發(fā)布時間：2017-12-04 22:22

  本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建TGF β1介導(dǎo)的角膜基質(zhì)ECM纖維化體外三維培養(yǎng)模型的研究

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【摘要】：背景：角膜損傷修復(fù)過程中細胞外基質(zhì)纖維化是角膜瘢痕的形成基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming Growth Factor β1, TGFβ1)引起角膜基質(zhì)過度產(chǎn)生細胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix, ECM)。我們在前期研究工作中構(gòu)建了角膜基質(zhì)三維培養(yǎng)模型,現(xiàn)設(shè)想將TGFβ1添加于該三維培養(yǎng)體系中,達到構(gòu)建角膜基質(zhì)ECM纖維化的體外三維培養(yǎng)模型。目的：構(gòu)建角膜基質(zhì)體外三維培養(yǎng)模型,評估TGFβ1對該三維培養(yǎng)模型中細胞外基質(zhì)纖維化相關(guān)基因表達的影響,確定該三維培養(yǎng)體系是否可以作為角膜基質(zhì)纖維化細胞外基質(zhì)的體外三維培養(yǎng)候選模型。方法：分離牛角膜基質(zhì)細胞,構(gòu)建體外三維培養(yǎng)模型Pellet,根據(jù)培養(yǎng)液成份不同分為3組：(1)對照組：基礎(chǔ)培養(yǎng)液組(DMEM/F12+10%胎牛血清),(2)T1低濃度組：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+TGF-β1 (0.5ng/ml), (3)T1高濃度組：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+TGF-β1 (1ng/ml)。培養(yǎng)2w時用鈣黃綠素／碘化丙啶法(Calcein AM/PI)法進行細胞活性測定；應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time PCR)和蛋白印跡法(Western Blot)檢測培養(yǎng)48h,1w,2w的3組Pellet的a-平滑肌肌動蛋白(α Smooth Muscle Actin, αSMA)、Ⅰ型膠原(Collagen Ⅰ, ColⅠ)、Ⅲ型膠原(Collagen Ⅲ, Col Ⅲ)等基因的表達,并對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：(1)Calcein AM/PI法顯示經(jīng)過2w的培養(yǎng),Pellet絕大多數(shù)細胞存活；(2)αSMA, ColⅠ, Col Ⅲ的mRNA表達：①在培養(yǎng)48h、1w、2w,無論是T1高濃度組和T1低濃度組表達均顯著高于對照組,具有濃度-效應(yīng)關(guān)系；②無論是T1高濃度組和T1低濃度組,Col Ⅲ mRNA合成速率均大于Col I mRNA的合成速率；(3)Western Blot僅在培養(yǎng)后2w檢測到αSMA, ColⅠ, Col Ⅲ的表達。結(jié)論：含0.5ng/ml或1ng/ml的TGFβ1及血清的培養(yǎng)液均可使牛角膜基質(zhì)細胞體外三維培養(yǎng)模型Pellet中的角膜基質(zhì)細胞mRNA水平及蛋白質(zhì)水平上表達αSMA、ColⅠ、Col Ⅲ。該培養(yǎng)體系可作為角膜基質(zhì)ECM纖維化的體外三維培養(yǎng)候選模型。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R772.2

【參考文獻】

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1 李霞;譚少健;;三維培養(yǎng)與角膜基質(zhì)組織工程學(xué)研究進展[J];微創(chuàng)醫(yī)學(xué);2012年04期

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本文編號：1252572