本文關(guān)鍵詞：18β-甘草次酸對變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜中CCL11、AQP-1和EOS表達(dá)的影響

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【摘要】：目的①制備Wistar大鼠變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis, AR)模型。②觀察正常大鼠和AR大鼠鼻黏膜中嗜酸粒細(xì)胞趨化因子-1(eotaxin-1, CCL11)、水通道蛋白-1(aquaporin-1, AQP-1)的表達(dá)水平和嗜酸粒細(xì)胞(eosinophil, EOS)的募集程度。③探討18β-甘草次酸(glycyrrhetinic acid, GA)灌胃對AR大鼠癥狀行為學(xué)、鼻黏膜中CCL11、AQP-1的表達(dá)水平和EOS浸潤程度的影響及其相互作用的有關(guān)機(jī)制。方法①建立AR模型：Wistar大鼠,雄,180-220 g,隨機(jī)分為生理鹽水對照組(NC組)、AR無干預(yù)組(AR組)、氯雷他定(loratadine, LOA)干預(yù)組(LOA組)、18β-GA干預(yù)組(18β-GA組)。1-14 d,以Al(OH)3 30mg為免疫佐劑,AR、LOA和18β-GA組大鼠腹腔注射0.3 g OVA(ovalbumin, OVA)和生理鹽水(normal saline, NS)的1 mL混勻液,隔日1次,持續(xù)14天,作為基礎(chǔ)致敏。14-21 d,雙側(cè)鼻腔各滴入2%OVA與NS的混勻液,每次一側(cè)鼻腔50 uL,每日1次,持續(xù)7天,作為鼻腔激發(fā),建立AR大鼠模型。造模過程中,NC組大鼠以同量的NS替代作為對照,方法同其他組,并以被動(dòng)皮內(nèi)過敏反應(yīng)(PCA)實(shí)驗(yàn)及大鼠AR癥狀行為學(xué)表現(xiàn)評(píng)估造模結(jié)果。②灌胃干預(yù)：第21d始LOA和18β-GA組分別給予LOA和18β-GA每日1次灌胃,持續(xù)3周,NC及AR組以同量的NS代替,方法同其他組。③結(jié)果觀察：分別于灌胃干預(yù)1、2、3周后比較各組大鼠AR癥狀變化及行為學(xué)疊加量化評(píng)分；以P-actin作為內(nèi)參,取大鼠鼻黏膜行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測CCL11基因的相對表達(dá)量；用免疫組化(SP)法觀察各組大鼠鼻黏膜中AQP-1的表達(dá)水平；光學(xué)顯微鏡下,通過蘇木精-伊紅(HE)染色觀察鼻黏膜組織結(jié)構(gòu)的變化和每高倍鏡視野(×400)中EOS的數(shù)量。④數(shù)據(jù)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 ①AR模型的鑒定：AR,LOA、18β-GA組大鼠基礎(chǔ)致敏結(jié)束后行PCA實(shí)驗(yàn)均提示陽性,完成鼻腔激發(fā)后,觀察3組大鼠的鼻部癥狀,發(fā)現(xiàn)均有撓鼻、流清水涕和頻繁噴嚏的表現(xiàn),癥狀疊加評(píng)分均高于5分,說明模型制造成功。②與NC、LOA、18β-GA組相比,AR組大鼠在1、2、3周時(shí)均出現(xiàn)典型AR鼻部癥狀,行為學(xué)疊加量化評(píng)分高于5分,鼻黏膜中CCL11 mRNA、AQP-1的表達(dá)水平和EOS的浸潤程度較NC組顯著增高(P0.05)。③各時(shí)間點(diǎn),LOA組大鼠的鼻部癥狀較AR組明顯減輕,行為學(xué)疊加量化評(píng)分、鼻黏膜中CCL11 mRNA的相對表達(dá)量、AQP-1的平均光密度值和EOS的浸潤程度均顯著低于AR組(P0.05)。④18β-GA組大鼠1周時(shí),上述各項(xiàng)檢測結(jié)果與AR組比較下降(P0.05),但比LOA組高(P0.05),2周后各結(jié)果均接近于LOA組、NC組(P0.05)。結(jié)論①本研究以O(shè)VA作為過敏原,完成了Wistar大鼠AR模型的制備。②正常大鼠鼻腔黏膜有少量的CCL11、AQP-1和EOS分布；在OVA致敏的AR大鼠模型中,鼻腔黏膜出現(xiàn)慢性炎癥改變,表現(xiàn)為典型的AR癥狀,鼻黏膜中CCL11、AQP-1的表達(dá)水平明顯增高的同時(shí),EOS在鼻腔黏膜的募集程度亦隨之增加。③與LOA灌胃比較,18β-GA灌胃干預(yù)AR大鼠,能夠明顯改善AR癥狀,恢復(fù)鼻黏膜組織結(jié)構(gòu)的異常改變,并能降低CCL11、AQP-1在鼻黏膜的分泌和EOS的募集,最終對AR的炎癥反應(yīng)起到抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R765.21

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本文編號(hào)：1225540