本文選題：TXR1　切入點(diǎn)：鼻咽癌　出處：《中南大學(xué)》2012年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 1.通過(guò)研究人類(lèi)鼻咽癌親本細(xì)胞與紫杉醇耐藥細(xì)胞中TXR1的表達(dá)情況,及TXR1的表達(dá)與鼻咽癌紫杉醇耐藥的相關(guān)性,探討其與紫杉醇耐藥的關(guān)系。 2.篩選高效抑制TXR1基因表達(dá)的siRNA,用于鼻咽癌紫杉醇耐藥逆轉(zhuǎn)的研究。 方法 1.從鼻咽癌親本及紫杉醇耐藥細(xì)胞中提取RNA及蛋白質(zhì),用熒光定量RT-PCR、Western-blot方法分別在mRNA水平及蛋白水平來(lái)檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞中TXR1的表達(dá)情況。 2.通過(guò)1ip2000載體將TXR1基因的siRNA導(dǎo)入鼻咽癌耐藥細(xì)胞,24小時(shí)后提取的蛋白質(zhì),來(lái)檢測(cè)不同siRNA對(duì)TXR1表達(dá)的影響。 結(jié)果 1.TXR1在鼻咽癌親本細(xì)胞、紫杉醇耐藥細(xì)胞中均有表達(dá),及耐藥細(xì)胞中TXR1的含量比相對(duì)應(yīng)親本細(xì)胞中的含量高,且與耐藥指數(shù)呈正相關(guān)(P2=0.979)。 2.四條TXR1基因的siRNA (siRNA TXR1-22、TXR1-311、 TXR1-654、Negative control FAM),通過(guò)lip2000分別轉(zhuǎn)染鼻咽癌紫杉醇耐藥細(xì)胞HNE-2/Taxol,轉(zhuǎn)染24h后,提取蛋白,利用Western blot技術(shù)在蛋白水平檢測(cè)不同siRNA對(duì)靶基因TXR1表達(dá)的影響,結(jié)果顯示TXR1-22對(duì)靶基因的抑制作用最強(qiáng)。 3. Negative control FAM轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在倒置熒光顯微鏡下計(jì)數(shù),得到較高的轉(zhuǎn)染率(85%),間接說(shuō)明lip2000轉(zhuǎn)染效率高。 結(jié)論 1.TXR1在紫杉醇耐藥細(xì)胞中的含量高于鼻咽癌親本細(xì)胞,說(shuō)明TXR1可能與紫杉醇耐藥有關(guān),并為臨床上逆轉(zhuǎn)紫杉醇耐藥奠定了基礎(chǔ)。 2.在蛋白質(zhì)水平,siRNA TXR1-22是所有設(shè)計(jì)的siRN中對(duì)TXR1抑制最強(qiáng),這為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Purpose. 1. To investigate the expression of TXR1 in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) parental cells and paclitaxel resistant cells, and the relationship between TXR1 expression and paclitaxel resistance. 2. SiRNAs which can inhibit the expression of TXR1 gene in nasopharyngeal carcinoma were screened and used to reverse paclitaxel resistance in nasopharyngeal carcinoma. Method. 1. RNA and protein were extracted from nasopharyngeal carcinoma (NPC) parents and paclitaxel resistant cells. The expression of TXR1 in nasopharyngeal carcinoma cells was detected by RT-PCR Western-blot at mRNA level and protein level, respectively. 2. The siRNA of TXR1 gene was introduced into the drug-resistant nasopharyngeal carcinoma cells 24 hours later by 1ip2000 vector to detect the effect of different siRNA on the expression of TXR1. Results. 1. TXR1 was expressed in the parent cells of nasopharyngeal carcinoma and paclitaxel resistant cells, and the content of TXR1 in the resistant cells was higher than that in the corresponding parent cells, and there was a positive correlation between TXR1 and drug resistance index. 2.The siRNA siRNA TXR1-22nTXR1-311 and TXR1-654Negative control FAMN of four TXR1 genes were transfected into nasopharyngeal carcinoma paclitaxel resistant cell line HNE-2 / Taxol by lip2000 respectively. After 24 hours of transfection, the protein was extracted, and the effect of different siRNA on TXR1 expression of target gene was detected at protein level by Western blot technique. The results showed that TXR1-22 had the strongest inhibitory effect on target gene. 3.The cells transfected with Negative control FAM were counted under inverted fluorescence microscope and the transfection efficiency was 85%, which indirectly indicated that the transfection efficiency of lip2000 was high. Conclusion. 1. The content of TXR1 in paclitaxel resistant cells was higher than that in nasopharyngeal carcinoma parent cells, which suggested that TXR1 might be related to paclitaxel resistance and laid a foundation for clinical reversal of taxol resistance. 2. SiRNA TXR1-22 is the most potent inhibitor of TXR1 among all the designed siRN at protein level, which lays the foundation for further experiments.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

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