本文選題：噪聲性聾 + 血-迷路屏障　； 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：噪聲作為環(huán)境污染的一部分,對(duì)人們精神、心理及臟器系統(tǒng)帶來(lái)不同程度的危害。最嚴(yán)重的是對(duì)聽覺(jué)系統(tǒng)不可逆的損害。研究血管紋損傷分子機(jī)制為噪聲性聾(NIHL)提供更有效的防治辦法。耳蝸外側(cè)壁包括有血管紋(SV)和螺旋韌帶(SL),其中血管紋處的血-迷路屏障(BLB)對(duì)維持耳蝸內(nèi)電位(EP)、調(diào)控內(nèi)耳離子和體液平衡等具有重要作用。噪聲引起的耳蝸血管紋血-迷路屏障(BLB)損傷是噪聲性聾的重要影響因素之一。既往研究發(fā)現(xiàn),血-迷路屏障除包含有微血管內(nèi)皮細(xì)胞(ECs)和基膜(BM)外,還有周細(xì)胞(PCs)和血管周圍巨噬細(xì)胞樣黑色素細(xì)胞(PVM/Ms)的存在。PVM/Ms分泌色素上皮衍生因子(PEDF),具有抗血管新生、抗氧化、保護(hù)血管通透性的作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A (VEGFA)具有促進(jìn)血管新生、增加血管通透性的作用。PEDF、VEGFA可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞間連接蛋白的表達(dá),調(diào)控BLB通透性。ZO-1、VE-Cadherin和Occludin是血管紋BLB中的連接蛋白,在維持BLB穩(wěn)定性方面具有重要的作用。本實(shí)驗(yàn)在成功構(gòu)建噪聲性聾聽閾永久性閾移動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,利用免疫熒光染色、耳蝸冰凍切片、血管紋鋪片和激光共聚焦纖維成像掃描技術(shù),對(duì)噪聲暴露前后不同時(shí)間點(diǎn)耳蝸血管紋處PVM/Ms分布變化進(jìn)行分析比較。觀察到PVM/Ms熒光染色分布于耳蝸外側(cè)壁、基底膜和螺旋緣,發(fā)現(xiàn)噪聲暴露后急性期耳蝸PVM/Ms熒光染色分布減少。噪聲暴露1天后PVM/Ms熒光染色分布率增加,5天達(dá)到峰值,14天恢復(fù)至噪聲前水平。PVM/Ms可能通過(guò)分泌PEDF促進(jìn)血管紋組織修復(fù)、拮抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A (VEGFA)、抑制血-迷路屏障(BLB)通透性增加。為研究噪聲引起的PEDF、VEGFA變化及PEDF、VEGFA對(duì)連接蛋白的影響作用,利用免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qPCR)技術(shù)對(duì)噪聲暴露前后耳蝸外側(cè)壁連接蛋白、色素上皮衍生因子(PEDF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A (VEGFA)及其受體VEGFR1、VEGFR2進(jìn)行蛋白水平和mRNA水平的測(cè)試比較。發(fā)現(xiàn)噪聲暴露后急性期 PEDF、VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VE-Cadherin 和 ZO-1 表達(dá)下調(diào),Occludin 表達(dá)上調(diào)。PEDF、ZO-1、VE-Cadherin噪聲損傷急性期(NE)至噪聲后7天(NE7d)表達(dá)上調(diào)達(dá)峰值,至第14天(NE14d)表達(dá)下調(diào)。VEGFA、VEGFR1、VEGFR2噪聲后急性期(NE)至噪聲后第2天(NE2d)表達(dá)上調(diào)達(dá)峰值,至第14天(NE14d)表達(dá)下調(diào)。Occludin噪聲急性期(NE)至噪聲后第2天(NE2d)下調(diào)并達(dá)最低值,隨后表達(dá)上調(diào)。通過(guò)研究可得出結(jié)論,噪聲急性損傷刺激PVM/Ms胞體縮小、足突回縮,PEDF與連接蛋白表達(dá)量降低,增加血管紋BLB的通透性。噪聲損傷中期為修復(fù)噪聲引起的血管紋損傷,PVM/Ms激活、增多;PEDF表達(dá)增加促進(jìn)ZO-1、VE-Cadherin表達(dá),促進(jìn)血管紋BLB的修復(fù)。噪聲損傷中期VEGFA表達(dá)量增加,修復(fù)受損的微血管內(nèi)皮細(xì)胞,后期由于PEDF的桔抗作用,VEGFA表達(dá)量降低。VEGFA對(duì)ZO-1、VE-Cadher i n、Occlud i n具有抑制作用,在噪聲損傷后期Occ l ud i n表達(dá)量增加進(jìn)一步修復(fù)血管紋BLB。PEDF、VEGFA與連接蛋白間具有相互交叉的作用,根據(jù)我們的結(jié)果我們推斷PEDF對(duì)ZO-1的抑制作用較VEGFA的促進(jìn)作用明顯,VEGFA對(duì)Occludin具有明顯的抑制作用。研究噪聲引起的PEDF、VEGFA、連接蛋白表達(dá)變化,為發(fā)現(xiàn)其分子調(diào)控機(jī)制提供了新的思路,為我們進(jìn)一步研究噪聲引起的血管紋損傷機(jī)制提供了方向。
[Abstract]:As a part of the noise pollution of the environment, to the spirit of the people, different degree of harm and organ system. Psychology is the most serious irreversible damage of auditory system. Study on the molecular mechanism of injury to vascular pattern noise deafness (NIHL) to provide more effective prevention measures. The outer side wall comprises a cochlear stria vascularis (SV) and spiral ligament (SL), the stria of blood labyrinth barrier (BLB) to maintain the endocochlear potential (EP), the regulation of inner ear ion and fluid balance plays an important role in the stria vascularis. Noise caused by blood labyrinth barrier (BLB) damage is one of the most important factors of noise induced hearing loss. Previous studies have found that the blood labyrinth barrier in addition to containing microvascular endothelial cells (ECs) and basement membrane (BM), and pericytes (PCs) and perivascular macrophage like melanoma cells (PVM/Ms) in the presence of.PVM/Ms secretion of pigment epithelium derived factor (PEDF), anti blood The new pipe, antioxidant, protective effect on vascular permeability. Vascular endothelial growth factor A (VEGFA) can promote angiogenesis, increase the role of.PEDF in vascular permeability, VEGFA may regulate intercellular junction protein expression and regulation of BLB.ZO-1 and Occludin VE-Cadherin permeability, connexin BLB in the stria vascularis, plays an important role in to maintain the stability of BLB. In this experiment the noise deafness threshold permanent threshold shift animal model successfully constructed, using immunofluorescence staining, cochlear frozen section, and confocal laser scanning imaging technology fiber stria paving, analysis and comparison of noise exposure at different time points before and after cochlea PVM/Ms distribution changes. Observed by PVM/Ms staining in the lateral wall of the cochlea, basilar membrane and spiral limbus, found in acute phase noise exposure after cochlear PVM/Ms staining decreased. The distribution of noise 1 days after exposure to PVM/Ms fluorescence staining rate increased, reached the peak at the 5 day, the 14 day return to noise level before.PVM/Ms may promote PEDF secretion by microvascular tissue repair, anti vascular endothelial growth factor A (VEGFA), inhibition of blood labyrinth barrier (BLB) permeability. To research the noise induced PEDF, VEGFA changes and PEDF, the effect of VEGFA on the effect of connexin, using Western blotting test (Western blot) and real time fluorescent quantitative PCR (qPCR) technology on the lateral wall of the cochlea after noise exposure with protein, pigment epithelium derived factor (PEDF), vascular endothelial growth factor A (VEGFA) and its receptor VEGFR1, VEGFR2 protein level and the level of mRNA test. Found that the acute phase of PEDF, VEGFA after the noise exposure of VEGFR1, VEGFR2, VE-Cadherin and ZO-1 expression, Occludin expression of.PEDF, ZO-1, VE-Cadherin acute phase noise injury (NE) after 7 to noise Day (NE7d) expression reaching peak at day fourteenth (NE14d) expression of.VEGFA, VEGFR1, VEGFR2 after the acute phase noise to noise (NE) after second days (NE2d) expression was up-regulated peak to fourteenth days (NE14d) expression of.Occludin in acute phase noise (NE) to NE2d (second days after noise down) and reached the minimum value, then expression. Through the study it can be concluded that acute injury noise stimulates PVM/Ms cell body shrinkage and podocyte retraction, PEDF and connexin expression decreased, increased vascular permeability of BLB. Grain noise damage caused by mid stria vascular damage, repair the noise of PVM/Ms activation, increased PEDF; the increased expression of ZO-1 VE-Cadherin expression, promote, promote the repair of BLB in stria vascularis. Noise damage metaphase VEGFA expression increase, microvascular endothelial cells to repair damaged, since the late PEDF antagonistic effect, reduce the expression of VEGFA.VEGFA on ZO-1 VE-Cadher i n, Occlud I, n Inhibition, increase further repair of BLB.PEDF in stria vascularis in noise damage l UD I late Occ n expression, VEGFA and has a cross connection between proteins, based on our results we conclude that the inhibitory effect of PEDF on ZO-1 VEGFA was promoted obviously, VEGFA has obvious inhibitory effect on Occludin. The noise caused by PEDF, VEGFA, connexin expression provides a new way to find the molecular regulation mechanism, provide a direction for us to further study the mechanism of vascular crack damage caused by noise.

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R764

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本文編號(hào)：1748163