MDA與SOD、GSH-PX、T-AOC均呈負相關(guān)關(guān)系(r分別為-0.721,-0.713,-0.653,P均為0.000),NF-κB與MDA、GSH-PX分別呈正相關(guān)(r=0.789,P=0.000)、負相關(guān)(r=-0.766,P=0.000)關(guān)系,NF-κB與ICAM-1呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.667,P=0.000)。 第二部分 1.肝臟組織病理：30T1組、NC組未見明顯肝臟損害,30T2組可見輕微肝細胞胞膜破壞,胞漿稀疏,IH3組、30N1組、30N2組可見肝細胞胞膜破壞,細胞水腫,胞漿稀疏,核深染。表明Tempol可以預(yù)防慢性間歇低氧下大鼠肝臟損傷的發(fā)生,且干預(yù)越早,作用越明顯。 2. Tempol干預(yù)組、生理鹽水對照組和常氧對照組大鼠肝臟MDA、SOD、GSH-PX、T-AOC水平比較：30T1組、30T2組較IH3組、30N1組、30N2組MDA水平均下降(P均0.05),SOD、GSH-PX、T-AOC活性均升高(P均0.05)；且30T1組與NC組比較以上指標均無顯著差異(P分別為0.209,0.117,0.222,0.413)；但30T1組和30T2組比較以及30T2組和NC組比較以上指標差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)；IH3組、30N1組、30N2組兩兩比較以上指標差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。 3. Tempol干預(yù)組、生理鹽水對照組和常氧對照組大鼠肝臟NF-κB、ICAM-1水平比較：30T1組、30T2組較IH3組、30N1組、30N2組NF-κB、ICAM-1水平均下降(P均0.05)；30T1組、30T2組、NC組兩兩比較NF-κB、ICAM-1水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05),IH3組、30N1組、30N2組兩兩比較上述指標差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。 結(jié)論 1.不同頻率CIH通過氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)共同造成大鼠肝臟損害,且隨著間歇低氧頻率的增加肝臟損傷也逐漸加重,但并不是頻率越高,肝臟損傷越重,即肝臟損傷程度與CIH頻率并不完全呈線性關(guān)系。 2.CIH過程中產(chǎn)生的ROS的蓄積進而引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)可能作為始動因素進而激活氧化還原敏感轉(zhuǎn)錄因子NF-κB及其介導(dǎo)的炎癥通路,影響炎癥介質(zhì)的釋放,二者共同造成CIH下大鼠肝臟損傷的發(fā)生 3.抗氧化劑Tempol可以干預(yù)CIH所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生,進而抑制NF-κB的激活,預(yù)防和緩解CIH肝損害,但尚不能完全逆轉(zhuǎn)既存的肝損害。
[Abstract]:Research background and purpose
Obstructive sleep apnea syndrome (OSAS) is characterized by recurrent apnea and decreased oxygen saturation in the state of sleep, namely, chronic intermittent hypoxia (Chronic intermittent hypoxia, CIH), CIH is the main pathophysiological basis for OSAS to cause damage to the body, and.OSAS is a kind of oxidative stress. OSAS model CIH can cause oxidative stress in liver cells and activate NF- kappa B and its mediated inflammatory pathway to cause a series of inflammatory mediators, resulting in liver damage and non alcoholic fatty liver disease (Nonalcoholic fatty liver diseas). E, NAFLD), even nonalcoholic steatohepatitis (Nonalcoholic steatohepatitis, NASH). To this end, this study simulated OSAS to establish a CIH rat model to observe the liver damage and possible mechanism under the different frequencies of CIH and the possible mechanism of the antioxidant Tempol, so as to provide exploration and treatment for the clinical prevention and treatment of OSAS organ complication. On the basis.
content
1. oxidative stress and inflammatory response in rats liver under intermittent hypoxia with different frequencies
2. intervention effect of antioxidant Tempol on liver injury induced by CIH in rats
Method
In a computer controlled hypoxic chamber, the cycle was filled with compressed air of pure nitrogen and normal oxygen concentration at different times, resulting in intermittent hypoxia at different frequencies (10 /h, 20 times /h, 30 /h, 40 /h) and continuous constant oxygen environment. 72 male adult Wistar rats were divided into intermittent hypoxia group (IH1, IH2, IH3, IH4, and the frequency was 10,2). 0,30,40 /h); Tempol intervention group: 30T1 group (30 times /h intermittent hypoxia exposure began to give Tempol intervention, Tempol dose was: 100mg * kg-1 x d+ saline diluted peritoneal injection, dilution ratio was Tempol: physiological saline =1:10, namely weight). Pre, Tempol dose and 30T1 group), saline control group: group 30N1 (first days of 30 /h intermittent hypoxia exposure, i. e. 1ml0.9%NS/Kg weight), 30N2 group (30 times of /h intermittent hypoxia exposure to equal volume of normal saline as control), and normal oxygen control group (NC group), a total of 9 groups, 8 rats in each group. The lowest oxygen concentration in the intermittent hypoxic environment was 5%, and the oxygen concentration of 21% in the normal oxygen control group was always maintained at.Tempol and the normal saline was intraperitoneally injected into the abdominal cavity for 1 times a day before the hypoxic capsule was entered. After 6 weeks of exposure, the rats in each group were killed and removed from the liver after the anaesthesia. The liver paraffin section HE staining was used to observe the liver fine. Cell morphology changes, the activity of SOD and T-AOC in liver homogenate were measured by chemical method, and the levels of MDA, GSH-PX, NF- B and ICAM-1 were measured by ELISA.
Result
Part one
1. liver histopathology: no obvious liver damage was found in group NC. There were some liver tissue cells with sparse cytoplasm and deep staining in IH groups at different frequencies. The liver edema and even a small amount of inflammatory cell infiltration were found in the liver with the increase of hypoxia frequency.
2. the levels of MDA, SOD, GSH-PX and T-AOC in the liver of rats with different frequencies of intermittent hypoxia group and normal oxygen control group were compared: MDA level in IH group at different frequencies was higher than that in group NC (P 0.05), SOD, GSH-PX, T-AOC activity were lower than that of NC group (0.05). 22 compared with the above indicators, the differences were statistically significant (P = 0.05), and with the increase of hypoxia frequency, MDA levels gradually increased, while SOD, GSH-PX and T-AOC activities gradually decreased.
3. the levels of NF- kappa B and ICAM-1 in the liver of rats with different frequencies of intermittent hypoxia group and normoxic control group were compared: there was no significant difference in ICAM-1 level between IH1 and NC groups (P respectively 0.143,0.633), and the level of NF- kappa of the rest IH group was higher than that of the group (all 0.05). Compared with group IH4, the difference of ICAM-1 level was not statistically significant (P was 0.103,0.06,0.524, respectively), and the difference of NF- kappa B ICAM-1 level in the other IH group 22 was statistically significant (P 0.05), and as the frequency of hypoxia increased, NF- kappa B, ICAM-1 level also increased gradually.
4. the bivariate correlation analysis showed that MDA had a negative correlation with SOD, GSH-PX and T-AOC (r was -0.721, -0.713, -0.653, P 0 respectively), and NF- kappa B was positively correlated with MDA.
The second part
1. liver histopathology: group 30T1, group NC had no obvious liver damage, group 30T2 showed slight hepatocyte membrane damage, cytoplasm sparsely, IH3, 30N1, 30N2 group, cell membrane destruction, cell edema, cytoplasm sparsity, deep nucleus staining, indicating that Tempol can prevent the occurrence of liver injury in rats with chronic intermittent hypoxia, and the earlier the intervention, the more effective the intervention, the more effective the action, the more effective. Obviously.
In 2. Tempol intervention group, the liver MDA, SOD, GSH-PX, T-AOC levels were compared in the normal saline control group and the normal oxygen control group: 30T1 group, 30T2 group was lower than IH3 group, 30N1 group, 30N2 group MDA level (P are 0.05). 2,0.413), but compared with group 30T1 and group 30T2, and compared with group 30T2 and NC group, there were significant differences (P 0.05), and there was no significant difference in the above indexes in IH3 group, 30N1 group and 30N2 group 22 (P 0.05).
3. Tempol intervention group, normal saline control group and normal oxygen control group rats liver NF- kappa B, ICAM-1 level compared: 30T1 group, 30T2 group IH3 group, 30N1 group, 30N2 group NF- kappa B, ICAM-1 levels were all decreased (0.05), 22 groups, 22 groups, differences were statistically significant (0.05), group, group, 22 group There was no significant difference between the above indexes (P 0.05).
conclusion
1. the liver damage in rats was caused by oxidative stress and inflammatory response at different frequencies of CIH, and the liver damage increased with the increase of intermittent hypoxia frequency, but the higher the frequency, the heavier the liver injury, that is, the degree of liver injury was not completely linear with the frequency of CIH.
The oxidative stress induced by the accumulation of ROS in the 2.CIH process may act as a starting factor to activate the redox sensitive transcription factor NF- kappa B and its mediated inflammatory pathway, which affects the release of the inflammatory mediators, and the two causes the liver injury in the rat under CIH.
3. antioxidant Tempol can interfere with the occurrence of oxidative stress caused by CIH, inhibit the activation of NF- kappa B and prevent and alleviate the liver damage of CIH, but it can not completely reverse the existing liver damage.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R766

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本文編號：1965313