本文關(guān)鍵詞：維生素C保護(hù)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的相關(guān)機(jī)制研究

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【摘要】：目的研究氧化應(yīng)激狀態(tài)下維生素C作為抗氧化劑對視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用以及維生素C和SIRT1之間的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法以人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-19(ARPE-19)細(xì)胞為研究對象,分為空白對照組,無維生素C組(0μmol),低濃度維生素C組(20μmol),中等濃度維生素C組(100μmol)和高濃度維生素C組(500μmol)。培養(yǎng)過程中添加不同濃度維生素C之后對細(xì)胞加以H2O2(100μmol)處理12 h或24 h建立氧化應(yīng)激模型。利用MTT法檢測ARPE-19細(xì)胞存活率,膜聯(lián)蛋白V-FITC凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡以及活性氧(ROS)試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)活性氧的改變。使用SIRT1靶向siRNA進(jìn)行SIRT1敲除,細(xì)胞使用預(yù)定濃度的維生素C進(jìn)行孵育,并分為空白對照組,陰性對照組,siRNA干擾組。先用10 m M SIRT1激動劑白藜蘆醇(RSV)和5 m M SIRT1抑制劑煙酰胺(NA)對細(xì)胞進(jìn)行孵育,然后加入H2O2(100μmol)處理12 h或24 h,RT-PCR及Western blot方法檢測SIRT1、p53和Foxo3基因表達(dá)水平。結(jié)果經(jīng)過H2O212 h處理后,較高濃度的維生素C(500μmol)與較低濃度(20μmol)的維生素C無明顯保護(hù)作用,而中等濃度的維生素C(100μmol)能夠顯著提高細(xì)胞的生存能力(P0.05),減少ARPE-19細(xì)胞的凋亡數(shù)量(P0.05),降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。維生素C的作用可上調(diào)H2O2作用后SIRT1轉(zhuǎn)錄因子和應(yīng)激反應(yīng)因子(p53和Foxo3)的表達(dá)。RSV及NA可分別上調(diào)及下調(diào)維生素C對H2O2刺激的ARPE-19細(xì)胞存活力,細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響。RT-PCR及Western blot結(jié)果表明:維生素C濃度增加時,SIRT1表達(dá)增加,p53和Foxo3基因表達(dá)水平升高。敲除或上調(diào)SIRT1表達(dá),可相應(yīng)明顯地增加或減少p53和Foxo3轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)論維生素C可降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平,減少ARPE-19細(xì)胞凋亡,起到抗氧化損傷保護(hù)作用,有望成為年齡相關(guān)性黃斑變性的有效治療方法。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院眼科;內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【基金】：內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院院內(nèi)基金項(xiàng)目(項(xiàng)目編號:201540)
【分類號】：R774
【正文快照】： 年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degen-eration,AMD)是導(dǎo)致老年人視力缺損的最常見原因[1,2]。研究表明,抗氧化物可以減緩AMD的發(fā)病進(jìn)程[3]。在AMD發(fā)病機(jī)制中,氧化應(yīng)激起到了重要作用[1,4]。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epitheli-um,RPE)通過補(bǔ)充營養(yǎng)素為感

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 安小玲,李軍,董紅,唐杰;糖尿病視網(wǎng)膜病變中氧化應(yīng)激反應(yīng)的研究及應(yīng)用[J];眼科新進(jìn)展;2004年06期

2 姜巖,何世坤;氧化應(yīng)激反應(yīng)對視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞遷移的影響及相關(guān)機(jī)制的探討[J];中華眼科雜志;2005年02期

3 李兵,范賢勇,俸家富,李少林;鼻咽癌患者血清銅與氧化應(yīng)激反應(yīng)的相關(guān)性研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

4 ;[J];;年期

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本文編號：1219935