本文關(guān)鍵詞：預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)的成人外周血單個(gè)核細(xì)胞在視網(wǎng)膜下腔移植后存活和功能修復(fù)的研究　出處：《中山大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一章成人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離及體外預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)目的:從成人外周血中分離出單個(gè)核細(xì)胞,并進(jìn)行預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng),從形態(tài)和基因水平觀察其變化。方法:應(yīng)用密度梯度離心法將外周血單個(gè)核細(xì)胞從健康成人的外周血中分離出來(lái),然后與新生大鼠的視網(wǎng)膜組織進(jìn)行共培養(yǎng)4天,倒置顯微鏡觀察其形態(tài)變化,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)預(yù)誘導(dǎo)前后細(xì)胞RNA表達(dá)的變化。預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)束后將細(xì)胞用于小鼠的視網(wǎng)膜下腔移植。結(jié)果:新鮮分離的成人外周血單個(gè)核細(xì)胞圓形透亮,在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液中散在分布,懸浮生長(zhǎng)。隨后三天,部分細(xì)胞依然是圓形懸浮生長(zhǎng);而部分細(xì)胞逐漸發(fā)生形態(tài)變化,有些細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),伸出一到三個(gè)短小的突起;還有部分細(xì)胞聚集呈團(tuán)狀半貼壁生長(zhǎng)。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)后Nestin、βⅢ-tubulin、Rhodopsin、MAP2、GFAP、Synapsin、CD14、CD44、CD45、CD11b、CD19的RNA表達(dá)量提高,而CD16、CD3、CD34、Vimentin的表達(dá)量下降,其中MAP2、Rhodopsin、CD19和Vimentin的變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:成人外周血單個(gè)核細(xì)胞在預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)后有向神經(jīng)細(xì)胞及光感受器細(xì)胞分化的趨勢(shì)。第二章:預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)后的成人外周血單個(gè)核細(xì)胞移植到模式小鼠視網(wǎng)膜下腔后的存活及功能修復(fù)情況目的:觀察預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)的成人外周血單個(gè)核細(xì)胞在視網(wǎng)膜下腔移植后的存活及功能修復(fù)的情況。方法:將預(yù)誘導(dǎo)培養(yǎng)后的成人外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)視網(wǎng)膜下腔注射移植到12月齡的rd1和rds小鼠右眼中。6個(gè)月后,取rds小鼠的實(shí)驗(yàn)眼做冰凍切片及免疫熒光染色,用共聚焦顯微鏡觀察移植細(xì)胞的存活和在視網(wǎng)膜各層的分布及表達(dá)各種標(biāo)志物的情況。細(xì)胞移植后的rd1小鼠,分別于1個(gè)月、3個(gè)月及5個(gè)月的時(shí)候做雙眼的全視野視網(wǎng)膜電圖檢測(cè),然后取實(shí)驗(yàn)眼的視網(wǎng)膜組織做PCR,檢測(cè)移植細(xì)胞的存活情況。結(jié)果:移植6個(gè)月后rds小鼠治療眼的冰凍切片顯示,成人外周血單個(gè)核細(xì)胞可分布到內(nèi)核層和節(jié)細(xì)胞層,而且部分細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物Nestin,神經(jīng)祖細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin、βⅢ-tubulin,神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物MAP2,及光感受器細(xì)胞標(biāo)志物Rhodopsin,但有部分移植細(xì)胞并沒(méi)有表達(dá)相關(guān)的蛋白。PCR結(jié)果顯示,移植后1、3、5個(gè)月,人的細(xì)胞色素b基因仍在小鼠的實(shí)驗(yàn)眼中有表達(dá),說(shuō)明移植細(xì)胞的存在。全視野視網(wǎng)膜電圖結(jié)果顯示,移植后1個(gè)月,所有接受移植的rd1小鼠的雙眼都檢測(cè)不到有對(duì)光反應(yīng),與未接受移植的對(duì)照rd1小鼠表現(xiàn)相同;移植3個(gè)月后,所有接受移植的小鼠的雙眼都有明顯的對(duì)光反應(yīng),且兩眼的表現(xiàn)沒(méi)有差異;移植5個(gè)月后,只有部分治療小鼠的實(shí)驗(yàn)眼保留有對(duì)光反應(yīng),而所有的對(duì)照眼及部分實(shí)驗(yàn)眼已失去對(duì)光反應(yīng)。結(jié)論:在進(jìn)行視網(wǎng)膜下腔移植5~6個(gè)月后,成人的外周血單個(gè)核細(xì)胞能在小鼠的視網(wǎng)膜中存活,并且部分細(xì)胞仍有表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物及光感受器細(xì)胞標(biāo)志物。在功能方面,成人外周血單個(gè)核細(xì)胞能在移植后3~5個(gè)月發(fā)揮其修復(fù)作用,但在5個(gè)月左右,該作用不能繼續(xù)維持。
【學(xué)位授予單位】：中山大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：1312450