本文選題：下咽鱗狀細(xì)胞癌 + ΔNp63α　； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:下咽癌是常見的頭頸部惡性腫瘤,在我國下咽癌發(fā)病率約為0.29/10萬。而在歐美國家下咽癌約占頭頸部惡性腫瘤的3%-5%,約94.9%的病理類型為鱗狀細(xì)胞癌。由于腫瘤惡性程度高以及侵襲能力強(qiáng),易發(fā)生局部或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,其預(yù)后極差,五年生存率在頭頸部腫瘤中最低。為提高下咽鱗狀細(xì)胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)轉(zhuǎn)移的早期診治、改善病人臨床預(yù)后,有必要研究HSCC發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制,探討調(diào)控其遷移和侵襲的主要因素,可為臨床診治提供新的思路。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮細(xì)胞的遷移和運(yùn)動(dòng)能力增加,從而轉(zhuǎn)化成易發(fā)生侵襲和遷移的具有間質(zhì)細(xì)胞特性的細(xì)胞,它是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要早期事件之一。EMT進(jìn)程涉及的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和蛋白較復(fù)雜,包括E-鈣黏蛋白(E-cadherin)等上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白和波形蛋白(Vimentin)等間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白。E-cadherin和Vimentin是腫瘤EMT最重要的指示蛋白。在EMT進(jìn)程中,E-cadherin表達(dá)下調(diào)、Vimentin表達(dá)上調(diào),提示腫瘤細(xì)胞向間充質(zhì)表型轉(zhuǎn)換,腫瘤發(fā)生了轉(zhuǎn)移。p63是p53基因家族的一員,與p53在序列和結(jié)構(gòu)上具有高度同源性,其在頭頸部組織主要表達(dá)亞型為ΔNp63α,可通過競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合下游靶基因DNA結(jié)合位點(diǎn)的方式拮抗p63其他亞型和p53的生物學(xué)功能,在細(xì)胞增殖和凋亡等多個(gè)生理病理過程中發(fā)揮重要作用。目前多項(xiàng)研究證明ΔNp63α在頭頸部惡性腫瘤中可調(diào)控增殖、耐藥等方面,但其在HSCC中對(duì)遷移侵襲的主要方式EMT的調(diào)控未有相關(guān)研究。因此我們?cè)诒菊n題中通過多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)在不同層面研究探討ΔNp63α對(duì)HSCC的EMT調(diào)控作用。第一部分ΔNp63α在頭頸部鱗癌細(xì)胞株中表達(dá)與EMT關(guān)系研究研究目的:研究在4株頭頸部鱗癌細(xì)胞株(HNC030#13、TU212、FADU及CAL-27)中ΔNp63的主要表達(dá)亞型和表達(dá)水平及,各細(xì)胞EMT標(biāo)志蛋白表達(dá)和細(xì)胞遷移侵襲能力水平,初步探討ΔNp63α在頭頸部鱗癌細(xì)胞株中對(duì)EMT調(diào)控關(guān)系。研究方法:在4株頭頸部鱗癌細(xì)胞株中采用Real-time PCR、Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ΔNp63α蛋白與EMT標(biāo)志蛋白表達(dá)水平。采用細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)頭頸部鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞遷移能力。采用細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)頭頸部鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞侵襲能力。研究結(jié)果:頭頸部鱗癌中Δnp63主要表達(dá)的亞型為Δnp63α。下咽鱗癌細(xì)胞株hnc030#13中Δnp63α、e-cadherin幾乎不表達(dá),而頭頸部鱗癌細(xì)胞胞株tu212兩者高表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。Δnp63α表達(dá)較多的喉鱗癌細(xì)胞株tu212的遷移、侵襲能力較低,而Δnp63α未檢測(cè)到明顯表達(dá)的下咽鱗癌細(xì)胞株hnc030#13的遷移侵襲能力最為顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。結(jié)論:Δnp63α在頭頸部鱗癌細(xì)胞株中可能抑制emt作用。第二部分Δnp63α重組慢病毒構(gòu)建及其調(diào)控下咽鱗癌emt作用研究研究目的:研究下咽鱗癌細(xì)胞株中Δnp63α表達(dá)水平改變對(duì)細(xì)胞emt標(biāo)志蛋白表達(dá)以及功能學(xué)方面的影響,探討Δnp63α在下咽鱗癌中對(duì)細(xì)胞emt進(jìn)程的調(diào)控作用。研究方法:采用構(gòu)建Δnp63α過表達(dá)慢病毒轉(zhuǎn)染下咽鱗癌細(xì)胞株hnc030#13并藥物篩選構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株。在穩(wěn)轉(zhuǎn)株中采用real-timepcr、westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Δnp63α蛋白與emt標(biāo)志蛋白表達(dá)水平的改變。采用細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)頭頸部鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞遷移能力。采用細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)頭頸部鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞侵襲能力。研究結(jié)果:lv-Δnp63α的hnc030#13細(xì)胞由長梭形的間充質(zhì)細(xì)胞外形向鵝卵石樣上皮細(xì)胞外形轉(zhuǎn)變。過表達(dá)Δnp63α后出現(xiàn)emt標(biāo)志蛋白e-cadherin明顯表達(dá)增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。lv-Δnp63α的hnc030#13細(xì)胞遷移、侵襲能力明顯下降(p0.001)。研究結(jié)論:Δnp63α在下咽鱗癌細(xì)胞株中表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞emt的進(jìn)程。第三部分Δnp63α及emt相關(guān)標(biāo)志物在下咽鱗癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究研究目的:探討Δnp63α和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子標(biāo)志物(e-cadherin、vimentin)在hscc組織中表達(dá)相關(guān)性及其臨床意義。研究方法:收集第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2013年1月至2016年11月收治的98例hscc患者的腫瘤組織及癌旁組織標(biāo)本。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各類組織及腫瘤不同區(qū)域中Δnp63α、e-cadherin、vimentin蛋白的表達(dá)水平,采用spearmen等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)分析各蛋白表達(dá)的相關(guān)性,采用秩和檢驗(yàn)比較各蛋白表達(dá)水平與患者臨床病理特征的相關(guān)性。研究結(jié)果:在腫瘤組織中,Δnp63α與e-cadherin的表達(dá)呈正相關(guān)(p0.01,rs=0.409),與vimentin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(p0.05,rs=-0.333)。與腫瘤中央?yún)^(qū)相比,腫瘤邊緣區(qū)可見Δnp63α、e-cadherin的陽性表達(dá)程度下降,vimentin的陽性表達(dá)程度上升(P均0.05)。與ΔNp63α表達(dá)呈正相關(guān)的E-cadherin、與ΔNp63α表達(dá)呈正相關(guān)呈負(fù)相關(guān)Vimentin蛋白表達(dá)與腫瘤病理分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05)。研究結(jié)論:ΔNp63α在HSCC中對(duì)EMT具有抑制作用。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 林樹春;林國經(jīng);黃建民;;下咽鱗狀細(xì)胞癌組織中ΔNp63和TAp63蛋白的表達(dá)及臨床意義[J];中國腫瘤臨床與康復(fù);2013年10期

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本文編號(hào)：1760635