本文關(guān)鍵詞： 玉米黃素 葡萄膜黑色素瘤細胞 凋亡 遷移 侵襲　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：葡萄膜黑色素瘤(Uveal melanoma,UM)是一種最常見的成人眼內(nèi)原發(fā)腫瘤。據(jù)報道,美國UM每年的發(fā)病率為6-7例/百萬人。UM的生存率極低,約一半的患者在確診后25年內(nèi)死亡。UM的高死亡率與腫瘤的組織轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其中以肝轉(zhuǎn)移最為常見。大多數(shù)UM伴隨肝轉(zhuǎn)移的患者在6個月內(nèi)死亡。由于轉(zhuǎn)移性的UM患者預(yù)后較差,急需新的治療方法以提高患者的生存率。玉米黃素(Zeaxanthin)是一種類胡蘿卜色素,屬于葉黃素類。在多種食物(蛋黃、玉米、蔬菜和水果),草本植物,傳統(tǒng)中藥(沙棘、枸杞、百合、蘇鐵、番紅花)中含有很高的含量。已有研究發(fā)現(xiàn)不同惡性腫瘤的發(fā)病率與飲食或血液中玉米黃素含量有一定的關(guān)系。流行病學(xué)研究表明,多種惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險降低可能與高攝入量和血液中高含量的玉米黃素有關(guān),包括非霍奇金淋巴瘤,宮頸癌,食管癌,胃癌,肺癌,乳腺癌,腎臟腫瘤,頭頸部腫瘤,結(jié)腸癌和胰腺癌。但玉米黃素對不同腫瘤細胞作用的體外研究只有極少數(shù),且都僅局限于幾類癌細胞株,包括淋巴瘤,乳腺癌,結(jié)腸癌和神經(jīng)母細胞瘤。這些研究表明玉米黃素可能抑制癌細胞增殖或誘導(dǎo)癌細胞凋亡,但其誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的具體機制尚無報道。目前尚無玉米黃素的攝入量與血液中的含量與UM發(fā)病率之間的關(guān)系、玉米黃素誘導(dǎo)UM細胞的凋亡作用和途徑以及玉米黃素對UM細胞的遷移和侵襲作用及其機制的任何研究報道。目的:本實驗通過研究玉米黃素對人葡萄膜黑色素瘤細胞的凋亡作用及其相關(guān)途徑,以及玉米黃素對轉(zhuǎn)移性UM細胞遷移和侵襲的作用及其相關(guān)機制的研究,為玉米黃素用來治療葡萄膜黑色素瘤甚至其他惡性腫瘤提供理論基礎(chǔ)。方法:三種正常細胞(葡萄膜黑色素細胞、成纖維細胞及視網(wǎng)膜色素上皮細胞)和兩種葡萄膜黑色素瘤細胞(SP6.5和C918)與不同濃度(10,30,100和300μM)的玉米黃素培養(yǎng)。分別用MTT法檢測玉米黃素對細胞活性的影響,流式細胞儀檢測細胞的凋亡,Western Blot法檢測Bcl-2家族蛋白的表達情況,JC-1染色后檢測細胞膜電位(MTP)的改變,ELISA法分別檢測細胞色素c和Casepase-3、8、9的表達。細胞劃痕實驗和Boydon小室遷移實驗法檢測C918的遷移情況,Matrigel侵襲實驗檢測玉米黃素對細胞的侵襲作用,ELISA法檢測MMP-2蛋白和NF-κB的分泌情況。結(jié)果:不同濃度的玉米黃素(10,30,100和300μM)對人正常葡萄膜黑色素細胞、視網(wǎng)膜色素上皮細胞及成纖維細胞三種細胞的活性均無明顯影響。玉米黃素顯著降低SP6.5和C918兩種葡萄膜黑色素瘤細胞的活性,并呈劑量依賴效應(yīng)。流式細胞儀檢測結(jié)果為與對照組相比,玉米黃素能顯著增加葡萄膜黑色素瘤細胞的凋亡率(P0.05)。30μM的玉米黃素可顯著降低SP6.5的抑制凋亡蛋白Bcl-x L和Bcl-2的表達,增加促凋亡蛋白Bak的表達;降低C918的抑制凋亡蛋白Bcl-x L的表達,增加促凋亡蛋白Bax的表達(P0.05)。用30μM玉米黃素培養(yǎng)的C918以綠色熒光為主,MTP被損害。C918用玉米黃素培養(yǎng)后與對照組相比,細胞色素c、Caspase-3和Caspase-9的水平顯著增加(P0.05),而Caspase-8的水平無明顯變化。同對照組相比,3和10μM玉米黃素組遷移和侵襲的UM細胞數(shù)均顯著減少,C918分泌MMP-2的水平以及細胞核提取物中NF-κB的含量均顯著降低(P0.05)。結(jié)論:濃度為10-100μM的玉米黃素能選擇性地降低葡萄膜黑色素瘤細胞的活性,但對正常組織細胞(葡萄膜黑色素細胞、成纖維細胞和視網(wǎng)膜色素上皮細胞)活性即使在較高濃度300μM時仍無明顯影響,表明玉米黃素對葡萄膜黑色素瘤細胞有特異性。同非轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細胞SP6.5相比,玉米黃素對轉(zhuǎn)移性C918的細胞毒性更為敏感,這表明玉米黃素有可能成為預(yù)防和治療轉(zhuǎn)移性葡萄膜黑色素瘤的新藥。通過流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)用玉米黃素培養(yǎng)的細胞同對照組相比被annexin(表明凋亡變化)染色細胞明顯增多,且隨著時間增長細胞凋亡率增加,表明玉米黃素可以誘導(dǎo)UM細胞的凋亡。玉米黃素誘導(dǎo)凋亡是通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的細胞內(nèi)凋亡途徑。通過JC-1染色法發(fā)現(xiàn)玉米黃素可顯著增加線粒體外膜的通透性,使細胞色素c從線粒體釋放到細胞質(zhì)中,顯著增加細胞質(zhì)中的細胞色素c含量,從而激活Caspase-9和Caspase-3,最終引起細胞凋亡,表明玉米黃素主要通過細胞內(nèi)線粒體途徑誘導(dǎo)UM細胞凋亡。非致死劑量的玉米黃素通過NF-κB通路來抑制MMP-2的分泌,從而進一步引起玉米黃素抑制UM細胞的遷移和侵襲。綜上,玉米黃素可能是一種潛在的治療和預(yù)防葡萄膜黑色素瘤的新藥。
[Abstract]:Uveal melanoma (Uveal melanoma UM) is one of the most common adult primary intraocular tumor. According to reports, the United States UM annual incidence rate was 6-7 cases per million.UM survival rate is very low, the high mortality rate is closely related with tumor.UM in about half of the patients died within 25 years after diagnosis the transfer of tissue, with liver metastasis is the most common. Most UM with liver metastasis patients died within 6 months. Due to the transfer of UM patients with poor prognosis, urgent need of new treatment methods to improve the survival rate of patients. Zeaxanthin (Zeaxanthin) is a species of carotene, lutein is in a variety of. The food (egg yolk, corn, vegetables and fruits), herbs, traditional Chinese medicine (sea buckthorn, wolfberry, lily, cycas, saffron) contains high content. The research found that there were some different incidence of cancer and diet or blood corn content of emodin 緋，

本文編號：1527844