本文選題：鼻咽癌　切入點：上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分放射線誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用研究目的：檢測放射線對鼻咽癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影響,探討EMT在鼻咽癌獲得性放療抵抗中的作用。方法：X射線照射鼻咽癌細(xì)胞系HNE1、CNE2、CNE1、CNE1-LMP1;顯微鏡下觀察記錄細(xì)胞EMT形態(tài)學(xué)變化；Western blot技術(shù)檢測EMT標(biāo)記分子、基質(zhì)金屬蛋白酶2,9 (matrix metalloproteinase 2,9; MMP-2,9)蛋白水平變化；免疫熒光實驗檢測EMT標(biāo)記分子的細(xì)胞定位與表達(dá)狀況；劃痕實驗檢測腫瘤細(xì)胞的遷移能力；Transwell實驗檢測腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果：X射線照射后,鼻咽癌細(xì)胞HNE1、CNE2、CNE1、CNE1-LMP1發(fā)生典型EMT形態(tài)學(xué)改變；Western blot結(jié)果顯示,照射后的鼻咽癌細(xì)胞以及放療抵抗鼻咽癌細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)減少,Vimentin、N-cadherin表達(dá)增多；免疫熒光實驗顯示：X射線照射后,鼻咽癌細(xì)胞間的E-cadherin表達(dá)量減少,而細(xì)胞漿內(nèi)Vimentin表達(dá)量增多；劃痕實驗顯示：照射后的鼻咽癌細(xì)胞遷移能力增強。而Transwell實驗和Western blot結(jié)果顯示：X射線照射后,鼻咽癌細(xì)胞的侵襲能力未發(fā)生明顯變化；放療組與未放療組中鼻咽癌細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平無明顯差異。結(jié)論：放射線可誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞出現(xiàn)典型EMT改變,而放療抵抗鼻咽癌細(xì)胞具有間質(zhì)細(xì)胞表型特征。研究結(jié)果提示,EMT參與鼻咽癌細(xì)胞的獲得性放療抵抗。第二部分放射線激活MET及其介導(dǎo)鼻咽癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化與放療抵抗的作用研究目的：檢測放射線對原癌基因MET及下游信號分子的激活情況,探討MET基因在放射線誘導(dǎo)鼻咽癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)以及鼻咽癌獲得性放療抵抗中的作用。方法：X射線照射鼻咽癌細(xì)胞系HNE1、CNE2、CNE1、CNE1-LMP1; ELISA實驗檢測鼻咽癌細(xì)胞中HGF自分泌水平；Real-time PCR (RT-PCR)實驗檢測鼻咽癌細(xì)胞中MET mRNA表達(dá)水平;Western blot技術(shù)檢測鼻咽癌細(xì)胞中c-Met及下游信號分子的活化情況；慢病毒轉(zhuǎn)染RNA干擾技術(shù)沉默MET基因表達(dá),RT-PCR、Western blot技術(shù)檢測MET基因沉默效應(yīng)；克隆形成實驗用于檢測X射線照射后的細(xì)胞克隆形成率,并繪制細(xì)胞生存曲線以比較細(xì)胞增殖能力。結(jié)果：X射線照射后,鼻咽癌細(xì)胞自分泌HGF水平輕度升高,而MET mRNA及c-Met蛋白表達(dá)水平明顯升高；X射線可激活c-Met及其下游信號分子,照射后的鼻咽癌細(xì)胞中p-c-Met、p-Stat3、p-Akt、p-erk1,2蛋白量表達(dá)增多；MET基因沉默鼻咽癌細(xì)胞組中,放射線誘導(dǎo)的EMT改變受到抑制、c-Met下游信號分子活化減弱、鼻咽癌細(xì)胞增殖能力降低。結(jié)論：放射線可激活c-Met及其下游信號分子；而沉默MET基因可阻斷放射線誘導(dǎo)的EMT改變以及c-Met信號活化,并增加鼻咽癌細(xì)胞的放療敏感性。研究結(jié)果提示,MET基因在放射線誘導(dǎo)EMT以及鼻咽癌放療抵抗中發(fā)揮重要作用。第三部分MET介導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控鼻咽癌放療抵抗的分子機制探討目的：探討MET基因介導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控鼻咽癌放療抵抗的可能分子機制。方法：Western blot技術(shù)檢測照射后鼻咽癌細(xì)胞中E-cadherin、β-catenin、c-Myc、CyclinD1分子表達(dá)情況。免疫熒光實驗檢測放療前后E-cadherin、β-catenin的細(xì)胞定位以及表達(dá)情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測X射線照射后鼻咽癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：Western blot結(jié)果顯示,鼻咽癌細(xì)胞照射后出現(xiàn)E-cadherin表達(dá)減少,p-catenin入核增多；而沉默MET基因后,核內(nèi)P-catenin表達(dá)量降低,同時下游靶基因c-Myc、Cyclin D1表達(dá)減少。免疫熒光實驗顯示：X射線照射后,鼻咽癌細(xì)胞之間的E-cadherin蛋白表達(dá)減少,P-catenin入核增多,而沉默MET基因后,P-catenin入核減少。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明：MET基因沉默組與隨機序列對照組相比,X射線照射引起的G2/M期細(xì)胞比例顯著增加、細(xì)胞凋亡率升高。結(jié)論：沉默MET基因可引起鼻咽癌細(xì)胞P-catenin入核減少、P-catenin下游靶分子c-Myc-Cyclin D1表達(dá)量降低,而且可以導(dǎo)致鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯、細(xì)胞凋亡率增加。研究結(jié)果提示,MET基因介導(dǎo)的EMT可能是通過下調(diào)E-cadherin表達(dá),促進β-catenin入核,進而激活下游與細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡相關(guān)的靶基因c-Myc、CyclinD1,最終引起鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生獲得性放療抵抗。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63

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本文編號：1588923