本文關(guān)鍵詞： 變應(yīng)性鼻炎 中藥干預(yù) 醒鼻凝膠劑 成纖維細(xì)胞 Fyn-STAT5信號(hào)通路 NF-κB基因敲除 TGF-β1　出處：《福建中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的本課題以變應(yīng)性鼻炎(allergicrhinitis,AR)豚鼠及體外分離的大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,采取體內(nèi)和體外相結(jié)合的研究方法,研究分析Fyn-STAT5信號(hào)通路在AR發(fā)病中的作用,并應(yīng)用醒鼻凝膠滴鼻劑進(jìn)行干預(yù),以闡明醒鼻凝膠滴鼻劑干預(yù)變應(yīng)性鼻炎的作用機(jī)制,為提高變應(yīng)性鼻炎的臨床療效奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1.醒鼻凝膠滴鼻劑干預(yù)AR豚鼠模型及對(duì)Fyn-STAT5信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究選取健康3月齡清潔級(jí)豚鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組,15只)和模型組(45只)。模型組采用卵清蛋白(OVA)和Al(OH)3混和液腹腔注射的方法建立AR模型,造模成功后依體重、性別按分層隨機(jī)法分為AR模型組(B組)、醒鼻凝膠滴鼻劑治療組(C組)和雷諾考特鼻噴霧劑對(duì)照組(D組)。給藥從腹腔注射后第2天開始,A、B兩組用生理鹽水滴鼻,C組用醒鼻凝膠滴鼻劑原液50μl滴鼻,D組用布地奈德鼻噴霧劑原液50μl滴鼻,每天3次,連續(xù)11天。激發(fā)時(shí)A組用生理鹽水50μl滴鼻,B、C、D組用2%OVA溶液滴鼻。激發(fā)從腹腔注射后第4天開始,隔日1次,共5次。給藥結(jié)束后將豚鼠致死取主動(dòng)脈血,采用ELISA方法檢測(cè)血清IL-10、MMP10水平。取豚鼠鼻粘膜,用HE染色法觀察鼻黏膜形態(tài),免疫組化方法檢測(cè)鼻黏膜CD19、CD23蛋白水平的表達(dá),real-time PCR方法檢測(cè)MCP-1、MMP-10、TGF-β1mRNA水平的表達(dá),Western blot方法檢測(cè)Fyn、STAT5的蛋白水平表達(dá)。2.醒鼻凝膠滴鼻劑干預(yù)AR大鼠模型對(duì)鼻黏膜成纖維細(xì)胞Fyn-STAT5信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究選取健康清潔級(jí)大鼠10只,鼠齡2個(gè)月,雌雄各半,體重150g-250g,按分層隨機(jī)法分為正常組(5只)和模型組(5只);NF-κB基因敲除大鼠5只,雌性3只,雄性2只,40日齡,體重130g-200g。模型組大鼠和NF-κB基因敲除AR大鼠的模型建立方法同體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。大鼠處死后分離兩側(cè)鼻黏膜,分離成纖維細(xì)胞,采用差速貼壁法純化細(xì)胞,然后從形態(tài)學(xué)角度觀察成纖維細(xì)胞形態(tài),用細(xì)胞免疫化學(xué)方法檢測(cè)成波形蛋白相關(guān)抗原。將成纖維細(xì)胞分為正常大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞組(A組)、AR大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞組(B組)、NF-κB基因敲除AR大鼠成纖維細(xì)胞組(C組);NF-κB基因敲除+TGF-β1組(D組)、NF-κB基因敲除+醒鼻凝膠滴鼻劑組(E組)和NF-1κB基因敲除+布地奈德鼻噴霧劑組(F組)。各組細(xì)胞分別干預(yù)12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí),干預(yù)結(jié)束后收集細(xì)胞并提取蛋白,用Western blot法檢測(cè)各組Fyn、STAT5的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1.AR豚鼠模型成功率為86.67%,45只實(shí)驗(yàn)豚鼠脫落6只,其中2只死亡,3只因評(píng)分5分被剔除。2.AR豚鼠鼻黏膜HE染色可見嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn),醒鼻凝膠滴鼻劑和布地奈德鼻噴霧劑干預(yù)后均能顯著改善鼻黏膜嗜酸性細(xì)胞的浸潤(rùn)(P均0.05),并能抑制CD19和CD23的表達(dá)(P均0.05),醒鼻凝膠滴鼻劑組和布地奈德鼻噴霧劑組比較則無(wú)顯著差異(P0.05)。3.醒鼻凝膠滴鼻劑和布地奈德鼻噴霧劑干預(yù)AR豚鼠均能降低血清IL-10、MMP10、TGF-β1、MCP-1和MMP10mRNA水平(P均0.05),并能抑制Fyn表達(dá)、上調(diào)STAT5表達(dá)(P均0.05),醒鼻凝膠滴鼻劑組和布地奈德鼻噴霧劑組比較則無(wú)顯著差異(P0.05)。4.經(jīng)NF-κB基因敲除后的AR大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞Fyn表達(dá)受到明顯抑制,STAT5表達(dá)明顯上調(diào)。(P均0.05)5.經(jīng)TGF-β1干預(yù)的AR大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞Fyn表達(dá)受到明顯抑制,STAT5表達(dá)明顯上調(diào)。(P均0.05)6.醒鼻凝膠滴鼻劑組和布地奈德鼻噴霧劑組均能明顯抑制體外AR大鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞Fyn-STAT5的信號(hào)通路(P均0.05),而二組之間比較無(wú)顯著差異(P0.05)。結(jié)論1.醒鼻凝膠滴鼻劑通過(guò)降低炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子的產(chǎn)生,以及抑制IgE受體的合成,起到抑制肥大細(xì)胞活化和脫顆粒的發(fā)生,達(dá)到治療AR的作用。2.醒鼻凝膠滴鼻劑通過(guò)抑制Fyn-STAT5信號(hào)通路的方式,抑制肥大細(xì)胞活性,減輕變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生,達(dá)到治療AR的作用。3.NF-κ B和TGF-β 1通過(guò)介導(dǎo)Fyn-STAT5信號(hào)通路的方式參與鼻黏膜成纖維細(xì)胞的活化,并且對(duì)該信號(hào)通路有抑制作用。4.醒鼻凝膠滴鼻劑對(duì)體外鼻黏膜成纖維細(xì)胞有抑制作用,這種抑制作用是通過(guò)調(diào)節(jié)Fyn-STAT5信號(hào)通路的方式發(fā)揮效,從而抑制鼻黏膜成纖維細(xì)胞的活化,抑制AR的發(fā)生。
[Abstract]:The purpose of this subject to allergic rhinitis (allergicrhinitis, AR) in rat nasal mucosa of guinea pigs and in vitro fibroblast cells as the research object, adopting the research method of combining in vitro and in vivo, analysis on the role of Fyn-STAT5 signaling pathway in the pathogenesis of AR, and the application of intervention of Xingbi nasal gel nasal drops, to clarify the role of the mechanism of Xingbi nasal gel nasal drops intervention of allergic rhinitis, to improve the clinical efficacy of allergic rhinitis to lay an experimental basis. 3 month old healthy clean grade 60 guinea pigs, 1. experimental methods of Xingbi nasal gel nasal drops intervention AR guinea pig model and its effects on Fyn-STAT5 signal pathway selection of male and female, were randomly divided into blank control group (group A, 15 rats) and model group (45 rats). The model group using ovalbumin (OVA) and Al (OH) 3 mixed solution intraperitoneal injection method to establish the AR model, after the success of the model according to the weight, sex randomly divided into AR 妯″瀷緇，

本文編號(hào)：1468580