發(fā)布時間：2018-05-17 02:38

  本文選題：EB病毒 + 潛伏膜蛋白1�。� 參考：《中南大學(xué)》2012年博士論文

【摘要】：[背景] EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)是具有高度轉(zhuǎn)化能力的病毒,并與多種惡性腫瘤如伯基特淋巴瘤(BL)和鼻咽癌(NPC)密切相關(guān)。但是,EBV在NPC發(fā)展中的作用尚未闡明。MicroRNAs (miRNAs)是一類高度保守的非編碼小RNA,主要通過與靶基因3’末端非翻譯區(qū)互補配對,從而抑制靶基因的表達(dá)而發(fā)揮生物學(xué)功能,miRNA可以控制多種生物進(jìn)程：如細(xì)胞增殖,凋亡和分化。越來越多的證據(jù)表明miRNA表達(dá)異常參與腫瘤的發(fā)生。然而,在NPC中EBV能否并如何調(diào)控細(xì)胞miRNA的表達(dá)仍需要闡明。 本課題利用前期構(gòu)建的EBV穩(wěn)定感染293-EBV細(xì)胞系和對照組293細(xì)胞系進(jìn)行miRNA芯片分析。篩選受EBV調(diào)控的差異miRNAs,從miRNA的角度研究EBV促進(jìn)NPC發(fā)生發(fā)展的機制。 [miR-203在EBV感染的上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和低分化鼻咽癌組織中表達(dá)下調(diào)] 對293及293-EBV細(xì)胞進(jìn)行miRNA芯片檢測和分析,篩選差異表達(dá)超過2.5倍的miRNAs,其中3個表達(dá)上調(diào),15個表達(dá)下調(diào)。miR-203是上皮細(xì)胞中特異表達(dá)的一個miRNA,并在多種上皮腫瘤中表達(dá)下調(diào),具有抑瘤基因的功能,因此,本課題選擇miR-203作為下一步研究對象。芯片結(jié)果顯示miR-203在293-EBV細(xì)胞中下調(diào)約3.7倍。qRT-PCR證實miR-203表達(dá)水平和芯片結(jié)果保持一致；在EBV感染的上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中miR-203明顯下調(diào)；然而在EBV丟失上皮細(xì)胞中miR-203的表達(dá)水平恢復(fù)明顯；證實miR-203在低分化NPC組織較正常鼻咽組織中的表達(dá)水平下調(diào)4.25倍。 [miR-203調(diào)控新靶基因E2F3、CCNG1參與抑制上皮細(xì)胞的生長和惡性轉(zhuǎn)化能力] 通過miRBase軟件分析差異表達(dá)miRNA分子的基本信息,在線miRNA靶基因預(yù)測軟件targetscan和miRanda對下游靶基因進(jìn)行分析,并利用熒光素報告載體活性檢測實驗證實E2F3和CCNG1是miR-203的直接調(diào)控的新靶基因。RT-PCR和Westernblot結(jié)果顯示miR-203可以在mRNA和蛋白質(zhì)水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。 MTT和流式細(xì)胞結(jié)果表明miR-203具有抑制上皮細(xì)胞生長能力,能抑制細(xì)胞從G0/G1期向S期轉(zhuǎn)換的進(jìn)程；miR-203明顯抑制裸鼠移植瘤腫瘤細(xì)胞的生長。免疫組化和原為雜交結(jié)果顯示miR-203過表達(dá)的裸鼠瘤組織中靶基因E2F3和CCNG1表達(dá)下調(diào)。在上皮細(xì)胞中過表達(dá)靶基因E2F3和CCNG1能夠逆轉(zhuǎn)miR-203對上皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。 [LMP1是EBV下調(diào)miR-203的關(guān)鍵病毒蛋白,并且通過激活JNK和NF-κB信號通路調(diào)控miR-203的表達(dá)] 潛伏膜蛋白LMP1和LMP2是EBV編碼的重要癌蛋白。qRT-PCR結(jié)果證實EBV通過LMP1參與調(diào)控Pri-miR-203和Mature-miR-203表達(dá)下調(diào)而LMP2卻無此功能；在EBV和LMP1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的上皮細(xì)胞中沉默LMP1表達(dá)后,miR-203的表達(dá)量恢復(fù)明顯。免疫組化和原位雜交結(jié)果顯示miR-203在NPC旁較癌組織中表達(dá)高；LMP1表達(dá)陰性NPC組織較陽性癌組織的miR-203表達(dá)明顯增高。LMP1發(fā)揮生物學(xué)功能的主要區(qū)域是C端的CTAR1、CTAR2和CTAR3結(jié)構(gòu)域。Western-blot和qRT-PCR結(jié)果顯示LMP1蛋白CTAR1和CTAR2結(jié)構(gòu)域通過激活JNK和NF-κB信號通路調(diào)控miR-203的表達(dá)；而p38信號通路對miR-203的表達(dá)沒有明顯影響。同時,qRT-PCR結(jié)果證實LMP1蛋白CTAR3結(jié)構(gòu)域不能下調(diào)miR-203的表達(dá)。 [miR-203與鼻咽癌的侵襲轉(zhuǎn)移及患者血清中EBV抗體VCA-IgA的表達(dá)水平密切相關(guān)] 研究顯示miR-203在EBV感染的NPC組織中低表達(dá),miR-203可能是NPC潛在的抑瘤基因。本研究應(yīng)用NPC組織芯片,原位雜交結(jié)果顯示NPC組織中miR-203表達(dá)水平與NPC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者血清EBV抗體VCA-IgA表達(dá)量緊密相關(guān)。NPC組織中miR-203表達(dá)越低,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高,血清EBV抗體VCA-IgA表達(dá)水平越高。
[Abstract]:Background background

Epstein - Barr virus ( EBV ) is a highly transformed virus and is closely associated with a variety of malignancies such as Burkitt ' s lymphoma ( BL ) and nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) . However , the role of EBV in the development of NPC has not yet been elucidated . However , the role of EBV in the development of NPC has not yet been clarified . MicroRNAs ( microRNAs ) are highly conserved non - coding small RNAs that can control various biological processes , such as cell proliferation , apoptosis and differentiation .

In this study , miRNA chip analysis was carried out on 293 - EBV and 293 cell lines in the control group , and the mechanism of EBV for the development of NPC was studied from the angle of miRNA by screening the differentially expressed miRNA regulated by EBV .

Down - regulation of miR - 203 in EBV - infected epithelial cells , lymphocytes and low - differentiated nasopharyngeal carcinoma tissues

The results showed that miR - 203 was down - regulated in 293 - EBV cells by about 3.7 times , and the results showed that miR - 203 was down - regulated by about 3.7 times in 293 - EBV .
miR - 203 was down - regulated in lymphocytes of EBV - infected epithelial cells .
However , the expression level of miR - 203 in EBV - lost epithelial cells was restored .
It was confirmed that miR - 203 was down - regulated by 4.25 times in lower - differentiated NPC tissues than in normal nasopharyngeal tissues .

miR - 203 regulates the expression of E2F3 and CCNG1 in inhibiting the growth and malignant transformation ability of epithelial cells .

Through the miRBase software analysis , the basic information of miRNA molecules is analyzed , the target gene of the on - line miRNA is predicted by targetscan and miRanda , and the downstream target gene is analyzed by the miRNA target gene prediction software targetscan and miRanda , and a novel target gene which is directly regulated by miR - 203 is confirmed by using a fluorescein reporter vector activity detection experiment . The RT - PCR and Western blot results show that miR - 203 can regulate the expression of the target gene at mRNA and protein levels .

MTT and flow cytometry showed that miR - 203 had the ability to inhibit the growth of epithelial cells and inhibit the transition of cells from G0 / G1 phase to S phase ;
miR - 203 significantly inhibited the growth of tumor cells in nude mice . The expression of E2F3 and CCNG1 in nude mice with overexpression of miR - 203 was downregulated by immunohistochemistry and in situ hybridization . The overexpression of E2F3 and CCNG1 in epithelial cells could reverse the effects of miR - 203 on the biological function of epithelial cells .

LMP1 is a key viral protein down - regulation of miR - 203 by EBV , and the expression of miR - 203 is regulated by activating the NF - 魏B signal pathway .

latent membrane proteins LMP1 and LMP2 are important cancer proteins encoded by EBV . qRT - PCR results demonstrate that EBV is regulated by LMP1 in regulating the expression of Pri - miR - 203 and miR - miR - 203 , whereas LMP2 does not have this function ;
The expression of miR - 203 was restored after the expression of LMP1 was silenced in the stably transfected epithelial cells of EBV and LMP1 . The results of immunohistochemistry and in situ hybridization showed that miR - 203 was highly expressed in the adjacent tissues of NPC ;
In LMP1 , the expression of miR - 203 was significantly increased in the negative NPC tissues . The main regions of LMP1 play a biological function : CTAR1 , CTAR2 and CTAR3 domains at the C - terminal . Western - blot and qRT - PCR showed that the LMP1 protein CTAR1 and CTAR2 domains regulate the expression of miR - 203 by activating the MAPK and NF - 魏B signaling pathways .
At the same time , the results of qRT - PCR confirmed that the LMP1 protein CTAR3 domain could not downregulate the expression of miR - 203 .

Conclusion miR - 203 is closely related to the invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) and the level of EBV - IgA in patients with nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) .

The expression level of miR - 203 in NPC tissue was closely related to NPC ' s lymph node metastasis and the expression of EBV antibody of EBV . The higher the expression of miR - 203 in NPC tissue , the higher the expression level of miR - 203 in NPC tissue , the higher the expression level of EBV antibody in serum .
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.63

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉俊;黃陳;江_";鐘福全;;microRNA在胰腺癌中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年23期

2 王雪;王紅靜;;微小RNA與卵巢癌的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年08期

3 劉東;陳云昭;李鋒;;microRNA與食管癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年05期

4 黃文濤;郭向前;戴甲培;陳潤生;;MicroRNA,lncRNA與神經(jīng)退行性疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年08期

5 高玉;吳晉暉;柳林;;哺乳動物視網(wǎng)膜microRNA的表達(dá)及功能[J];眼科新進(jìn)展;2010年08期

6 吳微;楊歡;;MicroRNA與自身免疫性疾病[J];免疫學(xué)雜志;2010年12期

7 涂軼;梅金紅;;乳腺癌相關(guān)microRNA研究進(jìn)展[J];實用臨床醫(yī)學(xué);2010年11期

8 胡慶偉;杜英;梅麗娜;邢建民;鄧再興;;微小RNA-200家族在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[J];中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

9 蔣海鋒;薄雋杰;;MicroRNA與膀胱癌的研究進(jìn)展[J];中國癌癥雜志;2011年04期

10 王寧;呂延杰;楊寶峰;;MicroRNA在心律失常研究中的進(jìn)展及其應(yīng)用前景[J];分子診斷與治療雜志;2011年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李炯;段德民;鄭克孝;;新型非標(biāo)記高通量microRNA芯片技術(shù)[A];第一屆全國生物物理化學(xué)會議暨生物物理化學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略研討會論文摘要集[C];2010年

2 王俊峰;李巍;吳小江;阮康成;;大鼠附睪microRNA表達(dá)譜的研究[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

3 蔣義國;劉斌斌;;毒理學(xué)中的microRNA研究[A];廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2010年

4 鞏麗穎;孫開來;;兩種microRNA在先心病心肌組織中的表達(dá)[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動中國西部經(jīng)濟與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會大會論文摘要匯編[C];2011年

5 李夢龍;;Systematically analyze and select key features to microRNA precursors identification based on random forests[A];第十一屆全國計算（機）化學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2011年

6 徐晨;鮑堅強;李定;郭強蘇;;microRNA-449在小鼠精子發(fā)生過程中的作用研究[A];中國解剖學(xué)會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

7 江建霞;蔣晶晶;曹家樹;;白菜花粉發(fā)育及授粉受精過程相關(guān)microRNA篩選及驗證[A];中國園藝學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

8 劉娜;楊景華;張明方;;嫁接西瓜microRNA的鑒定以及表達(dá)差異研究[A];中國園藝學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

9 李鴻;屈晶晶;王睿;盛春君;程曉蕓;王吉影;蘇斌;柴尚玉;曲伸;;體外培養(yǎng)胰島的microRNA表達(dá)譜及功能研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

10 王國坤;朱嘉琦;荊清;秦永文;;缺氧刺激影響心肌細(xì)胞釋放microRNA[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 陳英云 喬蕤琳;哈醫(yī)大成功研發(fā)國內(nèi)首例microRNA轉(zhuǎn)基因及敲減小鼠模型[N];黑龍江經(jīng)濟報;2010年

2 記者 朱敏麗;醫(yī)藥城創(chuàng)新牛奶檢測技術(shù)[N];泰州日報;2010年

3 記者 許曉惠;乳品中微小核糖核酸科研成果公布[N];中國食品質(zhì)量報;2010年

4 常麗君;細(xì)胞間有傳遞致癌蛋白的“木馬”[N];科技日報;2010年

5 衣曉峰;哈醫(yī)大發(fā)現(xiàn)心肌肥厚發(fā)生發(fā)展新機制[N];中國醫(yī)藥報;2010年

6 劉麗華;傳染性單核細(xì)胞增多癥[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2009年

7 聯(lián)文;國際石油儲備：各具特色[N];中國石化報;2001年

8 本報記者 何屹;你到底打了幾份工？[N];科技日報;2010年

9 特約記者 肖鑫　記者 唐先武;我科學(xué)家提出肝癌預(yù)防判斷與治療新的潛在靶標(biāo)[N];科技日報;2011年

10 通訊員 肖鑫　記者 陳青;發(fā)現(xiàn)肝癌預(yù)防判斷潛在靶標(biāo)[N];文匯報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王雷;胰管內(nèi)乳頭狀粘液性腫瘤：臨床特征與microRNA的差異表達(dá)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 崔熠;microRNA在砷致胚胎發(fā)育毒性中的作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 王鎮(zhèn);食管黏膜鱗狀上皮癌變相關(guān)microRNA的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 侯晉;microRNA在病毒感染和肝細(xì)胞癌中的作用及相關(guān)機制研究[D];清華大學(xué);2010年

5 駱黎靜;人卵巢癌干細(xì)胞的分離、鑒定及其特異性microRNA的篩選[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

6 于曼麗;Let-7d對血管平滑肌細(xì)胞增殖調(diào)控的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

7 陳勇;microRNA-200c在胃癌SGC7901/CDDP細(xì)胞中的作用及其機制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

8 于琦;雄激素受體在乳腺癌中表達(dá)意義和相關(guān)microRNA篩選的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

9 翁春華;血管生成素特異microRNAs的鑒定與功能分析[D];浙江大學(xué);2010年

10 袁圓;全腦缺血再灌注后大鼠海馬microRNA的變化及Let-7e調(diào)控Caspase-3表達(dá)和機制研究[D];浙江大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 宋永站;microRNA-200c對ZEB1表達(dá)影響及對腫瘤細(xì)胞侵襲遷移作用[D];江蘇大學(xué);2010年

2 胡德亮;microRNA-19b在P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化中的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

3 曲婷;基于生物信息學(xué)方法的H1N1流感病毒致病及傳播特性研究[D];吉林大學(xué);2010年

4 呂賽群;基于microRNA調(diào)控靶向腫瘤細(xì)胞的溶瘤腺病毒的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

5 張秀梅;韌帶成纖維細(xì)胞成骨分化過程microRNA、mRNA和蛋白表達(dá)譜分析[D];濟南大學(xué);2011年

6 孫佃臣;低磷脅迫響應(yīng)microRNA及靶基因的克隆和大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

7 吉娜;自發(fā)性高血壓大鼠肥厚心肌和纖維化腎臟組織中microRNA-21的表達(dá)[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

8 陳娟;靶向Livin的microRNA干擾對人卵巢癌細(xì)胞SKOV3體外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

9 梅林;卡氏肺孢子菌MSG-UCS基因microRNA表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

10 孔飛飛;靶向YB-1基因的MicroRNA對乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

，

本文編號：1899553