本文關(guān)鍵詞：SB203580對體外培養(yǎng)人胚胎眼鞏膜成纖維細胞的影響

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【摘要】：近視的發(fā)病機制尚未完全闡明,且目前全球范圍內(nèi)并沒有發(fā)現(xiàn)針對近視有效的治療方式及干預(yù)措施。但隨著國內(nèi)外學(xué)者對近視研究的進一步加深,發(fā)現(xiàn)多種生長因子、神經(jīng)遞質(zhì)等通過介導(dǎo)某些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與近視形成及發(fā)展。異常的視覺信號刺激視網(wǎng)膜,引起相應(yīng)的信號因子等表達發(fā)生改變,并將信號傳導(dǎo)至脈絡(luò)膜及鞏膜,最終導(dǎo)致鞏膜重塑、眼軸延長、屈光度改變以致近視形成。鞏膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(tissue inhibitor of metalloproeinases-2,TIMP-2)比例失調(diào),使鞏膜細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)減少流失,尤其是Ⅰ型膠原的減少,導(dǎo)致鞏膜變薄。多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被證明與鞏膜重塑及近視形成密切相關(guān)。P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路屬于MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路家族,在豚鼠鞏膜組織及體外培養(yǎng)的人胚胎眼鞏膜成纖維細胞(Human fetal scleral fibroblasts,HFSFs)中均檢測到其表達,且在豚鼠實驗性近視眼鞏膜組織中表達增強。本實驗體外培養(yǎng)HFSFs,并使用P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑SB203580對細胞進行干預(yù),擬探討SB203580對HFSFs的影響以及可能與近視發(fā)生機制的關(guān)系。目的觀察不同濃度SB203580對體外培養(yǎng)HFSFs細胞增殖能力、MMP-2、TIMP-2和Ⅰ型膠原m RNA相對表達量的影響,以及Ⅰ型膠原蛋白合成的分布及表達量的變化。探討SB203580對HFSFs細胞的影響,以及SB203580可能對近視發(fā)生發(fā)展過程產(chǎn)生的影響及作用機制。方法體外培養(yǎng)HFSFs,選取5-7代細胞進行實驗。所有細胞分為兩組,對照組及實驗組。實驗組HFSFs接受不同濃度SB203580刺激,分別為0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L;藥物刺激48h。對照組不接受藥物刺激。CCK8法檢測各組細胞增殖情況;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Revers TranscriptionPolymerase Chain Reaction,RT-PCR)法檢測MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型膠原m RNA相對表達量;免疫熒光(Immunofluorescence,IF)法檢測Ⅰ型膠原蛋白分布及表達。結(jié)果1 SB203580對HFSFs細胞增殖的影響藥物干預(yù)48h后CCK8法檢測各實驗組及對照組細胞于450nm波長處吸光值(OD值),對照組OD值0.908±0.020,各實驗組根據(jù)藥物濃度從低到高OD值依次為0.902±0.264、0.900±0.026、0.878±0.040、0.886±0.029、0.883±0.041。各實驗組與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),OD值無明顯變化。2 SB203580對MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型膠原m RNA相對表達量的影響RT-PCR法檢測各組MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型膠原m RNA相對表達量。各實驗組根據(jù)藥物濃度從低到高,MMP-2m RNA相對表達量依次為0.966±0.022、0.920±0.023、0.847±0.027、0.758±0.030、0.704±0.010,與對照組(相對表達量為1)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其相對表達量均有不同程度降低;TIMP-2m RNA相對表達量依次為1.002±0.064、1.013±0.079、1.007±0.086、1.038±0.060、0.990±0.090,與對照組(相對表達量為1)相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其相對表達量無明顯變化;Ⅰ型膠原m RNA相對表達量依次為1.082±0.061、1.162±0.051、1.390±0.017、1.521±0.102、1.732±0.087,與對照組相比,0.1μmol/L實驗組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其余各實驗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Ⅰ型膠原m RNA相對表達量有不同程度的增高。3 SB203580對Ⅰ型膠原的分布及蛋白表達的影響IF法檢測Ⅰ型膠原于對照組及各實驗組均有表達。與對照組相比0.1μmol/L實驗組Ⅰ型膠原表達未見明顯增高,其余各實驗組Ⅰ型膠原表達均有不同程度增高。結(jié)論1.SB203580可在一定濃度范圍內(nèi)抑制MMP-2表達,同時能促進Ⅰ型膠原的合成。2.P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與近視的形成與,其抑制劑SB203580可能在一定程度上干預(yù)近視形成。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R778.11

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本文編號：1252439