本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外向內(nèi)耳毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化的研究

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【摘要】：感音神經(jīng)性耳聾(sensorineural hearing loss,SNHL)是目前最普遍的感覺(jué)器官功能障礙類(lèi)型,可出現(xiàn)在任何年齡階段的人群中,表現(xiàn)出不同程度的聽(tīng)力及言語(yǔ)功能障礙。全世界范圍內(nèi)大約有3.6億人存在中度以上的聽(tīng)力障礙,其中大部分為感音神經(jīng)性耳聾。環(huán)境和遺傳因素均會(huì)導(dǎo)致內(nèi)耳毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)元的變性、損傷,造成永久性的聽(tīng)力障礙。由于成年哺乳動(dòng)物內(nèi)耳中毛細(xì)胞的再生能力十分有限,因此如果能夠通過(guò)誘導(dǎo)其他器官來(lái)源的干細(xì)胞向內(nèi)耳感覺(jué)上皮方向分化,再通過(guò)細(xì)胞移植的方法修復(fù)受損的內(nèi)耳結(jié)構(gòu),進(jìn)而可以達(dá)到改善聽(tīng)覺(jué)的目的。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)不僅具有干細(xì)胞自我更新和多向分化的共性,還具有來(lái)源廣泛,無(wú)倫理學(xué)爭(zhēng)議,低免疫源性,以及一定的免疫調(diào)節(jié)功能等特性,可向成骨細(xì)胞,軟骨細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞,肝細(xì)胞等多種細(xì)胞類(lèi)型分化,廣泛應(yīng)用于組織工程和細(xì)胞替代治療。本研究擬在體外條件下探討h UC-MSCs向內(nèi)耳毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)條件,為干細(xì)胞內(nèi)耳移植治療感音神經(jīng)性耳聾提供新的種子細(xì)胞。目的在體外探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)定向誘導(dǎo)分化為毛細(xì)胞樣細(xì)胞的可行性和方法。方法1、使用實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)有方法,原代分離培養(yǎng)、獲得h UC-MSCs;取培養(yǎng)至3-5代的h UC-MSCs在添加DMEM/F12+N2+B27+EGF+b FGF瓊脂糖包被的抗貼壁培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)3-5天,誘導(dǎo)細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞方向分化,用免疫熒光檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物Nestin的表達(dá)情況。2、將誘導(dǎo)后的神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)移到明膠(gelatin)特殊包被的培養(yǎng)瓶中,在DMEM/F12+N2+B27+EGF+ATRA培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-4周,進(jìn)一步向內(nèi)耳毛細(xì)胞樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化,免疫熒光及q RT-PCR檢測(cè)毛細(xì)胞標(biāo)記物Math1、Myosin VIIa,Brn3c的表達(dá)情況。結(jié)果1、體外h UC-MSCs誘導(dǎo)后形成神經(jīng)球樣結(jié)構(gòu),并表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物Nestin。2、經(jīng)誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)干細(xì)胞在內(nèi)耳感覺(jué)上皮誘導(dǎo)培養(yǎng)基中經(jīng)2-4周的分化后表達(dá)Math1、Myosin VIIa,Brn3c等毛細(xì)胞標(biāo)記物,向內(nèi)耳毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化。結(jié)論人臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)能夠在體外跨胚層轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)干細(xì)胞,并可進(jìn)一步定向誘導(dǎo)分化為內(nèi)耳毛細(xì)胞樣細(xì)胞,可能作為理想的種子細(xì)胞用于感音神經(jīng)性耳聾的內(nèi)耳移植治療。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R764.43

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本文編號(hào)：1184440