本文選題：變應性鼻炎 + 鼻黏膜　； 參考：《山東大學》2016年博士論文

【摘要】：目的本研究為了探討miR-146a在變應性鼻炎特異性免疫治療中所發(fā)揮的作用及其相關(guān)作用機制,對其在變應性鼻炎患者鼻黏膜中的表達情況進行檢測,隨后通過建立變應性鼻炎小鼠模型并研究進行特異性免疫治療時該小鼠模型中的miR-146a所發(fā)揮的作用,旨在為尋找新的特異性免疫增效因子并將之應用于臨床提供實驗依據(jù)。方法(1)熒光定量PCR法檢測變應性患者以及非變應性鼻炎人群鼻黏膜中miR-146a mRNA的表達。(2)基礎(chǔ)致敏階段：以BALB/c小鼠為對象,依照50μg卵清蛋白(Ovalbumin, OVA)、5mg氫氧化鋁凝膠為佐劑,加入1 mL滅菌生理鹽水配制成懸濁液,隨后對BALB/c小鼠進行腹腔注射,注射時間為隔日1次,總共注射7次；強化致敏階段：將小鼠進行基礎(chǔ)致敏之后,用5%OVA滅菌生理鹽水溶液對各組實驗小鼠進行滴鼻,每側(cè)用量為10 μL,頻率為每日1次,以此進行鼻腔激發(fā),對AR模型組分別連續(xù)激發(fā)10天、20天,對照組小鼠依照上述相同方法用0.9%滅菌生理鹽水進行腹腔注射,隨后再用0.9%滅菌生理鹽水進行滴鼻。酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測各組小鼠外周血OVA-sIgE含量,HE染色法觀察各組小鼠鼻黏膜組織形態(tài)學變化情況,用熒光定量PCR檢測各組小鼠鼻黏膜中miR-146a mRNA的表達情況。(3)分別用OVA (NPVO)、 miR-146a (NPVm)和OVA+miR-146a (NPVom)納米顆粒疫苗作用于變應性鼻炎小鼠模型,觀察進行上述操作后小鼠癥狀和相關(guān)指標的的變化情況。結(jié)果(1) miR-146a在變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中的相對表達量明顯低于非變應性鼻炎患者鼻黏膜組織(P0.01)；(2)造模結(jié)束后對小鼠鼻黏膜觀察結(jié)果表明,AR模型組小鼠均具有典型的變應性鼻炎臨床癥狀,其鼻黏膜上皮結(jié)構(gòu)紊亂,炎性細胞浸潤明顯,纖毛部分融合甚至脫落；血清OVA-sIgE的濃度明顯高于對照組(P0.05), miR-146a在AR模型組小鼠的鼻黏膜組織中的相對表達量明顯低于正常鼻黏膜組織(P0.01)。(3) NPVo組小鼠的變應性鼻炎癥狀明顯加重；NPVm處理組小鼠的變應性鼻炎相關(guān)反應無顯著變化；NPVom處理組小鼠對變影響鼻炎相關(guān)反應表現(xiàn)出了明顯的抑制作用；ELISA檢測結(jié)果表明,各組小鼠的血清以及鼻黏膜中的sIgE以及IL-4水平亦明顯增高；流式細胞術(shù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),OVA特異性抗原調(diào)節(jié)性T細胞的增殖活性顯著上升；各組AR模型小鼠鼻黏膜以及脾臟中調(diào)節(jié)性T細胞的增殖活性明顯低于正常對照組；分別用NPVo和NPVm處理的AR小鼠,其調(diào)節(jié)性T細胞增殖活性并未發(fā)生明顯變化,而當用NPVom作用小鼠后,該組小鼠的T細胞增殖活性發(fā)生明顯增高；進一步分析發(fā)現(xiàn),NPVom處理組小鼠的調(diào)節(jié)性T細胞具有OVA特異性；NPVm或者NPVom作用小鼠后,能夠使DCs中TGF-p mRNA及其相應蛋白的表達顯著增高；用naive CD4+T細胞與NPV致敏的DCs進行共培養(yǎng),結(jié)果表明NPVm/NPVom能夠顯著使naive CD4+CD25-T細胞轉(zhuǎn)變?yōu)镃D4+CD25+Foxp3+TGF+β+調(diào)節(jié)性T細胞；在用OVA作用后,由NPVom誘導的調(diào)節(jié)性T細胞的增殖活性顯著增高,而由NPVm誘導的調(diào)節(jié)性T細胞的增殖活性則無明顯變化；用牛血清白蛋白(BSA)作用于NPVom致敏DCs的增值情況進行檢測,結(jié)果表明調(diào)節(jié)性T細胞的增殖活性無顯著影響；分別將由NPVom誘導的調(diào)節(jié)性T細胞以及由NPVm誘導的調(diào)節(jié)性T細胞通過過繼性轉(zhuǎn)移的方式作用于變應性鼻炎小鼠,結(jié)果表明,由NPVom誘導的調(diào)節(jié)性T細胞能夠明顯抑制變應性鼻炎相關(guān)癥狀的出現(xiàn),而由NPVm誘導的調(diào)節(jié)性T細胞或者naive CD4+T細胞則對變應性鼻炎相關(guān)癥狀無明顯抑制作用。結(jié)論miR-146a能夠通過誘導抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)所介導的OVA特異性免疫治療,促進Treg增殖分化,抑制抗原特異性免疫反應,從而促進變應性鼻炎的免疫治療。
[Abstract]:Objective To investigate the role of miR - 14in allergic rhinitis specific immunotherapy and its related mechanism , and to detect the expression of miR - 14mRNA in the nasal mucosa of allergic rhinitis patients .
The results showed that ( 1 ) The relative expression of miR - 14s in nasal mucosa of allergic rhinitis patients was significantly lower than that in non - allergic rhinitis patients ( P0.01 ) .
( 2 ) The results of nasal mucosa observation showed that the AR model group had typical allergic rhinitis symptoms , its nasal mucosa epithelial structure disturbance , inflammatory cell infiltration and ciliate partial fusion or even shedding ;
The serum OVA - sIgE levels were significantly higher than those in the control group ( P0.05 ) , and the relative expression of miR - 14s in the nasal mucosa tissues of the AR model group was significantly lower than that in the normal nasal mucosa ( P0.01 ) .
There were no significant changes in allergic rhinitis - related reactions in mice treated with NPVm .
The effects of NPVom treatment group on allergic rhinitis were inhibited obviously .
The results of ELISA showed that the levels of sIgE and IL - 4 in serum and nasal mucosa of each group were also significantly increased .
The results of flow cytometry showed that the proliferation activity of OVA - specific antigen - regulatory T cells increased significantly ;
The proliferative activity of T cells in nasal mucosa and spleen of AR model mice was significantly lower than that of normal control group .
In AR mice treated with NPVo and NPVm , the proliferative activity of T cells was not changed significantly , but the proliferation activity of T cells increased significantly after NPVom was used in mice .
Furthermore , it was found that the regulatory T cells of NPVom treated group had OVA specificity .
After NPVm or NPVom , the expression of TGF - p mRNA and its corresponding protein in DCs was significantly increased .
The results showed that NPVm / NPVom could significantly transform naive CD4 + CD25 - T cells into CD4 + CD25 + Foxp3 + TGF + 尾 + regulatory T cells .
The proliferative activity of regulatory T cells induced by NPVom increased significantly after OVA , while the proliferative activity of regulatory T cells induced by NPVm did not change significantly ;
Bovine serum albumin ( BSA ) was used to detect the value - added of NPVom - sensitized DCs . The results showed that the proliferative activity of the regulatory T cells was not significantly affected .
Conclusion : The regulatory T cells induced by NPVom and regulatory T cells induced by NPVm can obviously inhibit the occurrence of allergic rhinitis , but the regulatory T cells or naive CD4 + T cells induced by NPVm can obviously inhibit the symptoms associated with allergic rhinitis .

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R765.21

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本文編號：1743049