本文關(guān)鍵詞：小鼠胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基體外促進(jìn)人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的研究

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【摘要】：目的觀察小鼠胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基(mouse embryonic stem cells conditioned medium,ESC-CM)是否可以在體外促進(jìn)人角膜內(nèi)皮細(xì)胞(human corneal endothelial cells,HCECs)的增殖。方法利用角膜內(nèi)皮后彈力層組織塊方法進(jìn)行原代培養(yǎng)P0 HCECs。實(shí)驗(yàn)組使用含有25%ESC-CM的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),對(duì)照組使用普通角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液(corneal endothelium medium,CEM)進(jìn)行培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)鑒定HCECs;倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)及萌出時(shí)間;Western Blot、免疫組織化學(xué)法觀察HCECs的泵相關(guān)功能蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1)及Na~+-K~+-ATP酶的表達(dá)。Giemsa染色細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)、免疫組織化學(xué)及流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)Ki67陽(yáng)性率的方法比較HCECs的增殖能力;流式細(xì)胞學(xué)方法檢查細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況。Western Blot和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白P21的水平,初步探討其可能的作用機(jī)制。結(jié)果原代培養(yǎng)時(shí),25%ESC-CM組培養(yǎng)的HCECs P2細(xì)胞爬出,細(xì)胞形態(tài)呈典型多角形結(jié)構(gòu)。CEM在P2時(shí)細(xì)胞形態(tài)變大,失去了多角形結(jié)構(gòu)。25%ESC-CM組和CEM組均表達(dá)ZO-1、Na~+-K~+-ATP酶。25%ESC-CM組的Ki67陽(yáng)性率、克隆形成數(shù)量、進(jìn)入到細(xì)胞周期S期和G2期的比例均高于CEM組(均為P0.05)。25%ESC-CM組的細(xì)胞凋亡數(shù)量和P21陽(yáng)性率均低于CEM組(均為P0.05)。結(jié)論 25%ESC-CM組可顯著促進(jìn)HCECs增殖;其作用可能是通過(guò)抑制P21蛋白的表達(dá)和抑制細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的,為HCECs體外大量擴(kuò)增提供了一種新方法。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科;
【分類號(hào)】：R77
【正文快照】： 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞(human corneal endothelialcells,HCECs)因其泵-漏功能在維持角膜透明性中發(fā)揮重要作用,但在體HCECs很難再生,一些角膜內(nèi)皮細(xì)胞(corneal endothelial cells,CECs)功能障礙性疾病常會(huì)導(dǎo)致視力的下降甚至喪失,角膜移植手術(shù)是治療此類疾病的重要方法[1],但角膜供

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