本文選題：過(guò)敏性鼻炎　切入點(diǎn)：急性細(xì)菌性鼻竇炎　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分高遷移率家族蛋白1在過(guò)敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻黏膜中的表達(dá)及變化情況目的：分別建立過(guò)敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型。研究高遷移率家族蛋白1分別在過(guò)敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎中的變化情況,探究其在上呼吸道急性炎癥中的意義；研究炎癥小體分別在急性細(xì)菌性鼻竇炎及過(guò)敏性鼻炎中的變化情況,探究其參與HMGB1釋放的可能性方法：選取SPF級(jí)BALB/c小鼠,于實(shí)驗(yàn)第1、8、15日腹腔注射200μl含有40μg卵清蛋白(OVA)及2mg氫氧化鋁的PBS,于實(shí)驗(yàn)第22日開(kāi)始連續(xù)以濃度為250gg/10μl的OVA溶液對(duì)雙側(cè)鼻腔激發(fā)7日以建立急性過(guò)敏性鼻炎小鼠模型,末次OVA激發(fā)后計(jì)數(shù)10分鐘內(nèi)小鼠撓鼻及噴嚏次數(shù),24小時(shí)后處死并收集標(biāo)本；選取SPF級(jí)C57BL/6,以20μl濃度為1mg/ml的脂多糖溶液雙側(cè)鼻腔滴加1次以建立急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型,分別于首次滴加脂多糖后的第4日處死小鼠,收集標(biāo)本進(jìn)行后續(xù)研究。處死小鼠后于解剖顯微鏡下收集小鼠鼻腔黏膜,通過(guò)western-blot分別檢測(cè)Nlrp3、AIM2、 Asc、caspase-1及HMGB1的表達(dá)變化,剩余小鼠經(jīng)灌注后行鼻腔灌洗,固定后脫鈣并脫水包埋用于后續(xù)形態(tài)學(xué)及免疫組化研究。結(jié)果：1.過(guò)敏性鼻炎小鼠鼻黏膜內(nèi)可見(jiàn)大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),血清中IgE含量較對(duì)照組明顯上升,過(guò)敏性鼻炎小鼠模型建立成功；2脂多糖滴加4日后可見(jiàn)小鼠竇腔內(nèi)大量中性粒細(xì)胞滲出,急性細(xì)菌性鼻竇炎建立成功;3.急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻腔黏膜增厚伴有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。3.急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻黏膜中Nlrp3、Asc、caspase-1p20等Nlrp3炎癥小體組分表達(dá)增高,HMGB1表達(dá)增高且出現(xiàn)胞漿轉(zhuǎn)位。4.過(guò)敏性鼻炎小鼠鼻黏膜中AIM2、Asc、caspase-1 p20等AIM2炎癥小體組分表達(dá)增高,而Nlrp3表達(dá)下降,TUNEL顯示TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較正常組明顯增多,同時(shí)未觀察到caspase-3及PARP-1的剪切,提示細(xì)胞炎性死亡的發(fā)生。結(jié)論：AR及ABRS小鼠鼻黏膜中存在HMGB1表達(dá)升高及釋放,AIM2炎癥小體和Nlrp3炎癥小體分別在AR和ABRS小鼠鼻黏膜中激活,可能參與了HMGB1的釋放。第二部分丙酮酸乙酯通過(guò)抑制高遷移率家族蛋白1減輕小鼠過(guò)敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎目的：分別建立過(guò)敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型,并利用丙酮酸乙酯進(jìn)行干預(yù),觀察疾病模型中丙酮酸乙酯的作用,同時(shí)對(duì)其通過(guò)HMGB1發(fā)揮作用的機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法：同第一部分分別建立過(guò)敏性鼻炎及急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠模型,在給予OVA刺激前30分鐘以各濃度(50mg/kg、100mg/kg)丙酮酸乙酯對(duì)AR小鼠進(jìn)行腹腔注射,后進(jìn)行OVA激發(fā)持續(xù)至模型建立結(jié)束。急性細(xì)菌性鼻竇炎組小鼠于滴加LPS前30分鐘予以50mg/kg丙酮酸乙酯腹腔注射,后滴加LPS。小鼠于滴加LPS后4日處死,收集標(biāo)本并通過(guò)HE染色比較各組間中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況,western-blot及免疫組化觀察HMGB1胞漿轉(zhuǎn)位及表達(dá)情況,同時(shí)TLR-4及NF-κB的表達(dá)情況也一并檢測(cè)。過(guò)敏性鼻炎小鼠組于末次激發(fā)后計(jì)數(shù)小鼠撓鼻及噴嚏次數(shù),次日處死小鼠,收集標(biāo)本。處死小鼠后于解剖顯微鏡下收集小鼠鼻腔黏膜,通過(guò)western-blot及免疫組化檢測(cè)HMGB1的表達(dá)變化,剩余小鼠經(jīng)灌注后行鼻腔灌洗,鼻腔灌洗液用于檢測(cè)各組IL-4、IL-13變化情況,血清用于檢測(cè)OVA相關(guān)IgE、Ig2a及IgG1的變化情況。結(jié)果：1.OVA誘導(dǎo)過(guò)敏性鼻炎小鼠鼻黏膜內(nèi)可見(jiàn)大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),丙酮酸乙酯處理顯著降低嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度,且減輕效果呈劑量依賴性。丙酮酸乙酯顯著抑制過(guò)敏性鼻炎小鼠鼻黏膜內(nèi)HMGB1的表達(dá)以及胞漿轉(zhuǎn)位,并減輕過(guò)敏性鼻炎小鼠撓鼻及噴嚏等過(guò)敏性鼻炎癥狀(p0.05)。丙酮酸乙酯顯著降低過(guò)敏性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13的含量。丙酮酸乙酯對(duì)血清中OVA相關(guān)IgE、Ig2a及IgG并無(wú)顯著作用。2.脂多糖誘導(dǎo)急性鼻竇炎小鼠鼻竇腔內(nèi)可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞滲出,50mg/kg丙酮酸乙酯組小鼠竇腔內(nèi)中性粒細(xì)胞滲出較實(shí)驗(yàn)組少,對(duì)照組竇腔內(nèi)未見(jiàn)炎性細(xì)胞滲出。免疫組化結(jié)果示急性細(xì)菌性鼻竇炎小鼠鼻黏膜中TLR-4、NF-κB及HMGB1表達(dá)較對(duì)照組顯著增高,丙酮酸乙酯組較實(shí)驗(yàn)組TLR-4、NF-κB及HMGB1表達(dá)降低。結(jié)論：丙酮酸乙酯可有效減輕AR及ABRS,這部分作用可能是通過(guò)減少HMGB1表達(dá)及釋放來(lái)實(shí)現(xiàn)的
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本文編號(hào)：1654691