本文選題：囊泡 + 鼻粘膜預(yù)后轉(zhuǎn)歸��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的 鼻息肉手術(shù)后鼻粘膜預(yù)后轉(zhuǎn)歸是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,涉及囊泡形成、多種炎癥細(xì)胞、細(xì)胞因子及介質(zhì)等的參與。尤其是囊泡的形成對(duì)鼻粘膜上皮化可以產(chǎn)生重要影響。目前對(duì)鼻內(nèi)鏡術(shù)后鼻腔粘膜囊泡的形成機(jī)制并不清楚,臨床上是否常規(guī)要清除囊泡也存在爭(zhēng)議。本研究采用病理形態(tài)學(xué)、透射電鏡、免疫組化、細(xì)胞因子及術(shù)后不同方式處理囊泡,探討鼻內(nèi)鏡術(shù)后鼻腔囊泡的分子免疫病理形態(tài)學(xué)改變對(duì)慢性鼻息肉患者鼻腔術(shù)后粘膜預(yù)后轉(zhuǎn)歸的影響,以期為臨床鼻內(nèi)鏡術(shù)后鼻腔粘膜良性轉(zhuǎn)歸提供理論依據(jù)。 方法 1.病例及標(biāo)本 1.病例選自珠江醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2010-03至2011-08行鼻內(nèi)鏡手術(shù),術(shù)后定期隨訪且粘膜有囊泡、肉芽組織增生的慢性鼻竇炎(雙側(cè),伴鼻息肉)患者48例(96側(cè)),其中男27例,女21例,年齡16歲到72歲,平均36.5歲。全部病例根據(jù)慢性鼻竇炎、鼻息肉診斷和治愈標(biāo)準(zhǔn)(2007EPOS標(biāo)準(zhǔn))納入。所有病例統(tǒng)一手術(shù)方式及術(shù)前術(shù)后用藥情況(口服或靜脈抗生素、糠酸莫米松噴鼻及鼻腔沖洗),均在鼻內(nèi)鏡下?lián)Q藥。術(shù)后換藥以術(shù)后20周內(nèi)作為研究期限。術(shù)中取下鼻甲組織(輕輕刮除)、鼻息肉組織、術(shù)后鼻腔不同時(shí)期的囊泡組織以及完成術(shù)腔上皮化后的中鼻道上皮組織。 2.分組及觀察方式 2.1臨床部分：以96側(cè)術(shù)腔為研究對(duì)象,根據(jù)對(duì)囊泡處理方式的不同,將其分為囊泡刮除組和未刮除組,鼻內(nèi)鏡下觀察比較兩組術(shù)后鼻粘膜上皮化情況；同時(shí)在換藥的過(guò)程中人為地把囊泡組織劃分為輕度組(單側(cè)術(shù)腔囊泡≤5個(gè),且囊泡直徑均≤5mm)及中重度組(單側(cè)術(shù)腔囊泡5個(gè)或囊泡≤5個(gè)而囊泡直徑5mm),觀察囊泡的差異是否影響患者術(shù)腔的上皮化進(jìn)程。 2.2:實(shí)驗(yàn)室部分：隨機(jī)從臨床部分48側(cè)刮除組抽取40側(cè)術(shù)腔作為研究對(duì)象,分別在術(shù)中、術(shù)后1-3周、術(shù)后6-8周及術(shù)后11～14周等4個(gè)時(shí)段采集中鼻道及下鼻甲組織。其中中鼻道的組織為實(shí)驗(yàn)組,同期的下鼻甲組織為對(duì)照組。采用HE染色及透射電鏡方法觀察囊泡的病理形態(tài)學(xué)變化。運(yùn)用免疫組織化學(xué)法探討各個(gè)時(shí)期的組織中的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表達(dá)變化。 3標(biāo)本的制備及觀察 3.1光鏡標(biāo)本 標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定,自動(dòng)脫水,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片3張,片厚4μ m。分別進(jìn)行HE染色。光鏡下觀察各黏膜纖毛細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、基底膜、黏膜間質(zhì)、炎癥細(xì)胞和黏液腺體的改變。 3.2掃描電鏡標(biāo)本 2.5%戊二醛-2%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液,固定4h以上；緩沖液漂洗3次,10min/次以上；1%鋨酸-0.1mol/L磷酸緩沖液,固定1.5h；緩沖液漂洗3次,10min/次以上；50%、70%、80%、90%、100%乙醇脫水,10-15min/次；100%丙酮浸泡2次,10-15min/次；丙酮：包埋劑=1:1,浸透1h；丙酮：包埋劑=1：2,浸透3h；純包埋劑浸透過(guò)夜；樣品挑出放入包埋板中聚合；60℃約48h至硬化；切1-2μm的半薄片,對(duì)照定位后,60-80nnm超薄切片,撈于銅網(wǎng)上；飽和醋酸鈾,枸櫞酸鉛染色；SEM觀察纖毛數(shù)量、脫落、紊亂、黏液附著情況。 3.3炎癥因子VEGF及TGFβ1免疫組織化學(xué)染色 VEGF及TGFβ1免疫組織化學(xué)采用SP法染色染色,操作步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,以PBS替代一抗設(shè)立陰性對(duì)照,以已知的陽(yáng)性組織片作為陽(yáng)性對(duì)照。圖像采集利用OLYMPUS BH-2型攝影生物顯微鏡,在40倍接物鏡下,選取陽(yáng)性細(xì)胞集中的視野,調(diào)整圖像效果,使圖像的背底光密度一致。結(jié)果判定,陽(yáng)性細(xì)胞可見棕黃色顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜。并采用Image-Pro Plus6.0軟件進(jìn)行圖像分析,測(cè)量免疫組化切片的陽(yáng)性面積和積分光密度,通過(guò)陽(yáng)性區(qū)域的平均光密度比較陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)弱。 4統(tǒng)計(jì)處理 所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)以X±s表示均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差,選用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)行正態(tài)分布檢驗(yàn),術(shù)腔上皮化時(shí)間比較采用析因設(shè)計(jì)的方差分析,各組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),方差不齊時(shí)采用Satterthwaite近似t檢驗(yàn)；VEGF及TGFβ1免疫組織化學(xué)表達(dá)采用重復(fù)測(cè)量的方差分析。,同一取材的部位組織不同時(shí)間點(diǎn)的免疫組化表達(dá)分別采用單向方差分析。Levene方差齊性檢驗(yàn),如方差齊,多重比較采用Bonferroni法；如方差不齊,選擇方差不齊的近似F檢驗(yàn)Brown-Forsythe法,多重比較方差齊性采用Dunnett's T3法。同一時(shí)間點(diǎn)不同部位的免疫組化表達(dá)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.鼻內(nèi)鏡下囊泡形態(tài)學(xué)變化 鼻內(nèi)鏡下囊泡呈淡黃或灰白色,半透明、質(zhì)軟、廣基或帶蒂囊性泡狀組織,部分內(nèi)容物為囊液,部分呈實(shí)質(zhì)性,多位于是篩竇術(shù)腔、額竇引流口。隨著術(shù)后清理過(guò)程的進(jìn)展,多數(shù)囊泡的透明度下降,部分較大的囊泡清理后創(chuàng)面會(huì)再次生成新的囊泡,新生成囊泡體積常較前有所減小。囊泡表面的痂皮等分泌物也隨著時(shí)間的推移慢慢減少。鼻內(nèi)鏡下囊泡與息肉組織不易區(qū)別。 2.病理學(xué)結(jié)果 2.1光鏡下囊泡組織均為假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮,術(shù)后1-3周組的囊泡組織多數(shù)表現(xiàn)為上皮剝蝕,基膜不連續(xù),細(xì)胞間隙寬,間質(zhì)內(nèi)大量紅細(xì)胞、少量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、固有層水腫,上皮層、上皮下層嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),上皮下可見小血管及腺體增生；6-8周組的囊泡組織多數(shù)上皮層完整連續(xù),上皮層可見杯狀細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、纖毛柱狀上皮增多；11～14周的囊泡組織上皮層連續(xù)性良好,上皮下間質(zhì)細(xì)胞增多,腺體成熟,腺體導(dǎo)管內(nèi)及血管周圍可見嗜酸性粒細(xì)胞等浸潤(rùn)；研究還發(fā)現(xiàn)有2例囊泡組織可見嗜酸性粒細(xì)胞聚集的現(xiàn)象,大量的嗜酸性粒細(xì)胞等聚集在囊泡組織的上皮下層及細(xì)胞間質(zhì)。 2.2透射電鏡下見囊泡上皮細(xì)胞有相對(duì)密集的纖毛組織,排列稍紊亂,其間可見微絨毛,大部分纖毛的橫斷面可見9+2型微管結(jié)構(gòu),有些中心微管為9+1或者缺如。而對(duì)照組鼻息肉組織透射電鏡下可見上皮細(xì)胞間隙較大,纖毛稀疏、粗細(xì)不均、線粒體腫脹等。 3分子免疫學(xué)結(jié)果顯示 3.1TGFβ1免疫組化結(jié)果顯示中鼻道組織：鼻息肉組、術(shù)后1-3周組、術(shù)后6-8周組、11～14周組的囊泡組織的陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域的平均光密度分別是0.63±0.06、0.61±0.06、0.58±0.08、0.39±0.04；同期的下鼻甲組分別是0.34±0.05、0.35±0.06、0.34±0.05、0.35±0.05。細(xì)胞因子TGFβ1免疫組織化學(xué)表達(dá)的變化采用重復(fù)測(cè)量的方差分析。不同取材部位即中鼻道組織和下鼻甲組織中TGFβ1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,中鼻道區(qū)域的組織明顯高于下鼻甲(F=1010.957,P=0.000)。；不同的取材時(shí)間即術(shù)中、術(shù)后1-3周、術(shù)后6-8周及術(shù)后11～14周組織中TGFβ1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=73.658,P=0.000)；組織采集時(shí)間和采集部位有顯著交互效應(yīng),二者的變化趨勢(shì)明顯不同(F=68.958,P=0.000)。中鼻道各組的TGFβ1隨時(shí)間一直呈下降趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=128.247；P=0.000)；對(duì)應(yīng)的同期下鼻甲各組變化相對(duì)較為平緩,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.236,P=0.871)。TGFβ1主要定位于黏膜下層及間質(zhì)的炎性細(xì)胞胞膜及胞質(zhì),炎性細(xì)胞聚集的部位表達(dá)較強(qiáng)。 3.2VEGF免疫組化結(jié)果顯示中鼻道的組織即術(shù)中鼻息肉、術(shù)后1-3周組、術(shù)后6-8周組、11～14周組的囊泡組織的陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域的平均光密度分別是0.28±0.03、0.22±0.03、0.34±0.05、0.23±0.03,同期的下鼻甲組織分別是0.23±0.02、0.24±0.05、0.23±0.03、0.24±0.04；不同取材部位即中鼻道組織和下鼻甲組織中VEGF的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=56.265,P=0.000)。不同的取材時(shí)間即術(shù)中、術(shù)后1-3周、術(shù)后6-8周及術(shù)后11～14周組織中VEGF的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=43.565,P=0.000)。標(biāo)本采集時(shí)間和采集部位有顯著交互效應(yīng),二者的變化趨勢(shì)明顯不同(F=49.227,P=0.000)。中鼻道的VEGF至手術(shù)后一直呈下降趨勢(shì),至術(shù)后術(shù)后3周,然后上升,術(shù)后6周達(dá)到高峰,然后下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=94.608；P=0.000)。對(duì)應(yīng)的同期下鼻甲組織變化相對(duì)較為平緩,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.909,P=0.440)；VEGF主要定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞、部分上皮細(xì)胞、部分腺體細(xì)胞以及極少數(shù)炎性細(xì)胞的胞質(zhì)。 4囊泡嚴(yán)重程度和處理囊泡方式對(duì)鼻術(shù)后鼻腔粘膜上皮化的影響結(jié)果 4.1囊泡的輕重程度對(duì)患者的上皮化影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=12.628,P=0.001)；術(shù)后及時(shí)刮除術(shù)腔的囊泡組織有利于加快術(shù)腔的上皮化進(jìn)程(F=11.120,p=0.000)；上述兩因素不存在的交互效應(yīng),即囊泡的嚴(yán)重程度及刮除與否對(duì)術(shù)腔黏膜的上皮化不相互影響(F=1.862,p=0.191)。 4.2中重度囊泡的兩組研究表明,處理組和對(duì)照組術(shù)腔粘膜上皮化的時(shí)間分別為11.3±2.25周、13.6±3.28周。處理組即刮除囊泡組織能使術(shù)腔粘膜更快上皮化,鼻腔粘膜上皮化的時(shí)間平均縮短約1.5周,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.586,p=0.014)。 4.3輕度組中兩組比較,處理組和對(duì)照組術(shù)腔粘膜上皮化的時(shí)間分別為9.9±1.71周、11.1±2.09周,囊泡組織的刮除與否對(duì)術(shù)腔粘膜上皮化進(jìn)程的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.814,p=0.075)。 結(jié)論 1.本研究依囊泡數(shù)量及大小可以而且應(yīng)該劃分為輕度組(單側(cè)術(shù)腔囊泡≤5個(gè),且囊泡直徑均≤5mm)及中重度組(單側(cè)術(shù)腔囊泡5個(gè)或囊泡≤5個(gè)而囊泡直徑5mm)。 2.術(shù)后對(duì)中重度囊泡進(jìn)行及時(shí)的清除有利于鼻腔粘膜的恢復(fù)愈合,對(duì)輕度的囊泡組織采取保留的態(tài)度,可以減少輕患者的換藥次數(shù)。 3.囊泡是鼻內(nèi)鏡術(shù)后有可能經(jīng)歷的階段,其出現(xiàn)可能提示是鼻腔粘膜術(shù)后對(duì)炎癥存在的反映,存在病理形態(tài)學(xué)改變及細(xì)胞因子(VEGF和TGFβ1)的動(dòng)態(tài)表達(dá)；這些變化可以成為鼻內(nèi)鏡術(shù)后粘膜預(yù)后轉(zhuǎn)歸的監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R765.9

【參考文獻(xiàn)】

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9 ;附:變應(yīng)性鼻炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(1997年修訂,�？�)[J];中華耳鼻咽喉科雜志;1998年03期

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本文編號(hào)：1753756