本文關(guān)鍵詞：腹腔注射NR2B受體阻斷劑對單眼剝奪小鼠初級視皮層V1B區(qū)NMDA受體亞基表達的影響

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【摘要】：目的研究單眼形覺剝奪(Monocular deprivation,MD)小鼠腹腔注射N-甲基-D-天門冬氨酸(N-methy-D-aspartate,NMDA)亞基受體阻斷劑后視皮層NMDA受體亞基NR2A、NR2B表達變化。探討NR2A、NR2B發(fā)育性變化及NR2B亞基受體阻斷劑通過血腦屏障作用于視皮層的可行性,為探索弱視機制及相關(guān)藥物治療提供實驗基礎(chǔ)。方法1.生后24天健康C57BL/6小鼠20只將小鼠隨機分4組,每組5只。分別為:正常對照組(N組);腹腔注射Ifenprodil組(Ifenprodil組);單眼剝奪組(MD組),單眼剝奪+腹腔注射Ifenprodil組(MD+Ifenprodil組),每組5只。形覺剝奪為生后24天縫合右眼,制備形覺剝奪模型。腹腔注射Ifenprodil組,生后24天健康C57BL/6小鼠,分別于單眼剝奪第1、3、5天腹腔注Ifenprodil,給藥劑量為10mg/kg;單眼剝奪+腹腔注射ifenprodil組,單眼剝奪后同時對小鼠腹腔注射Ifenprodil,給藥計量、頻率同腹腔注射組。所有實驗組小鼠均在自然光線環(huán)境下飼養(yǎng)。麻醉致死斷頭取腦。2.冰凍切片采用HE染色及免疫熒光組織化學方法檢測小鼠雙側(cè)視皮層NMDA受體亞基NR2A、NR2B的表達。3.采用熒光實時定量PCR(Quantitative Real-time PCR)檢測各組小鼠視皮層NMDA受體亞基NR2Am RNA和NR2Bm RNA的相對表達量。應用2-△△CT法計算NR2A、NR2B基因的相對表達量。統(tǒng)計方法:所有統(tǒng)計資料采用均數(shù)±標準差;同組內(nèi)小鼠左右側(cè)視皮層數(shù)據(jù)的差異采用配對t檢驗;各組間同側(cè)視皮層數(shù)據(jù)的差異采用雙因素方差分析,當P0.05為差異具有顯著性。結(jié)果1.HE染色顯示,腹腔注射Ifenprodil組、單眼剝奪組、單眼剝奪+腹腔注射Ifenprodil組及正常對照組小鼠兩側(cè)視皮層神經(jīng)元細胞結(jié)構(gòu)的構(gòu)筑清晰,層次分明,視神經(jīng)各層神經(jīng)元排列整齊,與正常組比較未見明顯異常。2.免疫熒光結(jié)果顯示受體陽性細胞主要位于細胞膜及細胞胞漿。各組內(nèi)視皮層NR2A表達結(jié)果如下:四組小鼠視皮層NR2A、NR2B相對表達:N組及Ifenprodil組左右側(cè)視皮層NR2A、NR2B相對表達差異無顯著性(P=0.834,P=0.727;P=0.837,P=0.624)。MD組剝奪眼對應視皮層較之非剝奪眼對應視皮層NR2A表達降低(t=-2.485,P0.05)、NR2B的表達增多(t=4.404,P0.05)。MD+Ifenprodil組剝奪眼對應視皮層較之非剝奪眼對應視皮層NR2A表達減少(t=-3.596,P0.05),NR2B表達差異無顯著性。四組小鼠左側(cè)視皮層NR2A、NR2B相對表達:與N組相比,MD組與MD+Ifenprodil組較之N組剝奪眼對應視皮層NR2A表達減少(t=-0.315,P0.05;t=-3.397,P0.05);較之Ifenprodil組,MD+Ifenprodil組NR2A表達減少(t=4.716,P0.05)。MD組NR2B表達量較之N組表達增多(t=-6.812,P0.05),Ifenprodil組與MD+Ifenprodil組較N組左側(cè)視皮層NR2B表達相對減少(t=5.633,P0.05;t=5.409,P0.05);四組小鼠右側(cè)視皮層NR2A、NR2B相對表達:與N組相比,Ifenprodil組、MD組與MD+Ifenprodil組非剝奪眼對應視皮較N組NR2A表達增多(t=-4.168,P0.05;t=-2.619,P0.05;t=-3.397,P0.05)。Ifenprodil組與MD+Ifenprodil組較N組右側(cè)視皮層NR2B相對表達減少(t=5.316,P0.05;t=6.366,P0.05)。3.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,以內(nèi)參照GAPDH基因及正常對照組基因表達為標準。以正常對照組變化倍數(shù)為1,各組內(nèi)視皮層NR2Am RNA表達結(jié)果如下:四組小鼠左右側(cè)視皮層NR2A m RNA、NR2B m RNA相對表達分析:N組及Ifenprodil組左右側(cè)視皮層NR2A m RNA、NR2B m RNA相對表達無顯著性差異(P=0.975,P=0.884;P=0.859,P=0.906)。MD組剝奪眼對應視皮層較之非剝奪眼對應視皮層NR2A m RNA的表達減少(t=-9.201,P0.05)、NR2B m RNA的表達增多(t=9.876,P0.05)。MD+Ifenprodil組剝奪眼對應視皮層NR2A m RNA表達減少(t=-7.436P0.05)。四組小鼠左側(cè)視皮層NR2A m RNA、NR2B m RNA相對表達分析:與N組相比,Ifenprodil組剝奪眼側(cè)視皮層NR2A m RNA表達增多(t=-4.352,P0.05),MD組與MD+Ifenprodil組較N組NR2A m RNA表達量減少(t=8.861,P0.05);MD組NR2B m RNA表達較之N組表達升高,Ifenprodil組與MD+Ifenprodil組較N組左側(cè)視皮層NR2B m RNA相對表達降低(t=4.379,P0.05;t=5.445,P0.05)四組小鼠右側(cè)視皮層NR2A m RNA、NR2B m RNA相對表達量分析:與N組相比,Ifenprodil組、MD組與MD+Ifenprodil組非剝奪眼側(cè)較N組NR2A m RNA表達增多(t=-2.746,P0.05;t=-3.932,P0.05;t=-3.511,P0.05)。MD組NR2B m RNA表達減少(t=-3.932,P0.05),Ifenprodil組與MD+Ifenprodil組較N組右側(cè)視皮層NR2B m RNA相對表達降低(t=4.379,P0.05;t=5.445,P0.05)。結(jié)論:1.視皮層正常發(fā)育時,NMDA受體亞基的表達呈發(fā)育依賴變化,即:NR2A表達增加,NR2B表達減少。單眼形覺剝奪影響NMDA受體亞基表達,剝奪側(cè)視皮層NR2A表達減少,NR2B表達增加。非剝奪側(cè)NR2A表達增加,NR2B表達減少。2.腹腔注射Ifenprodil,可經(jīng)血腦屏障,選擇性作用于視皮層NMDA受體NR2B亞基。3.NMDA受體阻斷劑可以較充分的抑制NR2B亞基的表達,為探索單眼剝奪性弱視機制及藥物治療尋找突破口。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R77

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1 黃江濤;劉深泉;馬在光;;視皮層中神經(jīng)元的同步發(fā)放現(xiàn)象[J];中國生物醫(yī)學工程學報;2009年02期

2 姚軍平;祝芹芳;;視皮層可塑性的分子生物學研究進展[J];中國醫(yī)藥指南;2012年15期

3 李O燦，

本文編號：1267648