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NgR介導(dǎo)的氧化應(yīng)激在葡萄糖誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞凋亡中的作用

發(fā)布時間:2018-04-29 10:01

  本文選題:視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞 + NgR; 參考:《錦州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文


【摘要】:目的觀察Ng R在葡萄糖誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(Retinal ganglion cells,RGC)凋亡中氧化應(yīng)激及線粒體途徑的變化,并進一步探討Ng R在葡萄糖誘導(dǎo)RGC凋亡中的作用機制。方法RGC-5細胞株分3組培養(yǎng):對照組(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清),高糖組(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清+30mmol/L葡萄糖)、NEP1-40組(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清+30mmol/L葡萄糖+1μmol/L NEP1-40)。各組RGC-5細胞株培養(yǎng)3d后檢測各指標:顯微鏡觀察RGC-5細胞生長狀態(tài),cell counting KIT-8法檢測RGC-5細胞活力,流式細胞儀檢測RGC-5細胞凋亡率,JC-1法檢測RGC-5細胞線粒體膜電位(Mitochondrial membrane potential,?Ψm),DCF熒光探針檢測RGC-5細胞內(nèi)ROS含量,TBA法檢測RGC-5細胞內(nèi)MDA含量,黃嘌呤氧化酶法檢測RGC-5細胞內(nèi)SOD活力,Western-blot檢測RGC-5細胞Bcl-2、Bax蛋白,線粒體Cyt C(Mitochondrial cytochrome C,mito-Cyt C)及胞漿Cyt C(Cytoplasm cytochrome C,cyt-Cyt C)蛋白的表達。結(jié)果與對照組對比,添加葡萄糖預(yù)處理后,(1)高糖組RGC-5細胞生長緩慢、狀態(tài)較差,且活力下降、凋亡率顯著增加;(2)RGC-5細胞氧化應(yīng)激相關(guān)指標ROS及MDA含量均升高,SOD活力下降;(3)RGC-5細胞?Ψm下降,抗凋亡Bcl-2蛋白表達降低而促凋亡Bax蛋白表達增加,Bcl-2/Bax蛋白比值降低,mito-Cyt C表達降低而cyt-Cyt C表達增加,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與高糖組相比,NEP1-40組抑制Ng R表達后,(1)RGC-5細胞狀態(tài)改善,細胞活力提高,凋亡率降低;(2)RGC-5細胞氧化應(yīng)激相關(guān)指標ROS及MDA含量均降低,SOD活力提高;(3)RGC-5細胞?Ψm上升,Bcl-2/Bax升高,mito-Cyt C表達增加而cyt-Cyt C表達降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論高糖狀態(tài)能通過Ng R介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)RGC凋亡,其機制可能與激活線粒體凋亡途徑有關(guān)。
[Abstract]:Objective To observe the changes of oxidative stress and mitochondrial pathway of Ng R in the apoptosis of retinal ganglion cells ( RGC ) induced by glucose . Methods RGC - 5 cells were cultured in three groups : control group ( DMEM high - sugar medium + 10 % fetal bovine serum ) , high - sugar group ( DMEM high - sugar medium + 10 % fetal bovine serum + 30 mmol / L glucose ) , NEP1 - 40 group ( DMEM high - sugar medium + 10 % fetal bovine serum + 30 mmol / L glucose + 1 渭mol / L NEP1 - 40 ) . RGC - 5 cell viability was observed by microscope . RGC - 5 cell viability was detected by cell counting KIT - 8 . The apoptosis rate of RGC - 5 cells was detected by flow cytometry and JC - 1 method was used to detect the mitochondrial membrane potential of RGC - 5 cells . Results Compared with control group , the content of MDA in RGC - 5 cells was decreased , and the expression of Bcl - 2 , Bax protein , mitochondrial Cyt C ( mito - Cyt C ) and Cyt C ( cyt - Cyt C ) protein in RGC - 5 cells were decreased .

【學(xué)位授予單位】:錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:R587.2;R774.1

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本文編號:1819449

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