發(fā)布時間：2017-12-20 14:32

  本文關鍵詞：預誘導培養(yǎng)的成人外周血單個核細胞在視網(wǎng)膜下腔移植后存活和功能修復的研究　出處：《中山大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：第一章成人外周血單個核細胞的分離及體外預誘導培養(yǎng)目的:從成人外周血中分離出單個核細胞,并進行預誘導培養(yǎng),從形態(tài)和基因水平觀察其變化。方法:應用密度梯度離心法將外周血單個核細胞從健康成人的外周血中分離出來,然后與新生大鼠的視網(wǎng)膜組織進行共培養(yǎng)4天,倒置顯微鏡觀察其形態(tài)變化,實時定量PCR檢測預誘導前后細胞RNA表達的變化。預誘導培養(yǎng)結束后將細胞用于小鼠的視網(wǎng)膜下腔移植。結果:新鮮分離的成人外周血單個核細胞圓形透亮,在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)液中散在分布,懸浮生長。隨后三天,部分細胞依然是圓形懸浮生長;而部分細胞逐漸發(fā)生形態(tài)變化,有些細胞貼壁生長,伸出一到三個短小的突起;還有部分細胞聚集呈團狀半貼壁生長。實時定量PCR結果顯示,預誘導培養(yǎng)后Nestin、βⅢ-tubulin、Rhodopsin、MAP2、GFAP、Synapsin、CD14、CD44、CD45、CD11b、CD19的RNA表達量提高,而CD16、CD3、CD34、Vimentin的表達量下降,其中MAP2、Rhodopsin、CD19和Vimentin的變化有統(tǒng)計學差異。結論:成人外周血單個核細胞在預誘導培養(yǎng)后有向神經(jīng)細胞及光感受器細胞分化的趨勢。第二章:預誘導培養(yǎng)后的成人外周血單個核細胞移植到模式小鼠視網(wǎng)膜下腔后的存活及功能修復情況目的:觀察預誘導培養(yǎng)的成人外周血單個核細胞在視網(wǎng)膜下腔移植后的存活及功能修復的情況。方法:將預誘導培養(yǎng)后的成人外周血單個核細胞經(jīng)視網(wǎng)膜下腔注射移植到12月齡的rd1和rds小鼠右眼中。6個月后,取rds小鼠的實驗眼做冰凍切片及免疫熒光染色,用共聚焦顯微鏡觀察移植細胞的存活和在視網(wǎng)膜各層的分布及表達各種標志物的情況。細胞移植后的rd1小鼠,分別于1個月、3個月及5個月的時候做雙眼的全視野視網(wǎng)膜電圖檢測,然后取實驗眼的視網(wǎng)膜組織做PCR,檢測移植細胞的存活情況。結果:移植6個月后rds小鼠治療眼的冰凍切片顯示,成人外周血單個核細胞可分布到內核層和節(jié)細胞層,而且部分細胞表達神經(jīng)干細胞標志物Nestin,神經(jīng)祖細胞標志物Vimentin、βⅢ-tubulin,神經(jīng)細胞標志物MAP2,及光感受器細胞標志物Rhodopsin,但有部分移植細胞并沒有表達相關的蛋白。PCR結果顯示,移植后1、3、5個月,人的細胞色素b基因仍在小鼠的實驗眼中有表達,說明移植細胞的存在。全視野視網(wǎng)膜電圖結果顯示,移植后1個月,所有接受移植的rd1小鼠的雙眼都檢測不到有對光反應,與未接受移植的對照rd1小鼠表現(xiàn)相同;移植3個月后,所有接受移植的小鼠的雙眼都有明顯的對光反應,且兩眼的表現(xiàn)沒有差異;移植5個月后,只有部分治療小鼠的實驗眼保留有對光反應,而所有的對照眼及部分實驗眼已失去對光反應。結論:在進行視網(wǎng)膜下腔移植5~6個月后,成人的外周血單個核細胞能在小鼠的視網(wǎng)膜中存活,并且部分細胞仍有表達神經(jīng)細胞相關標志物及光感受器細胞標志物。在功能方面,成人外周血單個核細胞能在移植后3~5個月發(fā)揮其修復作用,但在5個月左右,該作用不能繼續(xù)維持。
【學位授予單位】：中山大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R774.1

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本文編號：1312450