本文關(guān)鍵詞：S1PR在不同退變程度的椎間盤組織中的表達(dá)及其意義

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【摘要】：研究背景及目的慢性下腰痛在各類人群中都普遍存在[1]。現(xiàn)有的研究表明,椎間盤的退行性病變是慢性腰痛的主要病因[2,3],因此關(guān)于椎間盤退變的研究是脊柱外科基礎(chǔ)研究的熱點。椎間盤的退變與多種因素相關(guān),包括壓力,老化,炎癥,營養(yǎng)途徑等。隨著退變的進(jìn)展,椎間盤的組織學(xué)特點發(fā)生變化:纖維環(huán)組織出現(xiàn)細(xì)小裂隙甚至破損,髓核組織脫水,血管和神經(jīng)組織滲透,破壞了原有的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài);軟骨終板的鈣化導(dǎo)致原有營養(yǎng)途徑受阻[4];從功能和生理學(xué)的角度分析不難發(fā)現(xiàn),這些組織學(xué)變化也促進(jìn)了退變的進(jìn)展。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),隨著退變的進(jìn)展,髓核組織細(xì)胞外基質(zhì)成分和細(xì)胞表型也發(fā)生改變。作為椎間盤的功能基礎(chǔ),基質(zhì)成分的變化被認(rèn)為是椎間盤退變的標(biāo)志[5]。目前的研究發(fā)現(xiàn):退變的椎間盤組織中,髓核基質(zhì)中親水性蛋白聚糖和II型膠原的減少,I型膠原和蛋白聚糖分解產(chǎn)物增加[6];與細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)的炎癥因子以及各類分解酶(比如IL-1β/TNF-α/MMP/ADAMT)表達(dá)上調(diào)[7,8]。近年來,與椎間盤特殊內(nèi)環(huán)境、細(xì)胞生理功能相關(guān)的基因或者蛋白被越來越多的發(fā)現(xiàn)、研究和報道,它們有的可以作為椎間盤組織退變的標(biāo)志,有的細(xì)胞的正常代謝或者退變的相關(guān)病理進(jìn)展中發(fā)揮作用;這些研究成果可以幫助我們更深刻的認(rèn)識椎間盤的退變,進(jìn)而找到更好的診療方法。1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一種重要的脂質(zhì)介質(zhì),是鞘氨醇激酶(SPHK)的催化作用下鞘氨醇磷酸化生成的。它參與細(xì)胞遷移、分化、炎癥反應(yīng)以及血管生成等多種生物反應(yīng)[9-11]。S1P通過與其受體結(jié)合發(fā)揮作用,目前已經(jīng)確定的S1P受體(S1PR)有5種亞型,都屬于G蛋白偶聯(lián)型受體。值得注意的是,在人類軟骨細(xì)胞中,S1P可以通過活化其受體抑制白介素1β(IL-1β)引發(fā)的基質(zhì)降解作用,由此推斷S1PR的活化可能成為骨關(guān)節(jié)炎的治療作用靶點[12,13]�？紤]到髓核細(xì)胞和軟骨細(xì)胞相似的生物學(xué)特點,S1P及其受體在椎間盤的退變的治療和控制中表現(xiàn)出一定的應(yīng)用前景。但是,有關(guān)S1PR在椎間盤組織中的表達(dá)以及S1P在椎間盤退變中的作用尚未見文獻(xiàn)報道。在本研究中,我們首先證實S1PR在髓核組織的表達(dá);進(jìn)而對比了不同退變的程度的髓核細(xì)胞中S1PR的表達(dá)水平,探討S1PR與椎間盤退變中可能的相關(guān)性;在此基礎(chǔ)上我們對其在椎間盤退變中的作用進(jìn)行了初步探索。材料方法1.標(biāo)本的收集。本研究已獲得新橋醫(yī)院倫理審查委員會批準(zhǔn)并與患者簽署書面知情同意文件。納入標(biāo)準(zhǔn)實驗組:椎間盤退行性疾病(包括腰椎間盤突出、腰椎管狹窄或者腰椎滑脫)的患者;對照組:青少年椎體骨折的患者,無椎間盤退變影像學(xué)表現(xiàn)得腰椎骨折患者的椎間盤標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn):并發(fā)感染、腫瘤、免疫性疾病或者其他全身性疾病的病例。手術(shù)標(biāo)本收集之后,分成兩部分分別進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)實驗(包括蘇木素-伊紅染色、藏紅-固綠染色免疫組織化學(xué))和細(xì)胞學(xué)實驗(包括髓核細(xì)胞的分離培養(yǎng)、Real-time PCR和western-blot實驗);根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)的評價標(biāo)準(zhǔn)[14],從組織學(xué)角度對每一例椎間盤標(biāo)本退變的程度進(jìn)行評價和分級,并分析了組織分級與priffmann分級[15]的一致性。2.S1PR在不同退變程度的椎間盤中的表達(dá)差異通過免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)的方法明確S1PR在椎間盤組織中的表達(dá)和定位。通過Real-time PCR和western blot評價對比不同程度退變程度的髓核細(xì)胞中S1PR的表達(dá)水平變化。3.S1PR在椎間盤退變中的作用分離培養(yǎng)的髓核細(xì)胞分為3組,即對照組、IL-1β處理組、IL-1β+S1P處理組;通過Real-time PCR和western blot對比3組髓核細(xì)胞中基質(zhì)降解酶:MMP-3和ADAMTS4的表達(dá)水平;不同濃度的S1P分別作用于髓核細(xì)胞,通過ELISA和阿利新藍(lán)染色對比處理前后髓核細(xì)胞中蛋白聚糖(aggrecan)的表達(dá)水平的變化。結(jié)果1.組織學(xué)評分可以有效的對椎間盤退變的程度進(jìn)行評價,與影像學(xué)priffmann分級結(jié)果基本吻合。2.免疫組織化學(xué)證實:髓核組織中S1PR1/2/3都有表達(dá),S1PR2的表達(dá)陽性率略高于S1PR1/3;免疫細(xì)胞化學(xué)實驗證實:S1PR在髓核細(xì)胞中主要定位在細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)中。3.Real-time PCR和western blot實驗對比不同程度退變的髓核細(xì)胞中S1PR的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)在嚴(yán)重退變的髓核細(xì)胞中S1PR1/2/3的表達(dá)水平明顯下降。4.IL-1β可以明顯上調(diào)髓核細(xì)胞中MMP-3和ADAMTS4的表達(dá)水平:S1P可以抑制的IL-1β的效用使髓核細(xì)胞中這兩種基因的表達(dá)降低;ELISA和阿利新藍(lán)染色發(fā)現(xiàn)S1P處理后髓核細(xì)胞中AGG的含量下降。結(jié)論1.髓核組織可表達(dá)S1PR1/2/3,其中S1PR2的表達(dá)陽性率最高,并主要定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)2.嚴(yán)重退變的髓核細(xì)胞中S1PR1/2/3表達(dá)水平明顯下降,表明S1PR的表達(dá)可能與髓核的退變相關(guān)3.在髓核細(xì)胞中S1P/S1PR可以抑制IL-1β引起的基質(zhì)降解效應(yīng),S1P處理髓核細(xì)胞,下調(diào)了AGG的表達(dá)水平,這些結(jié)果說明S1PR及其相關(guān)信號在髓核退變中發(fā)揮了作用。
【關(guān)鍵詞】：椎間盤 椎間盤退變 髓核細(xì)胞 1-磷酸鞘氨醇 1-磷酸鞘氨醇受體 白介素1-β
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R681.5
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 1-磷酸鞘氨醇受體不同退變程度的椎間盤中的表達(dá)差異15-32
• 2.1 材料與方法15-25
• 2.2 結(jié)果25-29
• 2.3 討論29-32
• 第三章 S1P/S1PR信號軸在椎間盤退變中的作用32-38
• 3.1 材料與方法32-33
• 3.2 結(jié)果33-35
• 3.3 討論35-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述 共培養(yǎng)獲取髓核組織工程種子細(xì)胞的應(yīng)用及探討43-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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5 劉瑞平;徐南偉;;退變兔髓核細(xì)胞和正常髓核細(xì)胞生物學(xué)特性的比較[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2009年21期

6 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;沈雁;;體外培養(yǎng)人正常椎間盤髓核細(xì)胞與退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)性狀比較:可以為干預(yù)退變髓核細(xì)胞提供最佳時機(jī)嗎?[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年28期

7 王鋒;朱悅;;影響髓核細(xì)胞表達(dá)水通道蛋白1相關(guān)因素的實驗研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年06期

8 牛建鵬;衛(wèi)陳剛;任龍韜;;髓核細(xì)胞及其生物力學(xué)研究進(jìn)展[J];臨床醫(yī)藥實踐;2011年08期

9 李鋒生;梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;體外培養(yǎng)人退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)性狀[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年28期

10 滿孝旭;馬迅;關(guān)曉明;張麗;;肝細(xì)胞生長因子對體外培養(yǎng)的人退變髓核細(xì)胞生物學(xué)活性影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年24期

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1 趙秀寶;馬信龍;馬劍雄;李稚君;李爽;孫曉雷;;周期性牽張力聯(lián)合灌注培養(yǎng)對大鼠髓核細(xì)胞影響的研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第30次學(xué)術(shù)年會暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2010年

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5 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;BMP-2對人退變椎間盤髓核細(xì)胞影響的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會論文選集[C];2011年

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