本文關(guān)鍵詞： 視網(wǎng)膜色素變性 常染色體顯性遺傳 突變 聚合酶鏈反應(yīng) 外顯子測序技術(shù) SNRNP200基因　出處：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 1.建立原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性（retinitis pigmentosa, RP）家系臨床資料紙質(zhì)和電子檔案數(shù)據(jù)庫及血標(biāo)本庫。 2.分析一個視網(wǎng)膜色素變性家系SC001的臨床表型和遺傳學(xué)特征，定位該家系的致病基因突變位點(diǎn)。 3.掌握高通量測序技術(shù)（next-generation sequencing, NGS）的原理和數(shù)據(jù)分析。 方法： 1.采集SC001家系臨床資料：簽署知情同意書，填寫RP調(diào)查表，繪制家系圖譜。對受試者進(jìn)行視力、色覺、眼壓、房角、晶狀體、眼底、視野及視網(wǎng)膜電圖（electroretinography,ERG）等檢查。分析家系臨床表型，確定其遺傳方式。抽取受試者外周靜脈血10ml，提取基因組DNA，，經(jīng)鑒定合格后放入-80℃冰箱保存。將原始紙質(zhì)版資料和電子版資料整理后歸檔。 2.采用聚合酶連反應(yīng)（polymerase chain reaction, PCR）和Sanger測序法對RHO、Peripherin/RDS、ROM1、NRL、CRX、FSCN2、GUCA1B和TOPORS共8個常染色體顯性遺傳RP(autosomal dominant RP, adRP)候選基因的22個外顯子進(jìn)行致病基因突變位點(diǎn)篩查。 3.采用外顯子測序技術(shù)（exome sequencing）對SC001家系先癥者進(jìn)行外顯子捕獲測序，在結(jié)果中篩選RP已知候選基因突變位點(diǎn)，然后采用Sanger測序法在家系內(nèi)部驗(yàn)證，排除假陽性位點(diǎn)和SNPs。發(fā)現(xiàn)陽性位點(diǎn)后，在家系外100個無親緣關(guān)系的正常人中驗(yàn)證。 結(jié)果： 1.建立了科學(xué)、規(guī)范，符合國際、國內(nèi)遺傳資源采集研究原則要求的SC001RP遺傳家系臨床資料紙質(zhì)和電子檔案數(shù)據(jù)庫及血標(biāo)本庫。 2. SC001家系成員在RHO、Peripherin/RDS、ROM1、NRL、CRX、FSCN2、GUCA1B和TOPORS基因的外顯子編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)致病突變，但在Peripherin/RDS基因外顯子編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)5處單核苷酸改變。 3. adRP候選基因SNRNP200外顯子20一新的錯義突變c.2653CG，p.Q885E與SC001家系表型共分離，并且在100個無親緣關(guān)系的正常人中不存在該突變位點(diǎn)。USH2A基因c.2750GA和PDE6B基因c.1415GA為單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs），USH2A基因c.10246TG和c.997TC為假陽性位點(diǎn)。 結(jié)論： 1. RP遺傳家系臨床資料紙質(zhì)和電子檔案數(shù)據(jù)庫及血標(biāo)本庫是研究視網(wǎng)膜色素變性疾病的基礎(chǔ)，保證了遺傳資源資料的規(guī)范性、完整性和延續(xù)性，為今后視網(wǎng)膜色素變性家系的陸續(xù)收集和研究提供了很好的流程和模式，為后續(xù)深入研究和流行病學(xué)調(diào)查奠定了基礎(chǔ)。 2. SC001家系為adRP家系，候選基因RHO、Peripherin/RDS、ROM1、NRL、CRX、FSCN2、GUCA1B和TOPORS基因不是該家系的致病基因，Peripherin/RDS基因中5處單核苷酸改變屬于SNPs。 3. SNRNP200基因的新突變位點(diǎn)c.2653CG是SC001家系的致病基因突變，這在國內(nèi)外是首次報(bào)道，豐富了SNRNP200基因的突變譜。USH2A基因的c.2750GA和PDE6B基因的c.1415GA為新SNPs。
[Abstract]:Objective:. 1. To establish the paper and electronic file database and blood sample bank of the pedigrees of primary retinitis pigmentosa (RPs). 2. The clinical phenotypic and genetic characteristics of SC001 in a pedigree with retinitis pigmentosa were analyzed. 3. Mastering the principle and data analysis of next-generation sequencing (NGS). Methods:. 1. Collect the clinical data of SC001 family: sign informed consent form, fill in RP questionnaire, draw family map. Do visual acuity, color perception, intraocular pressure, angle of atrium, lens, fundus of eyes. Visual field and electroretinographic ERG. Analysis of clinical phenotypes. The genetic pattern was determined. 10 ml of peripheral venous blood was extracted, genomic DNA was extracted and stored in -80 鈩

本文編號：1533502