本文選題：VEGFR-1　切入點：VEGFR-2　出處：《山東大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景：視網(wǎng)膜新生血管形成(Retina neovascularization)是世界范圍致盲的重要原因,是一系列視網(wǎng)膜疾病的共同特征,如年齡相關性黃斑變性(Age-related Macular Degeneration,AMD)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(Retinopathy of prematurity,ROP)、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(Diabetic Retinopathy, DR)、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞(Central retinal vein occlusion)、視網(wǎng)膜靜脈周圍炎(Retinal periphlebitis)等,其致病機制尚不明確。近年來,有關內皮祖細胞的研究成為熱點,越來越多的證據(jù)表明內皮祖細胞(EPCs)在血管異常和修復方面均有重要的作用,這些細胞在視網(wǎng)膜新生血管疾病中所起的關鍵作用也已被證實,可能為視網(wǎng)膜新生血管疾病的治療提供新的思路。研究表明內皮祖細胞(EPCs)的分化和功能是依賴于環(huán)境因素的,血管生成因子(Agiogenesis factor)如血管內皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)和基質衍生因子(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)等作用于內皮祖細胞,使其重新灌注到局部缺血部位。表達CD34 (CD34+)的內皮祖細胞(EPCs)有分化成內皮細胞和形成正常血管結構的能力,而表達CD14(CD14+)的內皮祖細胞(EPCs)則不能形成正常的血管結構。目前關于氧環(huán)境對內皮祖細胞(EPCs)在血管異常和修復作用的影響機制方面鮮見報道。本文深入地探討了氧濃度對內皮祖細胞VEGFR-1、 VEGFR-2和CXCR4受體表達的影響,證實氧濃度的變化可以直接或間接地通過影響細胞的血管生成因子,決定內皮祖細胞的行為分化,從而影響新生血管形成的結果,為視網(wǎng)膜新生血管的治療提出了一個潛在的靶向。目的：探討氧濃度對內皮祖細胞(EPCs) VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體表達的影響,從而研究治療視網(wǎng)膜新生血管的新途徑。方法：將外周血來源的人內皮祖細胞(EPCs)隨機分為數(shù)量相同的21組：其中3組(標記為0hr組)為對照組,細胞復蘇后用含有10%胎牛血清(FBS)和20 U/mlDNase I (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)的內皮祖細胞培養(yǎng)液HPGM(Lonza Walkersville, Inc. Walkersville, MD)洗滌,即刻做流式細胞術、Western Blotting和RT-PCR檢測,其結果作為基礎對照。其他各組為4hr低氧組(3組),4hr正常氧組(3組),4hr高氧組(3組),24hr低氧組(3組),24h正常氧組(3組),24h高氧組(3組),分別放入0.2%氧濃度(低氧),5%氧濃度(正常氧)和20%氧濃度(高氧)的細胞培養(yǎng)箱,在含有10%胎牛血清(FBS)和20 U/ml DNase I (Sigma-Aldrich公司)的細胞培養(yǎng)液HPGM(Lonza Walkersville公司)中培養(yǎng)4小時和24小時,迅速收集細胞。然后通過流式細胞術檢測各組內皮祖細胞表面VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體的數(shù)量；通過Western blotting檢測各組內皮祖細胞VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體的蛋白含量；通過RT-PCR檢測各組內皮祖細胞的VEGFR-1、VEGFR-2和CXCR4受體的mRNA水平。實驗重復8次,每次21組,共168組。結果用Graphpad prism 5統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。p0.05,差異有顯著性；P0.01,差異有極顯著性。結果：1.VEGFR-1:流式細胞術檢測：細胞表面受體數(shù)量在24hr高氧組明顯減少,差異有極顯著性(p0.01)。Western blotting檢測：各組細胞受體蛋白表達相對穩(wěn)定。RT-PCR檢測：24hr高氧組和正常氧組細胞受體mRNA水平明顯降低,差異有顯著性(p0.05)。2. VEGFR-2:流式細胞術檢測：細胞表面受體數(shù)量在4hr高氧組和24hr高氧組明顯減少,差異有顯著性(p0.05)。Western blotting檢測：4hr高氧組和24hr高氧組受體蛋白表達明顯降低,差異均有顯著性(p0.05)。RT-PCR檢測：受體的mRNA水平在24hr正常氧和高氧組明顯降低,差異有顯著性(p0.05)。3. CXCR4:流式細胞術檢測：細胞表面受體數(shù)量在4hr高氧組明顯減少,差異有極顯著性(p0.01)。Western blotting檢測：各組受體蛋白表達相對穩(wěn)定。RT-PCR檢測：受體的mRNA水平在各組沒有明顯變化。結論：1.氧環(huán)境變化對內皮祖細胞(EPCs)表面血管生成因子受體VEGFR-1、 VEGFR-2和CXCR4的數(shù)量以及上述受體的蛋白表達和mRNA水平均會產(chǎn)生影響,使其發(fā)生顯著性變化。2.上述變化應可決定內皮祖細胞的行為,從而為視網(wǎng)膜新生血管的治療提供一個潛在的靶向。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1

【共引文獻】

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本文編號：1564583