發(fā)布時(shí)間：2018-01-17 01:00

  本文關(guān)鍵詞：柳穿魚(yú)黃素對(duì)人鼻咽癌C666-1細(xì)胞抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國(guó)南方高發(fā)惡性腫瘤之一,發(fā)病率為耳鼻咽喉惡性腫瘤之首;在流行病學(xué)、遺傳學(xué)和地理分布上都有其顯著的特征。盡管放射治療對(duì)早期鼻咽癌可以達(dá)到較高的治愈率,但是對(duì)于晚期鼻咽癌,放射治療卻很難達(dá)到令人滿意的治療效果。鼻咽癌局部復(fù)發(fā)和頻發(fā)的癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致鼻咽癌患者經(jīng)過(guò)放射治療后失敗的兩大主要原因[1]。因此需要探索新的治療手段來(lái)降低鼻咽癌的發(fā)病率和病情的嚴(yán)重程度。柳穿魚(yú)黃素是藥用植物大薊科飛機(jī)草中的一種活性成分。飛機(jī)草這種植物在臨床治療中通常是用于制作止血類藥物。研究表明柳穿魚(yú)黃素發(fā)揮了有效的細(xì)胞毒活性[2,3]。因此,柳穿魚(yú)黃素顯示了治愈細(xì)胞增殖異常類疾病的可能性,比如癌癥;而且吸引了研究者考慮將其作為化療藥物的備選。柳穿魚(yú)黃素已經(jīng)表現(xiàn)出具有使細(xì)胞凋亡的活性,但是具體的凋亡機(jī)制尚未研究明了。柳穿魚(yú)黃素抗鼻咽癌作用未見(jiàn)報(bào)道,本課題組擬通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),了解柳穿魚(yú)黃素對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞的體內(nèi)外抗腫瘤作用,并進(jìn)一步了解其抗癌作用機(jī)制,為深層次使用柳穿魚(yú)黃素抗鼻咽癌打下基礎(chǔ)。第一部分柳穿魚(yú)黃素體外抗鼻咽癌C666-1細(xì)胞作用研究方法通過(guò)采用CCK-8法、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和Western Blot檢測(cè),了解柳穿魚(yú)黃素對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞增殖以及凋亡的影響,尋找其抗鼻咽癌作用機(jī)制;并通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)及劃痕遷移實(shí)驗(yàn)了解柳穿魚(yú)黃素對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在C666-1細(xì)胞中加入柳穿魚(yú)黃素,濃度范圍從2至512微克/毫升,處理時(shí)間為24小時(shí)。與對(duì)照組DMSO比較,柳穿魚(yú)黃素處理組表現(xiàn)為劑量依賴性抗增殖活性。克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果,C666-1細(xì)胞在濃度40微克/毫升的柳穿魚(yú)黃素處理組的克隆數(shù)相對(duì)比于DMSO處理組降低近66.4%(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組比較柳穿魚(yú)黃素具有促進(jìn)C666-1細(xì)胞凋亡的作用;與對(duì)照組比較C666-1細(xì)胞經(jīng)過(guò)柳穿魚(yú)黃素處理后線粒體膜電位呈塌陷狀態(tài),24小時(shí)后細(xì)胞內(nèi)ROS水平增加。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,與對(duì)照組比較,柳穿魚(yú)黃素處理組細(xì)胞內(nèi)Cleaved Caspase-3、9蛋白表達(dá)升高。Transwell實(shí)驗(yàn)中遷移細(xì)胞數(shù)在柳穿魚(yú)黃素處理組低于在DMSO對(duì)照組中的細(xì)胞數(shù)(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;劃痕實(shí)驗(yàn)中,在柳穿魚(yú)黃素處理組的細(xì)胞相對(duì)遷移距離小于DMSO對(duì)照組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論柳穿魚(yú)黃素具有抑制人鼻咽癌C666-1細(xì)胞增殖、遷移及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,可能與其升高細(xì)胞內(nèi)Cleaved Caspase-3、9蛋白表達(dá)及ROS水平,觸發(fā)線粒體通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。第二部分柳穿魚(yú)黃素對(duì)C666-1細(xì)胞裸鼠移植瘤的作用方法建立人鼻咽癌C666-1裸鼠移植瘤模型,隨機(jī)分為對(duì)照組、柳穿魚(yú)黃素高、中、低劑量組(80、40、20mg/kg/d組)、順鉑組(DDP),分別腹腔注射給藥。4周后處死裸鼠,比較各組的抑瘤作用;對(duì)裸鼠移植瘤標(biāo)本進(jìn)行光鏡、原位末端標(biāo)記(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,并通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)標(biāo)本中凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-XL和active Caspase-3的表達(dá)變化;并通過(guò)實(shí)驗(yàn)了解柳穿魚(yú)黃素對(duì)裸鼠的毒性影響。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,各實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤體積及質(zhì)量均小于對(duì)照組(P0.01);各實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織中Bax、active Caspase-3蛋白的表達(dá)高于對(duì)照組(P0.01),Bcl-XL蛋白的表達(dá)低于對(duì)照組(P0.05);TUNEL結(jié)果顯示各實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織細(xì)胞凋亡指數(shù)高于對(duì)照組(P0.01)。高劑量柳穿魚(yú)黃素對(duì)裸鼠外周血常規(guī)無(wú)明顯抑制作用(P0.05),病理組織學(xué)檢查顯示對(duì)心臟、肝臟和腎臟無(wú)明顯毒性。結(jié)論柳穿魚(yú)黃素可抑制人鼻咽癌C666-1裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)且對(duì)裸鼠無(wú)明顯毒性,其主要通過(guò)誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫瘤作用,具體機(jī)制可能與升高Bax和active Caspase-3蛋白表達(dá),降低Bcl-XL蛋白表達(dá),觸發(fā)線粒體通路的細(xì)胞凋亡有關(guān)。
[Abstract]:Objective : Nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) is one of the primary malignant tumors in South China . The incidence rate is the head of malignant tumor in the south of China . Although radiotherapy can achieve higher cure rate for early nasopharyngeal carcinoma , it is difficult to achieve satisfactory treatment effect for advanced nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) . The local recurrence of nasopharyngeal carcinoma and distant metastasis of cancer cells are the main causes of the failure of nasopharyngeal carcinoma patients after radiotherapy . In this study , the effect of salinlavin on the proliferation and apoptosis of C666 - 1 cells in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) was studied by means of cell experiment and animal experiment .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1435580