本文關鍵詞：小瞼裂綜合癥相關基因SOX14在4株宮頸癌細胞系中的表達研究　出處：《濰坊醫(yī)學院》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景:小瞼裂綜合征(BPES)是一種常染色體顯性遺傳病,其病變基因定位于人3號染色體長臂端23位點,典型的BPES包括上瞼下垂、瞼裂狹小和倒向型內眥贅皮等特征。正常成年人在水平方向上的瞼裂長度應該是25至30毫米,而小瞼裂綜合征患者常為20至22毫米。上瞼下垂是由于上瞼提肌腱膜發(fā)育異常導致上瞼提肌功能缺陷引起的。小瞼裂綜合征患者還常表現(xiàn)出其他眼外特征,除了不育之外,最常見的是小頭畸形和肢體畸形�；驒z測發(fā)現(xiàn),幾乎所有伴有小頭畸形和肢體畸形的小瞼裂綜合征患者都有3號染色體的中間缺失,缺失部分包括3q23。SOX14基因定位在人類染色體3q23位點上,編碼一個在脊椎動物中高度保守的轉錄抑制因子。近年來國外許多學者在小瞼裂綜合征患者中發(fā)現(xiàn)了這個基因變異,也印證了它與該疾病患者肢體畸形、小頭畸形等表現(xiàn)有關。本課題主要研究小瞼裂綜合癥相關基因SOX14在幾株宮頸癌細胞系中的表達情況。目的:考慮到SOX14主要在胚胎期表達,本課題通過RT-PCR,熒光定量PCR和免疫印跡技術檢測小瞼裂綜合癥相關基因SOX14在幾株宮頸癌細胞系中的表達情況。以討論小瞼裂綜合癥相關基因SOX14,作為宮頸癌標記分子的潛在可能性。材料與方法:通過Trizol法分別提取293T,Hela,HT-3,Caski,Si Ha的總RNA并用甲醛瓊脂糖變性凝膠電泳鑒定提取的總RNA質量。之后,用fermentas逆轉錄試劑盒提供的oligo(d T)18作為引物,逆轉錄總RNA中的全部m RNA,得到c DNA。以c DNA為模板,用設計好的SOX14引物,做普通PCR,檢測各個細胞株中是否存在SOX14基因表達,并通過凝膠電泳鑒定結果。在用熒光定量PCR檢測SOX14在m RNA水平上各個細胞株中的表達差異,做擴增曲線和溶解曲線鑒定擴增質量。并以293T細胞為參照,計算其他4株宮頸癌細胞系中SOX14在m RNA水平的相對表達量。最后,通過免疫印跡法,證實SOX14在蛋白水平是否存在表達及相對表達差異。結果:甲醛瓊脂糖變性凝膠電泳結果顯示,提純的細胞總RNA質量較好,可以繼續(xù)進行下一步的逆轉錄實驗。逆轉錄PCR凝膠電泳結果顯示,在幾株細胞系中都檢測到了SOX14基因的m RNA,說明SOX14基因在m RNA水平存在表達。以293T細胞系為參照的熒光定量PCR結果顯示,SOX14在m RNA水平的表達量遠低于作為內參的beta-actin基因。在本研究采用的宮頸癌細胞系中,Si Ha細胞系SOX14基因的m RNA表達量最大,Hela細胞系和HT-3細胞系的SOX14基因的m RNA表達量次于Si Ha細胞系。Caski細胞系的SOX14基因表達量最少。免疫印跡結果顯示,SOX14蛋白在5種細胞株中都有表達。SOX14的蛋白表達量遠低于beta-actin蛋白,這點與熒光定量PCR的結果一致。在幾株細胞系中,Caski的Sox14蛋白表達量最低,在免疫印跡中的條帶有些模糊。結論:本研究證實了SOX14在所選取的幾株宮頸癌細胞中都存在表達。意外的是,我們也在293T細胞中發(fā)現(xiàn)了SOX14的表達。我們便以293T細胞為參照,探討了SOX14在各個宮頸癌細胞中的相對表達量。熒光定量PCR的結果顯示Si Ha細胞的SOX14基因表達量最大,而Caski細胞的SOX14基因表達量最小,而免疫印跡的結果則顯示了Hela,Si Ha,HT-3細胞在蛋白表達層面無差異,Caski細胞的SOX14基因表達量最小。考慮到SOX14基因只在正常組織的胚胎期表達,本研究的結果初步暗示了SOX14基因,作為小瞼裂綜合癥的相關基因,成為宮頸癌標志基因的潛在可能性。
【學位授予單位】：濰坊醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R777.1

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