本文關(guān)鍵詞：腺病毒轉(zhuǎn)染新生及成年鼠內(nèi)耳細(xì)胞的研究　出處：《中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版)》2016年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的探討腺病毒攜帶目的基因Cre和Oct4導(dǎo)入新生和成年小鼠轉(zhuǎn)染內(nèi)耳細(xì)胞的可行性,為內(nèi)耳基因治療提供可行性研究。方法采用納升級顯微操作系統(tǒng),經(jīng)耳蝸中階顯微注射攜帶基因編輯基因Cre和綠色熒光蛋白(GFP)基因的5型重組腺病毒懸液于新生鼠(P1)和成年鼠,并以腺病毒攜帶Oct4基因轉(zhuǎn)染入成年鼠內(nèi)耳,注射4d后取雙側(cè)耳蝸標(biāo)本做基底膜鋪片,觀察GFP和Oct4表達(dá)情況。結(jié)果新生鼠組:術(shù)后第4d見耳蝸底圈62%和中圈54%支持細(xì)胞表達(dá)GFP。成年鼠組:術(shù)后第4天可見耳蝸底圈96%和中圈51%內(nèi)毛細(xì)胞表達(dá)GFP,底圈72%和中圈40%支持細(xì)胞表達(dá)GFP。31%內(nèi)毛細(xì)胞和43%支持細(xì)胞表達(dá)Oct4。未注射耳未見GFP和Oct4表達(dá)。結(jié)論顯微注射腺病毒攜帶目的基因Cre和Oct4可高效導(dǎo)入新生鼠及成年鼠內(nèi)耳并表達(dá),可用來研究內(nèi)耳基因功能和基因治療。
[Abstract]:Objective to investigate the feasibility of transfection of adenovirus carrying target genes Cre and Oct4 into neonate and adult mouse inner ear cells and to provide a feasibility study for gene therapy of inner ear. Methods Nano-upgrade microoperating system was used. The recombinant adenovirus type 5 carrying the gene editing gene Cre and the green fluorescent protein (GFP) gene was injected into the cochlea by microinjection into the cochlea, and the recombinant adenovirus type 5 was suspended in the newborn mouse (P1) and the adult mouse. The adenovirus carrying Oct4 gene was transfected into the inner ear of adult rats and the bilateral cochlea specimens were taken for basement membrane preparation 4 days after injection. Results the expression of GFP and Oct4 was observed in neonatal rats on the 4th day after operation, cochlear basal ring 62% and middle ring 54% Sertoli cells were observed. On the 4th day after operation, GFP was expressed in the hair cells of cochlear basal ring 96% and middle circle 51%. Basal ring 72% and middle ring 40% Sertoli cells expressed GFP.31% inner hair cells and 43% Sertoli cells expressed Oct4.The expression of GFP and Oct4 was not found in ear injection. Conclusion Microinjection of adenovirus-carrying cells can not be seen. Cre and Oct4 with target genes can be efficiently introduced into the inner ear of newborn and adult rats and expressed. It can be used to study the gene function and gene therapy of inner ear.
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科國家計委聽覺醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院麻省眼耳醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(NSFC81300824) 上海市浦江人才資助項(xiàng)目(15PJ1401000)
【分類號】：R764
【正文快照】： 據(jù)2006?我國第?次殘疾人抽樣調(diào)查顯示?我國聽力殘疾人達(dá)2 780萬?并且還在不斷增加[1]。耳聾可?致分為3種類型?傳導(dǎo)性耳聾、感音神經(jīng)性耳聾和混合性耳聾。感音神經(jīng)性耳聾是由于耳蝸Corti氏器毛細(xì)胞、聽神經(jīng)、聽傳導(dǎo)徑?或各級神經(jīng)元受損害?致聲音的感受與神經(jīng)沖動傳遞障礙。因噪

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本文編號：1414100