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外源表達(dá)人激活要素受體ⅡA對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響

發(fā)布時(shí)間:2018-04-28 19:49

  本文選題:激活素受體ⅡA + 人晶狀體上皮細(xì)胞 ; 參考:《吉林大學(xué)》2012年碩士論文


【摘要】:目的: 探討外源表達(dá)激活素受體ⅡA(Activin Receptor ⅡA,ActRⅡA)對人晶狀體上皮細(xì)胞(Human Lens Epithelial Cell, HLEC)增殖的影響。 方法: (1)將ActRⅡA質(zhì)粒酶切鑒定后連接到真核表達(dá)載體PC-DNA3.0上,共表達(dá)一段融合蛋白c-myc,構(gòu)建重組質(zhì)粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA;LDMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HLECs,以脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組質(zhì)粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA和空載體質(zhì)粒PC-DNA3.0分別轉(zhuǎn)入該細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48h后,采用濃度為800ug/ml的G418進(jìn)行篩選,建立穩(wěn)定表達(dá)ActRⅡA的實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞系;采用免疫印跡方法檢測目的蛋白ActR ⅡA在HLECs的表達(dá)情況; (2)采用四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium,,MTT)方法分別檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組HLEC的增殖情況,分別在培養(yǎng)24h,48h,72h…10d后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配)20μl,37℃,5%CO2孵育4h后,用酶標(biāo)儀在570nm波長處檢測吸光度OD。 結(jié)果: 通過免疫印跡法檢測到實(shí)驗(yàn)組較對照組ActRⅡA表達(dá)明顯增多,通過MTT法檢測HLEC增殖發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組與對照組比較,兩組差異顯著性明顯(P<0.01),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖受到明顯的抑制,并隨時(shí)間延長抑制作用逐漸增加。 結(jié)論: 外源基因ActRⅡA成功轉(zhuǎn)染HLEC,構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)ActRⅡA的HLEC細(xì)胞系;外源轉(zhuǎn)入的激活素受體ⅡA(ActRⅡA)在HLECs內(nèi)有較高表達(dá);外源表達(dá)ActRⅡA對HLEC增殖有抑制作用,且隨時(shí)間延長抑制逐漸明顯,從而為基因治療后發(fā)性白內(nèi)障奠定了一定的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of exogenous expression of activin receptor 鈪

本文編號:1816625

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