發(fā)布時(shí)間：2017-10-07 02:06

  本文關(guān)鍵詞：大鼠脊髓損傷后PDXK與UCHL-1的表達(dá)變化及相互關(guān)系的研究

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【摘要】：目的探討大鼠脊髓損傷(SCI)后,吡哆醛激酶(Pyridoxal Kinase,PDXK)和泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin-C-terminal hydrolase-L1,UCHL-1)的表達(dá)變化對(duì)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能的影響及其相互之間的關(guān)系。方法采用Allen’s打擊法制備大鼠脊髓損傷模型。成年SD雌性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組,脊髓鈍挫傷(SCI)12h、1d、5d、14d組。在脊髓損傷3d、7d和28d組,制備慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)(PDXK-ORF-LV)組。通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析PDXK和UCHL-1的相互關(guān)系。BBB評(píng)分觀察脊髓損傷后大鼠后肢的運(yùn)動(dòng)功能;尼氏染色觀察脊髓損傷后以及慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)后的脊髓灰質(zhì)前角內(nèi)組織的一般形態(tài)變化;免疫組織化學(xué)染色方法定位觀察PDXK和UCHL-1在脊髓前角灰質(zhì)的分布及其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的變化;WB定量檢測(cè)PDXK和UCHL-1在脊髓損傷后蛋白相對(duì)含量變化;qRT-PCR定量檢測(cè)脊髓損傷后PDXK的mRNA和UCHL-1的mRNA相對(duì)表達(dá)量的變化。結(jié)果BBB評(píng)分結(jié)果顯示脊髓損傷后大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能立即消失處于完全癱瘓狀態(tài),脊髓損傷3d后有所恢復(fù),直至第28d時(shí)BBB評(píng)分仍低于Sham組。尼氏染色顯示脊髓損傷后大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元形態(tài)出現(xiàn)萎縮,神經(jīng)元數(shù)量呈減少趨勢(shì)。免疫組織化學(xué)方法結(jié)果顯示PDXK免疫陽(yáng)性產(chǎn)物定位于脊髓前角的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的胞漿,少量表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi);UCHL-1免疫陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于脊髓前角的神經(jīng)元胞漿、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的胞漿內(nèi);PDXK和UCHL-1在神經(jīng)元的免疫陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)呈下降趨勢(shì),與Sham組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。WB結(jié)果顯示脊髓損傷后PDXK和UCHL-1的蛋白含量表達(dá)趨勢(shì)均是下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。qRT-PCR結(jié)果顯示PDXK與UCHL-1的mRNA表達(dá)水平在脊髓損傷后12h、1d、5d、14d都是下降的,與Sham組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。脊髓損傷后PDXK的mRNA表達(dá)量于術(shù)后12h開始下降,且在第5d下降達(dá)到最低值。UCHL-1 mRNA的表達(dá)水平持續(xù)下降非常明顯,在第5d表達(dá)水平降到最低,第14d開始其表達(dá)明顯稍有上調(diào),但其表達(dá)水平明顯低于Sham組。此外,在慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)大鼠脊髓損傷模型中,免疫組織化學(xué)方法結(jié)果顯示,與Vector組比較,PDXK-ORF-LV組UCHL-1的免疫陽(yáng)細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)目增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P0.05);qRT-PCR結(jié)果顯示,與Vector組比較,PDXK-ORF-LV組UCHL-1的mRNA表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.PDXK與UCHL-1在脊髓損傷后表達(dá)下調(diào);PDXK和UCHL-1位于脊髓前角的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。隨著BBB評(píng)分的升高,PDXK與UCHL-1的表達(dá)也有所提高,結(jié)果提示PDXK與UCHL-1可能影響脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。2.生物信息學(xué)分析結(jié)果提示PDXK與UCHL-1存在間接聯(lián)系3.利用慢病毒介導(dǎo)PDXK過(guò)表達(dá),結(jié)果提示在脊髓損傷后PDXK過(guò)表達(dá)使UCHL-1在脊髓組織中的表達(dá)上調(diào),PDXK與UCHL-1的相互作用可能對(duì)大鼠脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)有影響。
【關(guān)鍵詞】：脊髓損傷 PDXK UCHL-1
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R651.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 1 實(shí)驗(yàn)材料14-19
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 試劑配制16-19
• 2 實(shí)驗(yàn)方法19-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組19-20
• 2.2 脊髓損傷動(dòng)物模型建立20-22
• 2.3 脊髓損傷動(dòng)物模型神經(jīng)行為學(xué)（BBB）評(píng)分22-24
• 2.4 石蠟切片制作24-26
• 2.5 石蠟切片Nissl染色26
• 2.6 石蠟切片免疫組織化學(xué)染色26-28
• 2.7 Western blotting分析28-30
• 2.8 qRT-PCR30-32
• 2.9 生物信息學(xué)分析32-33
• 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-53
• 3.1 第一部分脊髓損傷后PDXK與UCHL-1 的表達(dá)對(duì)后肢運(yùn)動(dòng)功能的影響33-44
• 3.1.1 脊髓損傷后大鼠運(yùn)動(dòng)功能(BBB)評(píng)分下降33-34
• 3.1.2 Nissl染色觀察脊髓損傷后的一般形態(tài)變化34-36
• 3.1.3 脊髓損傷后PDXK和UCHL-1 在脊髓前角灰質(zhì)的定位表達(dá)及陽(yáng)性細(xì)胞變化分析36-41
• 3.1.4 脊髓損傷后脊髓中PDXK和UCHL-1 的蛋白相對(duì)表達(dá)變化分析41-42
• 3.1.5 脊髓損傷后脊髓中PDXK和UCHL-1 的基因表達(dá)變化分析42-44
• 3.2 第二部分慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)調(diào)節(jié)脊髓損傷后UCHL-1 的表達(dá)44-53
• 3.2.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析44-45
• 3.2.2 qRT-PCR鑒定慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)大鼠脊髓損傷模型45-46
• 3.2.3 慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)脊髓損傷后的Nissl染色46-48
• 3.2.4 慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)脊髓損傷后UCHL-1 在脊髓前角灰質(zhì)的定位及陽(yáng)性細(xì)胞變化分析48-51
• 3.2.5 慢病毒介導(dǎo)的PDXK過(guò)表達(dá)脊髓損傷后UCHL-1 的基因表達(dá)變化分析51-53
• 4 討論53-59
• 4.1 大鼠脊髓損傷后一般形態(tài)變化53
• 4.2 PDXK和UCHL-1 對(duì)大鼠脊髓損傷后大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的影響53-55
• 4.3 PDXK與UCHL-1 的相互關(guān)系55-57
• 4.4 PDXK過(guò)表達(dá)上調(diào)脊髓損傷后UCHL-1 的表達(dá)57-59
• 5 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 文獻(xiàn)綜述65-73
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 附錄一覽表73-75
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果75-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：986278