本文選題：激活素受體ⅡA + 人晶狀體上皮細(xì)胞　； 參考：《吉林大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的: 探討外源表達(dá)激活素受體ⅡA（Activin Receptor ⅡA,ActRⅡA）對人晶狀體上皮細(xì)胞(Human Lens Epithelial Cell, HLEC)增殖的影響。 方法: (1)將ActRⅡA質(zhì)粒酶切鑒定后連接到真核表達(dá)載體PC-DNA3.0上，共表達(dá)一段融合蛋白c-myc，構(gòu)建重組質(zhì)粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA；LDMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HLECs，以脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組質(zhì)粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA和空載體質(zhì)粒PC-DNA3.0分別轉(zhuǎn)入該細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后，采用濃度為800ug/ml的G418進(jìn)行篩選，建立穩(wěn)定表達(dá)ActRⅡA的實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞系；采用免疫印跡方法檢測目的蛋白ActR ⅡA在HLECs的表達(dá)情況； (2)采用四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium，，MTT)方法分別檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組HLEC的增殖情況，分別在培養(yǎng)24h，48h，72h…10d后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配）20μl，37℃，5%CO2孵育4h后，用酶標(biāo)儀在570nm波長處檢測吸光度OD。 結(jié)果: 通過免疫印跡法檢測到實(shí)驗(yàn)組較對照組ActRⅡA表達(dá)明顯增多，通過MTT法檢測HLEC增殖發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，兩組差異顯著性明顯（P＜0.01），實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖受到明顯的抑制，并隨時(shí)間延長抑制作用逐漸增加。 結(jié)論: 外源基因ActRⅡA成功轉(zhuǎn)染HLEC，構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)ActRⅡA的HLEC細(xì)胞系；外源轉(zhuǎn)入的激活素受體ⅡA（ActRⅡA）在HLECs內(nèi)有較高表達(dá)；外源表達(dá)ActRⅡA對HLEC增殖有抑制作用，且隨時(shí)間延長抑制逐漸明顯，從而為基因治療后發(fā)性白內(nèi)障奠定了一定的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of exogenous expression of activin receptor 鈪

本文編號：1816625