發(fā)布時(shí)間：2018-03-20 21:06

  本文選題：絲素蛋白　切入點(diǎn)：生物相容性　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一章絲素蛋白顆粒的制備及其生物相容性的初步研究 目的：制備不同粒徑范圍的絲素蛋白(Silk Fibroin, SF)顆粒,并通過(guò)體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)其生物相容性進(jìn)行初步研究。 方法：再生絲素蛋白經(jīng)過(guò)機(jī)械粉碎及篩網(wǎng)篩分,得到適于聲帶注射填充的不同粒徑范圍的SF顆粒,通過(guò)掃描電鏡觀察其形狀、大小和表面特性；體外實(shí)驗(yàn)中,將兩種不同粒徑范圍的SF顆粒與RAW264.7巨噬細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后,通過(guò)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,real time RT-PCR及ELISA檢測(cè)IL-1β、IL-6和TNF-α三種促炎因子的表達(dá)和分泌來(lái)評(píng)估炎癥反應(yīng)的程度；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)利用BALB/c小鼠氣囊動(dòng)物模型及新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)對(duì)SF顆粒囊內(nèi)注射后BALB/c小鼠氣囊內(nèi)促炎因子的釋放及囊壁組織病理變化的急性期觀察,以及對(duì)新西蘭大白兔背部肌肉內(nèi)注射SF顆粒后,局部組織病理學(xué)變化的長(zhǎng)期觀察,評(píng)估SF顆粒在體內(nèi)炎癥反應(yīng)的過(guò)程及轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果：再生絲素蛋白經(jīng)機(jī)械粉碎及篩網(wǎng)篩分,得到粒徑范圍分別為10-45μm(SFS)及45-125μm(SFL)的兩種SF顆粒,掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn),顆粒形態(tài)不規(guī)則,表面略粗糙；SFS和SFL與RAW264.7巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)24h,能夠引起巨噬細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)的顯著上調(diào),其中SFS引起的TNF-α mRNA上調(diào)更為明顯,但是ELISA檢測(cè)顯示兩種SF顆粒均不會(huì)引起任何促炎因子分泌的增加；皮下氣囊動(dòng)物模型的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),SFL及SFS刺激48小時(shí),均能引起囊腔灌洗液中IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的顯著增加,但除了TNF-α以外均低于陽(yáng)性對(duì)照組,同時(shí)兩種粒徑范圍的SF顆粒均能引起與陽(yáng)性對(duì)照組類似的囊壁組織的增生增厚及類似的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),各檢測(cè)指標(biāo)SFS刺激組均高于SFL刺激組；SFL及SFS新西蘭大白兔背部肌肉內(nèi)注射均能引起較為明顯的急性期炎癥反應(yīng),但隨著時(shí)間的延長(zhǎng),炎癥反應(yīng)逐漸減輕,伴有有限的纖維結(jié)締組織的增生,兩種粒徑范圍的SF顆粒最終為薄層膠原纖維包裹固定,SFL與SFS刺激所引起局部炎癥反應(yīng)及纖維化程度組間差異不顯著,SF顆粒材料在體內(nèi)觀察6個(gè)月無(wú)明顯降解。 結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)表明,SF顆粒具有良好的生物相容性,但提示有可能會(huì)導(dǎo)致TNF-α介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),SF顆粒會(huì)導(dǎo)致較為明顯的急性期炎癥反應(yīng),IL-1β、IL-6和TNF-α三種促炎因子均參與,以TNF-α為主,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),炎癥反應(yīng)逐漸減輕,SF顆粒表現(xiàn)出良好的生物相容性及不易游走移位的特點(diǎn),其中SFS引起的早期炎癥反應(yīng)較SFL明顯；SFL有可能成為一種良好的聲帶注射填充材料。 第二章絲素蛋白顆粒行聲帶注射填充喉成形術(shù)的初步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 目的：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估以絲素蛋白顆粒行聲帶注射填充喉成形術(shù)的可行性及其效果。 方法：以新西蘭大白兔和比格犬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,首先切斷并結(jié)扎迷走神經(jīng)(新西蘭大白兔)或者喉返神經(jīng)(比格犬)制作左側(cè)聲帶麻痹的動(dòng)物模型,即刻以SFL(與HA (Hyalunic Acid,醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉)等體積混合)經(jīng)甲狀軟骨板穿刺行左側(cè)聲門旁間隙及聲帶肌內(nèi)注射填充喉成形術(shù)。術(shù)后定期處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,對(duì)兔喉進(jìn)行組織病理學(xué)觀察；對(duì)比格犬離體喉行吹鳴喉實(shí)驗(yàn)進(jìn)行嗓音的空氣動(dòng)力學(xué)評(píng)估,并通過(guò)高速攝影觀察聲帶黏膜波動(dòng)。 結(jié)果：以SFL行新西蘭大白兔單側(cè)聲帶麻痹動(dòng)物模型聲帶注射填充喉成形術(shù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),SFL在麻痹側(cè)聲帶內(nèi)注射所引起的組織病理變化與背部肌肉內(nèi)注射類似,SFL在聲門旁間隙及聲帶肌內(nèi)注射所引起的炎癥反應(yīng)局限,輕微,未見(jiàn)化膿、壞死、肉芽腫以及材料游走移位,SFL不易降解吸收,聲帶黏膜上皮層及黏膜下層的組織病理結(jié)構(gòu)正常,不受影響；以SFL行比格犬單側(cè)聲帶麻痹動(dòng)物模型聲帶注射填充喉成形術(shù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),SFL聲帶內(nèi)注射會(huì)引起離體喉嗓音空氣動(dòng)力學(xué)參數(shù)及聲帶黏膜波動(dòng)的顯著變化,早期表現(xiàn)為PTP(Phonation Threshold Potential,閾發(fā)音聲門下壓)、PTF(Phonation Threshold Flow,閾發(fā)音氣流)及PTW (Phonation Threshold Power,閾發(fā)音功率)的下降和聲帶黏膜波動(dòng)振幅的減弱,說(shuō)明SFL聲帶內(nèi)注射后聲門面積的減小及發(fā)音效率的提高,但同時(shí)可能會(huì)影響聲帶黏膜波動(dòng)；隨著時(shí)間的延長(zhǎng),術(shù)后6個(gè)月時(shí),PTP、PTF及PTW均有所升高,聲帶黏膜波動(dòng)有所增強(qiáng)然而仍弱于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射材料由于HA的吸收體積變小而致聲門閉合程度下降,并且由于材料周圍的纖維結(jié)締組織增生引起聲帶張力的增加及黏彈性能的下降會(huì)影響到聲帶的黏膜波動(dòng)。 結(jié)論：SFL作為一種聲帶注射填充材料,具有良好的生物相容性和位置穩(wěn)定性,不易被降解吸收,可改善單側(cè)聲帶麻痹動(dòng)物模型的嗓音空氣動(dòng)力學(xué)參數(shù),但可能會(huì)導(dǎo)致黏膜波動(dòng)振幅減弱。將來(lái)應(yīng)注意避免材料中HA的吸收而導(dǎo)致的填充效果的下降,同時(shí)應(yīng)當(dāng)改善SFL材料的粘彈特性以和聲帶組織匹配來(lái)減少注射材料對(duì)聲帶黏膜波動(dòng)的影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R767.91

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