以絲素蛋白顆粒行聲帶注射填充喉成形術(shù)的初步實驗研究
本文選題:絲素蛋白 切入點:生物相容性 出處:《復旦大學》2012年博士論文 論文類型:學位論文
【摘要】:第一章絲素蛋白顆粒的制備及其生物相容性的初步研究 目的:制備不同粒徑范圍的絲素蛋白(Silk Fibroin, SF)顆粒,并通過體外、體內(nèi)實驗對其生物相容性進行初步研究。 方法:再生絲素蛋白經(jīng)過機械粉碎及篩網(wǎng)篩分,得到適于聲帶注射填充的不同粒徑范圍的SF顆粒,通過掃描電鏡觀察其形狀、大小和表面特性;體外實驗中,將兩種不同粒徑范圍的SF顆粒與RAW264.7巨噬細胞共同培養(yǎng)24h后,通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)的變化,real time RT-PCR及ELISA檢測IL-1β、IL-6和TNF-α三種促炎因子的表達和分泌來評估炎癥反應(yīng)的程度;體內(nèi)實驗利用BALB/c小鼠氣囊動物模型及新西蘭大白兔為實驗對象,通過對SF顆粒囊內(nèi)注射后BALB/c小鼠氣囊內(nèi)促炎因子的釋放及囊壁組織病理變化的急性期觀察,以及對新西蘭大白兔背部肌肉內(nèi)注射SF顆粒后,局部組織病理學變化的長期觀察,評估SF顆粒在體內(nèi)炎癥反應(yīng)的過程及轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果:再生絲素蛋白經(jīng)機械粉碎及篩網(wǎng)篩分,得到粒徑范圍分別為10-45μm(SFS)及45-125μm(SFL)的兩種SF顆粒,掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn),顆粒形態(tài)不規(guī)則,表面略粗糙;SFS和SFL與RAW264.7巨噬細胞共培養(yǎng)24h,能夠引起巨噬細胞TNF-α mRNA表達的顯著上調(diào),其中SFS引起的TNF-α mRNA上調(diào)更為明顯,但是ELISA檢測顯示兩種SF顆粒均不會引起任何促炎因子分泌的增加;皮下氣囊動物模型的動物實驗發(fā)現(xiàn),SFL及SFS刺激48小時,均能引起囊腔灌洗液中IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的顯著增加,但除了TNF-α以外均低于陽性對照組,同時兩種粒徑范圍的SF顆粒均能引起與陽性對照組類似的囊壁組織的增生增厚及類似的炎癥細胞浸潤,各檢測指標SFS刺激組均高于SFL刺激組;SFL及SFS新西蘭大白兔背部肌肉內(nèi)注射均能引起較為明顯的急性期炎癥反應(yīng),但隨著時間的延長,炎癥反應(yīng)逐漸減輕,伴有有限的纖維結(jié)締組織的增生,兩種粒徑范圍的SF顆粒最終為薄層膠原纖維包裹固定,SFL與SFS刺激所引起局部炎癥反應(yīng)及纖維化程度組間差異不顯著,SF顆粒材料在體內(nèi)觀察6個月無明顯降解。 結(jié)論:體外實驗表明,SF顆粒具有良好的生物相容性,但提示有可能會導致TNF-α介導的炎癥反應(yīng);體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn),SF顆粒會導致較為明顯的急性期炎癥反應(yīng),IL-1β、IL-6和TNF-α三種促炎因子均參與,以TNF-α為主,隨著時間的延長,炎癥反應(yīng)逐漸減輕,SF顆粒表現(xiàn)出良好的生物相容性及不易游走移位的特點,其中SFS引起的早期炎癥反應(yīng)較SFL明顯;SFL有可能成為一種良好的聲帶注射填充材料。 第二章絲素蛋白顆粒行聲帶注射填充喉成形術(shù)的初步動物實驗研究 目的:通過動物實驗來評估以絲素蛋白顆粒行聲帶注射填充喉成形術(shù)的可行性及其效果。 方法:以新西蘭大白兔和比格犬為實驗對象,首先切斷并結(jié)扎迷走神經(jīng)(新西蘭大白兔)或者喉返神經(jīng)(比格犬)制作左側(cè)聲帶麻痹的動物模型,即刻以SFL(與HA (Hyalunic Acid,醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉)等體積混合)經(jīng)甲狀軟骨板穿刺行左側(cè)聲門旁間隙及聲帶肌內(nèi)注射填充喉成形術(shù)。術(shù)后定期處死實驗動物,對兔喉進行組織病理學觀察;對比格犬離體喉行吹鳴喉實驗進行嗓音的空氣動力學評估,并通過高速攝影觀察聲帶黏膜波動。 結(jié)果:以SFL行新西蘭大白兔單側(cè)聲帶麻痹動物模型聲帶注射填充喉成形術(shù)的動物實驗研究發(fā)現(xiàn),SFL在麻痹側(cè)聲帶內(nèi)注射所引起的組織病理變化與背部肌肉內(nèi)注射類似,SFL在聲門旁間隙及聲帶肌內(nèi)注射所引起的炎癥反應(yīng)局限,輕微,未見化膿、壞死、肉芽腫以及材料游走移位,SFL不易降解吸收,聲帶黏膜上皮層及黏膜下層的組織病理結(jié)構(gòu)正常,不受影響;以SFL行比格犬單側(cè)聲帶麻痹動物模型聲帶注射填充喉成形術(shù)的動物實驗研究發(fā)現(xiàn),SFL聲帶內(nèi)注射會引起離體喉嗓音空氣動力學參數(shù)及聲帶黏膜波動的顯著變化,早期表現(xiàn)為PTP(Phonation Threshold Potential,閾發(fā)音聲門下壓)、PTF(Phonation Threshold Flow,閾發(fā)音氣流)及PTW (Phonation Threshold Power,閾發(fā)音功率)的下降和聲帶黏膜波動振幅的減弱,說明SFL聲帶內(nèi)注射后聲門面積的減小及發(fā)音效率的提高,但同時可能會影響聲帶黏膜波動;隨著時間的延長,術(shù)后6個月時,PTP、PTF及PTW均有所升高,聲帶黏膜波動有所增強然而仍弱于對照組,實驗結(jié)果表明注射材料由于HA的吸收體積變小而致聲門閉合程度下降,并且由于材料周圍的纖維結(jié)締組織增生引起聲帶張力的增加及黏彈性能的下降會影響到聲帶的黏膜波動。 結(jié)論:SFL作為一種聲帶注射填充材料,具有良好的生物相容性和位置穩(wěn)定性,不易被降解吸收,可改善單側(cè)聲帶麻痹動物模型的嗓音空氣動力學參數(shù),但可能會導致黏膜波動振幅減弱。將來應(yīng)注意避免材料中HA的吸收而導致的填充效果的下降,同時應(yīng)當改善SFL材料的粘彈特性以和聲帶組織匹配來減少注射材料對聲帶黏膜波動的影響。
[Abstract]:......
【學位授予單位】:復旦大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2012
【分類號】:R767.91
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本文編號:1640803
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